【摘要】：目的:研究紫草素預處理對大鼠肢體缺血再灌注損傷中炎性介質、凋亡基因的表達及大體形態(tài)的影響,探討紫草素預處理對骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用及相關作用機制,為探索缺血再灌注損傷新的治療理念提供理論依據。方法:取南華大學動物實驗中心提供健康SD雄性大鼠40只,體重350-370g/只,飼養(yǎng)期間自由進食。實驗動物隨機分為4組,每組10只�？瞻捉M(A)10只,術前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實驗動物不做其他任何處理。假實驗組(B):術前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實驗分離股動脈,不予以動脈夾夾畢。對照組(C):術前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實驗分離股動脈,動脈夾夾畢股動脈,4小時后松動脈夾行血液灌注。實驗組(D):術前7天每天尾靜脈滴注紫草素(10g/kg),溶劑共100ml,實驗分離股動脈,動脈夾夾畢股動脈,4小時后松動脈夾行血液灌注。常規(guī)飼養(yǎng)適應后,四組術前禁飲禁食6小時。20%烏拉坦0.07ml/10g腹腔內注射麻醉。取右下腹正中切口,按實驗分組內容行分離股動脈,同號動脈夾選擇性夾閉股動脈,松動脈夾共恢復血流灌注24小時等實驗操作,制成缺血再灌注模型。同時尾靜脈取血,檢測造模成功后0min-24H時IL-1、IL-6、TNF-α、HMGB1、ICAM-1等介質指標。4組大鼠分別在實驗結束后進行解剖,取實驗側腓腸肌肌肉標本半定量檢測Bcl-2-m RNA和Bax-m RNA轉錄水平,腓腸肌HE染色,光鏡下觀察組織細胞大體形態(tài)學及細胞變化。以SPSS 20.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析,所有數據均以?X±s表示,樣本均數比較采用單因素方差分析,P0.05為有顯著統(tǒng)計學意義。結果:1.炎性介質結果:A、B兩組炎性介質水平基本維持正常穩(wěn)定狀態(tài),C組HMGB1、ICAM-1水平和炎性細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平較其他組均高(P0.05),D組血清HMGBl、ICAM-1水平和炎性細胞因子TNF-α、IL-6、IL-1等水平較C組顯著降低(P0.05)。2.RT-PCR結果:A、B兩組骨骼肌Bcl-2基因表達明顯強于Bax,Bcl-2/Bax的比值降低,(A與B組比較,P0.05);C組再灌注后Bcl-2基因表達降低、Bax基因表達進一步增高,Bcl-2/Bax的比值進一步降低,(C組與A組,C組與B組比,P0.01)。用紫草素預處理后,Bcl-2基因表達較C組增高、Bax基因表達較C組下降,Bcl-2/Bax的比值大于C組(D組與C組比,P0.05)3.HE染色光鏡結果:A:骨骼肌肌纖維規(guī)則排列,肌細胞未見明顯變性、水腫、斷裂;周圍組織間質無明顯紅細胞滲出及炎細胞浸潤。B:骨骼肌肌纖維規(guī)則排列,肌細胞未見明顯變性、水腫、斷裂;周圍組織間質無明顯紅細胞滲出及炎細胞浸潤。C:骨骼肌肌纖維變性水腫、斷裂,部分肌細胞溶解,肌細胞破壞嚴重,未見明顯肌細胞結構,斷裂溶解肌纖維間可見大量炎性細胞和紅細胞浸潤;D:骨骼肌肌纖維排列欠規(guī)則,仍可見水腫變性,但未見斷裂溶解,肌細胞明顯腫脹,肌纖維中炎性細胞浸潤及紅細胞滲出不明顯,但仍可部分聚集于損傷血管區(qū)域。結論:1.紫草素預處理后可通過下調HMGB1、ICAM-1的表達抑制炎癥反應,減輕四肢骨骼肌缺血再灌注損傷。2.紫草素預處理后可通過增強抗凋亡基因Bcl-2的表達和抑制促凋亡基因Bax的表達來降低凋亡的發(fā)生,減輕四肢骨骼肌缺血再灌注損傷。
【圖文】：

6.3 肢體缺血應用紫草素預處理后， D 組 Bcl-2 基因 mRNA 表達比 A 組降低(P<0. 05)，，而 D 組 Bax 基因 mRNA 表達明顯增強(P<0.05);6.4 肢體缺血應用紫草素預處理后，D 組 Bcl-2 基因 mRNA 較 C 組表達增高(P<0. 05)，Bax 基因 mRNA 表達較 C 組開始降低(P<0. 05)，表 6. Bcl-2、Bax、β-actin 基因 RT-PCR 產物電泳條帶光強度值 值項目 A 組 B 組 C 組 D 組Bcl-2/β-actin 1.7828±0.0532 1.6932±0.1325 0.9132±0.0774 1.5283±0.0538Bax/β-actin 1.1325±0.0512 1.0998±0.0653 2.4958±0.1938 1.9866±0.0532Bcl-2/Bax 1.6019±0.0109 1.5932±0.0309 0.3978±0.0092 0.8672±0.0101
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2617504