【摘要】：背景帕金森病(Parkinson's disease,PD)發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢,且臨床治療面臨著巨大挑戰(zhàn)。越來越多的證據(jù)揭示了腸道菌群參與了帕金森病的發(fā)生發(fā)展。中藥單體白藜蘆醇(Resveratrol,RV)具備抗炎、抗腫瘤、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)等多種藥理作用,是一種防治帕金森病的潛在藥物。然而,目前關(guān)于白藜蘆醇對帕金森病相關(guān)癥狀及腸道菌群的作用尚不明確。目的探討白藜蘆醇對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)聯(lián)合丙磺舒(Probenecid,P)誘導(dǎo)的帕金森病小鼠相關(guān)癥狀及腸道菌群的影響。方法1.50只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成以下五組:空白對照組(CK,正常飲食)、白藜蘆醇對照組(RV,每日灌胃白藜蘆醇30 mg/kg)、帕金森病模型組(PD,MPTP/P誘導(dǎo)的帕金森病)、白藜蘆醇防治組(PD_RV,實(shí)驗(yàn)第一天每天灌胃白藜蘆醇30mg/kg)、白藜蘆醇治療組(PD_RV6,實(shí)驗(yàn)第六周開始灌胃白藜蘆醇30 mg/kg)。2.通過轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和爬桿實(shí)驗(yàn)對小鼠的神經(jīng)行為學(xué)進(jìn)行測試,采用免疫組化技術(shù)檢測小鼠腦黑質(zhì)和紋狀體的病變情況,綜合神經(jīng)行為學(xué)和腦組織病變情況評估小鼠的發(fā)病情況以及白藜蘆醇對帕金森病的保護(hù)和治療作用。3.測量小腸傳導(dǎo)率評估白藜蘆醇對帕金森病小鼠的胃腸道功能的保護(hù)作用。4.通過測量結(jié)腸長度,利用Real-time PCR技術(shù)定量檢測結(jié)腸上皮細(xì)胞中炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的豐度,評估白藜蘆醇對緩解帕金森病小鼠腸道炎癥的效果。5.通過檢測結(jié)腸組織中ZO-1蛋白的表達(dá)量和血清內(nèi)毒素的含量評估白藜蘆醇對帕金森病小鼠腸道黏膜屏障的改善效果。6.提取實(shí)驗(yàn)第0、5、8周小鼠糞便樣品中微生物基因組DNA,采用Real-time PCR定量分析總細(xì)菌、丁酸鹽產(chǎn)生菌的豐度演變規(guī)律。通過高通量測序技術(shù)檢測第8周糞便樣品中細(xì)菌16S rRNA基因多樣性,分析各組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)差異,闡明腸道菌群與白藜蘆醇防治帕金森病的關(guān)系。結(jié)果1.從小鼠的體重變化趨勢可知造模藥物和白藜蘆醇的應(yīng)用對小鼠體重沒有影響。2.神經(jīng)行為學(xué)測試結(jié)果表明帕金森病小鼠存在顯著的運(yùn)動(dòng)障礙,免疫組織化學(xué)結(jié)果表明帕金森病小鼠腦組織存在病理改變,白藜蘆醇的應(yīng)用可顯著改善帕金森病小鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙,延緩腦組織的病理改變。3.與正常小鼠相比,帕金森病小鼠存在腸道功能障礙、輕度結(jié)腸炎癥和腸道黏膜屏障受損癥狀,白藜蘆醇的干預(yù)可顯著改善上述癥狀。4.基于16S rRNA的高通量測序結(jié)果表明,帕金森病小鼠存在顯著的腸道菌群結(jié)構(gòu)失調(diào):與CK組小鼠相比,門水平上帕金森病小鼠腸道菌群厚壁菌門(Firmicutes)和Deferribacteres豐度顯著增加(P0.05),擬桿菌門(Bacteroidetes)豐度顯著降低(P0.05);科水平上帕金森病小鼠腸道疣微菌科(Ruminococcaceae)和脫鐵桿菌科(Deferribacteraceae)豐度顯著增加(P0.05),普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)豐度顯著降低(P0.05);在屬水平上帕金森病小鼠腸道Prevotellaceae_UCG-001顯著降低(P0.05),Oscillibacter顯著升高(P0.05)。白藜蘆醇的干預(yù)可在一定程度上逆轉(zhuǎn)這種改變,即白藜蘆醇防治帕金森病過程中對腸道菌群有一定的影響。結(jié)論1.白藜蘆醇可有效改善帕金森病小鼠相關(guān)癥狀;2.白藜蘆醇在防治帕金森病過程中對腸道菌群有一定的影響,可能通過增加丁酸鹽產(chǎn)生菌和普雷沃氏菌的豐度延緩帕金森病的發(fā)展。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)方法1 實(shí)驗(yàn)分組處理及帕金森病小鼠模型的建立50 只雄性 C57BL/6 小鼠，7-8 周齡，SPF 級，體重 22-24 g，購自北京維通利華動(dòng)物技術(shù)有限公司。隨機(jī)分成 5 組，正常對照組（CK，每日灌胃無菌水），白醇對照組（RV，每日灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg），帕金森病模型組（PD，每日灌菌水），白藜蘆醇防治的模型組（PD_RV，每日灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg），白醇治療的模型組（PD_RV6，實(shí)驗(yàn)第六周開始灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg）。模型組實(shí)驗(yàn)前 5 周每周三、周日上午腹腔注射丙磺舒（250 mg/kg 小鼠體重）和 MPTP（g/kg 小鼠體重），連續(xù) 5 周；對照組注射上述體積的生理鹽水。

圖 2. 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)定在木制底座上的一個(gè)高 50 cm，直徑形，，木棍外層包有兩層紗布以防止小鼠行爬桿實(shí)驗(yàn)，爬桿實(shí)驗(yàn)參照 Heng 等的，記錄小鼠自桿頂爬至桿底部后肢著地少 10 min，如果小鼠出現(xiàn)中途停頓或
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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