【摘要】：陳皮屬藥食同源植物,具有理氣寬中,行滯消脹的功效。常用于治療胸悶氣短、肚脹疼痛、積食不化、吐痰不暢、胃下垂、脫肛及子宮下垂等。蕓香柚皮苷和柚皮苷是陳皮中主要的黃酮類成分,多年研究發(fā)現(xiàn),它具有多種生理活性如抗炎、抗癌和抗過(guò)敏等。目前,通常采用體內(nèi)和體外兩種實(shí)驗(yàn)方式對(duì)黃酮類化合物的抗過(guò)敏活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。本文采用RBL-2H3細(xì)胞株初步考察蕓香柚皮苷與柚皮苷的抗過(guò)敏活性。結(jié)果表明,與柚皮苷相比,蕓香柚皮苷對(duì)β-HEX釋放的抑制作用更強(qiáng)。通過(guò)建立動(dòng)物模型考察蕓香柚皮苷對(duì)OVA誘導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘的影響。結(jié)果表明,蕓香柚皮苷能通過(guò)影響T細(xì)胞免疫應(yīng)答實(shí)現(xiàn)其對(duì)OVA誘導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘的干預(yù)作用。實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)論:1、蕓香柚皮苷與柚皮苷對(duì)RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的抑制作用。(1)MTT法考察蕓香柚皮苷和柚皮苷對(duì)RBL-2H3細(xì)胞增殖活性的影響;在0.3-80μmol/L的濃度范圍內(nèi),蕓香柚皮苷與柚皮苷對(duì)RBL-2H3的細(xì)胞增殖活性無(wú)顯著性影響;(2)考察蕓香柚皮苷和柚皮苷對(duì)抗原誘導(dǎo)RBL-2H3細(xì)胞活化脫顆粒釋放β-HEX的影響;在0.3-30μmol/L的濃度范圍內(nèi),蕓香柚皮苷和柚皮苷抑制IgE抗原誘導(dǎo)RBL-2H3細(xì)胞活化脫顆粒釋放β-HEX呈濃度依賴性,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,與柚皮苷相比,蕓香柚皮苷對(duì)RBL-2H3細(xì)胞活化脫顆粒釋放β-HEX具有更強(qiáng)的抑制作用;(3)采用ELISA法考察經(jīng)蕓香柚皮苷作用后,RBL-2H3細(xì)胞上清中IL-4的變化;結(jié)果顯示,在3.125-12.5μmol/L的濃度范圍內(nèi),蕓香柚皮苷抑制RBL-2H3細(xì)胞活化脫顆粒釋放IL-4效果顯著。2、建立動(dòng)物模型考察蕓香柚皮苷抗過(guò)敏活性(1)考察了蕓香柚皮苷對(duì)OVA誘導(dǎo)過(guò)敏性哮喘小鼠模型血清中抗體水平的影響,結(jié)果表明,蕓香柚皮苷能夠顯著降低小鼠血清中IgE、IgG1的水平;(2)考察了小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞因子的水平,結(jié)果表明,蕓香柚皮苷能夠顯著降低IL-4、IL-5的水平;升高小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ;(3)考察了蕓香柚皮苷對(duì)脾臟細(xì)胞中T細(xì)胞分化的影響,結(jié)果表明,蕓香柚皮苷對(duì)CD4~+和CD8~+T細(xì)胞在脾臟淋巴細(xì)胞中含量百分比的影響,結(jié)果表明,蕓香柚皮苷可以顯著降低脾臟中CD4~+細(xì)胞的百分比,顯著升高脾臟中CD8~+細(xì)胞的百分比。(4)考察了蕓香柚皮苷抑制過(guò)敏性哮喘的機(jī)制,結(jié)果表明,蕓香柚皮苷能夠抑制OVA誘導(dǎo)的p44/42和JNK通路的激活,使P-p44/42和P-JNK的表達(dá)下降。綜上所述,在體外方面,與柚皮苷相比,蕓香柚皮苷可以更有效抑制RBL-2H3細(xì)胞釋放β-HEX,并且降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4水平,初步判斷蕓香柚皮苷具有較好的體外抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的活性;在體內(nèi)方面,通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),證明蕓香柚皮苷顯著降低血清中IgE和IgG1水平,降低肺泡灌洗液中Th2分泌的典型炎性因子IL-4和IL-5水平,升高Th1分泌的細(xì)胞因子IFN-γ,對(duì)脾臟中CD4~+和CD8~+T細(xì)胞比例有影響,并且可以抑制OVA誘導(dǎo)的p44/42和JNK通路的激活,對(duì)OVA誘導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘具有一定的干預(yù)作用。
【圖文】：

圖 2.1 蕓香柚皮苷對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響Fig.2.1 The influence of Naringin of cell viabilityMTT 法是用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞活性常用的方法。噻唑藍(lán)(MTT）是一種染料，，其能夠被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原為甲佨（Formazan）并沉積在細(xì)胞中。由于甲佨的生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比，所以可以通過(guò)甲佨的生成量反映活細(xì)胞的數(shù)量[68]。由圖 2.1 可知，當(dāng)蕓香柚皮苷的濃度為 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 時(shí)，細(xì)胞活力分別為 99.5 5.9%、99.7 5.8%、98.23 7.4%、97.90 4.4%、97.35 6.5%、95.56 4.3%、94.58 4.5%、89.42 2.1%。由此可知當(dāng)蕓香柚皮苷的濃度低于 80 μmol/L 時(shí)，對(duì)細(xì)胞的活力影響不大。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L劑量范圍研究蕓香柚皮苷對(duì)抗原誘導(dǎo) RBL-2H3 細(xì)胞活化脫顆粒 β-HEX 釋放的影響。

圖 2.2 柚皮苷對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響Fig.2.2 The influence of Naringin of cell viability由圖 2.2 可知，當(dāng)柚皮苷的濃度為 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 時(shí)，細(xì)胞活力分別為 105.20 3.16%、102.68 1.17%、102.46 0.75%99.89 0.63%、101.56 1.09%、100.33 1.49%、96.82 1.01%、89.42 1.39%當(dāng)柚皮苷的濃度低于 100 μmol/L 時(shí)，對(duì)細(xì)胞的活力影響不大。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L 劑量范圍研究蕓香柚皮苷對(duì)抗原誘導(dǎo) RBL-2H3 細(xì)胞活化脫顆粒 β-HEX 釋放的影響。2.4.3 蕓香柚皮苷對(duì)抗原誘導(dǎo) RBL-2H3 釋放β-HEX 的影響
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2610889