【摘要】：目的:從實(shí)驗(yàn)角度證實(shí)龜羚帕安丸對移植入PD大鼠模型腦內(nèi)的NS Cs的增殖、遷移、分化具有促進(jìn)作用,試通過觀察龜羚帕安丸對NSCs移植后PD大鼠模型行為學(xué)、中腦黑質(zhì)內(nèi)移植神經(jīng)干細(xì)胞存活數(shù)以及Nur r1、Shh蛋白表達(dá)的影響探討其可能作用機(jī)制。為運(yùn)用中藥提高NSCs移植治療PD的臨床療效提供可靠根據(jù)。方法:選定大鼠右側(cè)黑質(zhì)為坐標(biāo)點(diǎn)定點(diǎn)注射6-OHDA 12μg以建立P D大鼠模型,手術(shù)后14d,腹腔定量注射APO(0.15mg/kg)后觀測,造模成功的標(biāo)準(zhǔn)是術(shù)后的大鼠能夠恒定的向左側(cè)旋轉(zhuǎn),且在連續(xù)的30分鐘內(nèi)旋轉(zhuǎn)總?cè)?shù)超過210次。將PD大鼠隨機(jī)的分為六組(中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組、美多芭組、模型組、空白組)。取孕14天的雌鼠,麻醉后打開腹腔暴漏子宮,無菌環(huán)境下取出胎鼠,剝離出胎鼠的海馬組織,制作為單細(xì)胞懸液,使用無血清體外培育技術(shù)來培養(yǎng)及傳代,免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定所培養(yǎng)細(xì)胞的Nestin蛋白表達(dá)情況,以明確其為NSCs。鑒定完成之后,將傳代培養(yǎng)得到的NSCs制為細(xì)胞懸液,移植手術(shù)的前一天,于懸液中加入Brd U對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,之后調(diào)節(jié)懸液,使?jié)舛瘸蔀?×10~6/L。抽取5μl生理鹽水注射入空白組大鼠右側(cè)紋狀體,其余5組抽取等量NSCs懸液注射入大鼠的相同部位。中藥高、中、低組大鼠分別以龜羚帕安丸3.6g/Kg、1.8g/Kg、0.9g/Kg的劑量用生理鹽水溶解后灌胃,美多芭組以美多芭50mg/kg的劑量用生理鹽水溶解后灌胃,模型組及空白組用生理鹽水等量灌胃。4周后仍以APO誘導(dǎo),觀察大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)變化,然后處死大鼠,剝離中腦黑質(zhì),制作為石蠟切片,用免疫組化法檢測大鼠中腦黑質(zhì)顯示Brd U陽性的細(xì)胞量及Nurr1、Shh蛋白表達(dá)情況,使用LEICA顯微照相系統(tǒng)與Digiscope-Analysis顯微圖像采集分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量研究,采用SPSS18.0軟件處理分析相關(guān)數(shù)據(jù)。結(jié)果:培養(yǎng)的傳代細(xì)胞球經(jīng)鑒定后,顯示有特異性的NSCs標(biāo)志物N estin陽性表達(dá)。各治療組及模型組大鼠相關(guān)癥狀均改善,旋轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯減少,龜羚帕安丸高、中、低劑量組大鼠中腦黑質(zhì)內(nèi)移植NSCs存活數(shù)以及Nurr1、Shh蛋白表達(dá)較之模型組及空白組均明顯升高(P0.05)。結(jié)論:體外培養(yǎng)的細(xì)胞明確是NSCs,移植NSCs療法能夠有效改善PD大鼠的癥狀,而龜羚帕安丸能夠提高NSCs移植的療效。其作用機(jī)制可能是上調(diào)了Nurr1及Shh的表達(dá)水平,而Nurr1與Shh的高表達(dá)為細(xì)胞提供了有益的微環(huán)境,增強(qiáng)了細(xì)胞抗凋亡能力,并且進(jìn)一步促進(jìn)了多種相關(guān)神經(jīng)營養(yǎng)因子的分泌,增加了NSCs移植后存活率,進(jìn)一步促進(jìn)其分化為正常的DA神經(jīng)元。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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4 Aizman A. ,Finger P.T.,Shabto ,張自峰;鈀103(103 Pd)敷貼放射治療伴有視網(wǎng)膜脫離的局限性脈絡(luò)膜血管瘤[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘.眼科學(xué)分冊;2005年04期

5 吳若林;耿小平;;影響老年人胰十二指腸切除術(shù)(PD)早期預(yù)后的術(shù)前和術(shù)中因素[J];肝膽外科雜志;2012年02期

6 朱s，

本文編號：2614817