【摘要】：隨著醫(yī)療技術(shù)水平提升,1型糖尿病患者生存期明顯延長,其并發(fā)癥逐漸成為人們關(guān)注的對象,而1型糖尿病骨損害便是其中之一。1型糖尿病多為青少年或兒童起病,針對該人群骨質(zhì)疏松癥的治療經(jīng)驗及藥物有限。白藜蘆醇(RESV)是一種中藥單體,研究發(fā)現(xiàn)其具有優(yōu)良的抗氧化和抗炎作用,能夠促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化,研究表明,白藜蘆醇在修復(fù)糖尿病大鼠骨損傷中發(fā)揮積極作用。目的:本研究旨在通過構(gòu)建1型糖尿病骨質(zhì)疏松動物模型,探討白藜蘆醇對于初發(fā)1型糖尿病骨損害的影響,為臨床治療1型糖尿病導(dǎo)致骨損害提供有價值的的思路和啟示。方法:將24只非肥胖糖尿病(NOD)小鼠分為4組:糖尿病組(DM組,n=6):糖尿病發(fā)病后用0.9%氯化鈉溶液灌胃;胰島素組(INS組,n=6):發(fā)病后每日予甘精胰島素皮下注射治療,劑量為0.2-0.4U/kg,根據(jù)當(dāng)日血糖進(jìn)行調(diào)整;白藜蘆醇組(RESV組,n=6):于發(fā)病后第3天予RESV 200mg/kg·d灌胃;飼養(yǎng)8周后,未發(fā)病的NOD小鼠作為正常對照組(N組,n=6)。治療8周后,內(nèi)眥靜脈取血,留取血清,雙抗體夾心法(ELISA法)檢測血清酸性磷酸酶(TRACP)。將小鼠脫頸處死,右側(cè)股骨使用Micro-CT觀察骨組織微觀結(jié)構(gòu);左側(cè)股骨10%乙二胺四乙酸(EDTA)脫鈣后,制作石蠟切片進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)染色;RT-PCR檢測骨組織相關(guān)基因OCN,Runx2,PPAR-G,TRAP的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)Micro-CT結(jié)果顯示:與正常組相比糖尿病組骨密度(BMD)降低(P=0.015),骨體積百分比(BV/TV)降低(P=0.049);與糖尿病組相比,白藜蘆醇治療組骨密度(BMD)升高(P=0.008),骨體積百分比(BV/TV)升高(P=0.014)、骨表面密度(BS/TV)增加(P=0.016),結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(SMI)升高(P=0.029);與胰島素治療組相比,白藜蘆醇治療組骨小梁數(shù)目(Tb.N.)明顯增加(P=0.018)。骨組織Micro-CT圖片3D重建顯示:糖尿病組骨小梁形態(tài)模糊,數(shù)量減少、變細(xì)、中斷,殘端游離,小梁間距增寬。胰島素治療組及白藜蘆醇治療組骨小梁相互連接成立體網(wǎng)狀,小梁表面光滑,小梁間距小。(2)骨組織切片ALP染色可見,糖尿病組骨小梁結(jié)構(gòu)雜亂、變細(xì),小梁間距大,胰島素治療組及白藜蘆醇治療組骨小梁結(jié)構(gòu)完整連續(xù),與糖尿病組相比,骨小梁結(jié)構(gòu)完整,相對增粗,骨小梁間距小。比較各組間成骨細(xì)胞數(shù)量,結(jié)果顯示,糖尿病組成骨細(xì)胞明顯減少,胰島素治療組成骨細(xì)胞數(shù)目略多于白藜蘆醇治療組。(3)實時熒光定量PCR(RT-PCR)結(jié)果顯示:糖尿病組TRAP、PPAR-G相對表達(dá)量增加(P=0.032;P=0.013);與糖尿病組相比,胰島素治療組TRAP、PPAR-G相對表達(dá)量降低(P=0.025;P=0.017),RUNX2相對表達(dá)量表達(dá)量增加(P=0.030);白藜蘆醇治療組TRAP、PPAR-G表達(dá)量降低(P=0.013;P=0.028),RUNX2表達(dá)量增加(P=0.034)。結(jié)論:1型糖尿病引起的成骨細(xì)胞數(shù)量減少,成骨活性減弱,破骨活性增強,骨髓干細(xì)胞脂肪化是繼發(fā)骨損害的主要原因。白藜蘆醇可以增加成骨細(xì)胞數(shù)量及成骨細(xì)胞活性、減少骨吸收,對治療繼發(fā)于糖尿病的骨損害有積極作用。
【圖文】：

圖 1 各組間骨組織 Micro-CT 參數(shù)注： BMD：骨密度；BMC：骨礦物質(zhì)含量； SMI維校準(zhǔn)骨小梁厚度；Calib.Tb.Sp.3D：三維校準(zhǔn)骨小梁小梁數(shù)目。2.2 骨組織 Micro-CT 平片從骨組織 2D 平片縱切面上觀察（圖 2）。股骨頭處骨小梁結(jié)構(gòu)雜亂，骨髓腔相對擴(kuò)大。與骨致密，股骨頭處骨小梁數(shù)量多、規(guī)則。圖 2C骨小梁數(shù)量明顯明顯減少。與 DM 組相比，，RE則，間距小。圖 2 骨組織 Micro-CT 平片圖像

圖 1 各組間骨組織 Micro-CT 參數(shù)注： BMD：骨密度；BMC：骨礦物質(zhì)含量； SMI：股維校準(zhǔn)骨小梁厚度；Calib.Tb.Sp.3D：三維校準(zhǔn)骨小梁分離小梁數(shù)目。2.2 骨組織 Micro-CT 平片從骨組織 2D 平片縱切面上觀察（圖 2）。與正股骨頭處骨小梁結(jié)構(gòu)雜亂，骨髓腔相對擴(kuò)大。與 D骨致密，股骨頭處骨小梁數(shù)量多、規(guī)則。圖 2C 可骨小梁數(shù)量明顯明顯減少。與 DM 組相比，RESV 則，間距小。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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