【摘要】：目的:研究青蒿素的一種衍生物青蒿琥酯的抗肝癌細胞作用,發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯誘導(dǎo)自噬的作用機制,探究青蒿琥酯通過IRGM受體增強自噬并抑制腫瘤增殖的作用機制,為新型腫瘤化療輔助治療提供一個新的方向,能夠有效提高藥物抗腫瘤療效,降低耐藥性。方法:1.通過MTT檢測法得出ART對肝癌細胞的抑制率,并用Graphpad Prism程序軟件計算出IC50值。2.根據(jù)所測得的IC50值對細胞進行分組,倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),hochest染色觀察細胞核變化,流式細胞儀檢測ART(150uM)處理SK細胞的周期和凋亡。3.Western blot分析ART處理SK細胞的LC3、P62、PARP1蛋白,倒置熒光顯微鏡觀察GFP-LC3熒光斑點數(shù)。4.用自噬抑制劑3-MA與ART分別處理以及聯(lián)合處理細胞,Western blot分析細胞內(nèi)LC3、P62、PARP1、PI3K、P-MTOR、IRGM蛋白變化,倒置熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)GFP-LC3斑點數(shù)。5.利用siRNA干擾技術(shù)敲低IRGM受體的表達,Western blot分析細胞內(nèi)LC3、P62、PARP1、IRGM 蛋白表達。結(jié)果:1.繪制了 ART處理細胞的時間依賴性和藥物濃度依賴性的抑制率曲線,根據(jù)Graphpad Prism計算的到的ART處理細胞24h的IC50值為150uM。2.分為150uM的ART藥物處理組和對照組,實驗組細胞偽足消失形態(tài)變圓,細胞皺縮,細胞內(nèi)容物增多,細胞核固縮。ART處理組SK細胞周期阻滯在G1期和GO期,早期凋亡明顯增多。3.ART 加藥組的 LC3II 增多(P0.05),P62 表達下降(P0.05),細胞 GFP-LC3斑點明顯增多(P0.01)。4.3-MA 處理組細胞內(nèi) LC3II、PI3K、PARP1 減少(P0.05),p-MTOR、P62 增多(P0.05),IRGM顯示無統(tǒng)計學(xué)意義。GFP-LC3與對照組相比減少(P0.05);而3-MA與ART聯(lián)合應(yīng)用組表現(xiàn)為LC3II、P62、PARP1、PI3K、P-MTOR變化無統(tǒng)計學(xué)意義,IRGM增多(P0.05),并且GFP-LC3變化無統(tǒng)計學(xué)意義。5.SiIRGM 轉(zhuǎn)染細胞 LC3Ⅱ、IRGM、PARP1 降低(P0.05),P62 升高(P0.05)。SiIRGM轉(zhuǎn)染細胞與ART聯(lián)合處理細胞LC3Ⅱ、IRGM、PARP1、P62蛋白變化均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯能通過多種信號通路調(diào)節(jié)自噬從而抑制肝癌細胞的增殖,其中青蒿琥酯對PI3K和MTOR途徑的調(diào)節(jié)已經(jīng)較為廣泛,因此本文主要研究的是青蒿琥酯通過誘導(dǎo)IRGM受體從而活化自噬來發(fā)揮抗腫瘤作用,為抗腫瘤機制的研究提供一個新的靶點。
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2613510