發(fā)布時(shí)間：2020-04-03 06:49

【摘要】：目的:從細(xì)胞及蛋白水平探討阿克替苷(ACT)通過p38MAPK信號(hào)通路影響肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的具體機(jī)制,為研發(fā)以ACT作為有效成分的抗HCC藥物建立理論根據(jù)。方法:選用Hep G2肝癌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,用CCK-8法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)明確ACT抑制肝癌細(xì)胞增殖的最佳作用濃度(ARHBC)及時(shí)間。將Hep G2肝癌細(xì)胞分為空白對(duì)照組(加入普通完全培養(yǎng)基)、ARHBC組、SB 203580(p38MAPK抑制劑)+ARHBC組和SB 203580組。用CCK-8法檢測(cè)ACT對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響,用Western blot檢測(cè)p38MAPK、P-p38MAPK、p53和caspase3蛋白的表達(dá),用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)Hep G2肝癌細(xì)胞的凋亡進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:隨著ACT作用濃度的增加,Hep G2肝癌細(xì)胞貼壁和排列緊密性較差,ACT作用的Hep G2肝癌細(xì)胞較正常Hep G2肝癌細(xì)胞縮短、變圓,形態(tài)逐漸不飽滿,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡,并且細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)漂浮的死細(xì)胞。隨著ACT作用濃度的增加以及作用時(shí)間的延長Hep G2肝癌細(xì)胞的存活率降低,CCK-8結(jié)合流式細(xì)胞檢測(cè)得出ACT最佳的促進(jìn)HCC凋亡濃度為80mg/L,最佳作用時(shí)間為48h。分組實(shí)驗(yàn)后在4組Hep G2肝癌細(xì)胞中ARHBC組細(xì)胞存活率最低,凋亡率最高,與空白對(duì)照組比較,均有顯著差異(P0.05)。4組Hep G2肝癌細(xì)胞中p38MAPK表達(dá)無差異,但ARHBC組中P-p38MAPK、p53和caspase3蛋白表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組,有顯著差異(P0.05)。結(jié)論:ACT通過p38MAPK信號(hào)通路抑制Hep G2肝癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡。
【圖文】：

通過其差異的顯著性可以看出，，隨著藥物作用時(shí)間的延長，趨勢(shì)。由此說明，ACT 在一定濃度范圍內(nèi)對(duì) HepG2 肝癌細(xì)胞有隨著 ACT 濃度增加及作用時(shí)間的延長而增強(qiáng)。表 1.ACT 對(duì) HepG2 肝癌細(xì)胞存活率的影響不同作用時(shí)間克替苷濃度（mg/L） 24h 48h 72h0 0.96 0.06 0.99 0.07 0.97 0.040 0.84 0.06 0.65 0.06* 0.53 0.0580 0.48 0.05** 0.39 0.04** 0.27 0.05120 0.14 0.01*** 0.20 0.02*** 0.09 0.01160 0.10 0.02*** 0.12 0.03*** 0.05 0.02度為 0 時(shí)比較，*：P <0.05，**：P <0.01，***：P <0.001

不同濃度ACT培養(yǎng)24h后HepG2肝癌細(xì)胞凋亡率
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2613082