【摘要】：目的:非酒精性脂肪性肝病作為一種常見(jiàn)的代謝性疾病,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命健康。自噬(autophagy)通過(guò)“自我清除”的方式,雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的一些損壞性蛋白或細(xì)胞器后,然后將其送入酵母和植物體內(nèi)的液泡中或動(dòng)物體內(nèi)的溶酶體中進(jìn)行進(jìn)一步的降解,從而得到循環(huán)利用的一個(gè)過(guò)程,對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要作用。姜黃素是從草本植物姜黃中提取的天然色素,也是其活性成分。非酒精性脂肪性肝病變性肝細(xì)胞存在自噬現(xiàn)象,且自噬在脂肪酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷過(guò)程中可能發(fā)揮保護(hù)作用,姜黃素又能夠誘導(dǎo)許多腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬。因此,探討姜黃素是否通過(guò)誘導(dǎo)變性肝細(xì)胞自噬,進(jìn)而清除非酒精性脂肪性肝病肝細(xì)胞內(nèi)脂肪聚集,達(dá)到保護(hù)肝細(xì)胞作用,為臨床應(yīng)用姜黃素治療非酒精性脂肪肝提供新的依據(jù)。方法:應(yīng)用高脂飲食復(fù)制NAFLD小鼠模型,觀(guān)察姜黃素對(duì)NAFLD小鼠模型肝組織病理的影響及小鼠肝組織中LC3-Ⅱ蛋白水平。應(yīng)用10%醫(yī)用脂肪乳復(fù)制NAFLD細(xì)胞模型通過(guò)油紅O染色觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)脂滴變化,Western blot檢測(cè)細(xì)胞中自噬泡標(biāo)志分子LC3-Ⅱ蛋白質(zhì)表達(dá)的影響,吖啶橙染色后在熒光顯微鏡下觀(guān)察不同濃度不同時(shí)間姜黃素干預(yù)后自噬細(xì)胞變化以及電鏡下觀(guān)察自噬小體的變化,明確姜黃素對(duì)非酒精性脂肪肝細(xì)胞自噬作用的影響。結(jié)果:與NAFLD模型組相比,姜黃素處理組NAFLD小鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常,無(wú)明顯纖維化形成,輕度肝細(xì)胞脂肪變性及少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);與NAFLD模型組相比,姜黃素組中肝臟組織內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表達(dá)明顯上調(diào)。不同濃度姜黃素干預(yù)脂肪細(xì)胞,光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察結(jié)果表明50μmol/L姜黃素對(duì)脂肪細(xì)胞抑制明顯,且50μmol/L的姜黃素作用于L-02細(xì)胞6 h,12 h后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)LC3的表達(dá)量明顯上調(diào),而24 h組肝細(xì)胞LC3表達(dá)沒(méi)有繼續(xù)增加,說(shuō)明姜黃素主要促進(jìn)脂肪變性L(fǎng)-02細(xì)胞早期發(fā)生自噬;吖啶橙染色后在熒光顯微鏡下觀(guān)察,不同濃度姜黃素干預(yù)后,自噬細(xì)胞染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒,自噬發(fā)生時(shí)間主要集中在6 h,12 h,說(shuō)明姜黃素誘導(dǎo)早期細(xì)胞自噬。結(jié)論:姜黃素可能成為非酒精性脂肪肝病的有效防治藥物,其作用機(jī)制與促進(jìn)細(xì)胞自噬有關(guān)。
【圖文】：

第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 姜黃素對(duì) NAFLD 小鼠模型肝組織病理的影響① 對(duì)照組：可觀(guān)察到肝組織的生理結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉及匯管區(qū)的結(jié)構(gòu)好且無(wú)脂肪變性、壞死及明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，未見(jiàn)纖維間隔的形成。② NAFLD模型組：可觀(guān)察到肝細(xì)胞偏腫大，，且部分呈現(xiàn)氣球樣變，細(xì)胞核周?chē)梢杂^(guān)察到較多大小不等的脂肪滴，肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的脂肪變性；肝竇擴(kuò)大纖維間隔形成，部分有假小葉形成；可觀(guān)察到有大量炎細(xì)胞的浸潤(rùn)。③ 姜黃素組：可觀(guān)察到輕度的肝細(xì)胞脂肪變性及少量炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)；肝小的結(jié)構(gòu)基本正常，且無(wú)明顯的纖維化形成。

圖 2 姜黃素對(duì)肝組織 LC3-Ⅱ蛋白質(zhì)表達(dá)的影響（Control 正常對(duì)照組, Model 模型組, Curcumin 姜黃素組）02 細(xì)胞油紅 O 染色生長(zhǎng)期的 L-02 細(xì)胞，在 10%醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血-1640 完全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，孵育細(xì)胞 24 h，48 h，油紅鏡下觀(guān)察。正常肝細(xì)胞胞核圓形，邊緣清晰，胞漿內(nèi)未見(jiàn)明顯肪乳誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞，細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)可見(jiàn)紅色脂滴ol/L 姜黃素處理脂肪變性肝細(xì)胞 24 h，48 h，胞漿內(nèi)可見(jiàn)紅色 3）
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2612599