【摘要】：目前,腫瘤的治療是世界醫(yī)學研究的重點,而抗腫瘤藥物及其遞送系統(tǒng)的研究則是腫瘤治療的關(guān)鍵。在對抗腫瘤中藥有效成分與傳統(tǒng)藥物的研究中,由于其穩(wěn)定性差、代謝過快、體內(nèi)生物利用度低而限制了它們的應用,而對于基因藥物來說,同樣它們存在體內(nèi)不穩(wěn)定,易被核酸酶降解,細胞攝取率低等問題使臨床應用受到限制。因此,建立和尋求合適的載藥系統(tǒng)成為了發(fā)展抗腫瘤中藥有效成分、傳統(tǒng)藥物和基因藥物實現(xiàn)安全有效的腫瘤治療共同的需求。在前期的研究中,結(jié)合(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)和甲氧基聚乙二醇-聚己內(nèi)酯MPEG-PCL制備了混合型納米粒(DMP)。然而,DMP作為基因載體僅限于質(zhì)粒DNA的遞送,DMP用于siRNA的遞送從未被報道過。在本文中,通過優(yōu)化DMP的制備工藝,制備得到適于遞送siRNA的DMP,并用DMP遞送MCL1 siRNA(DMP/siMCL1)和Bcl-xl siRNA(DMP/siBcl-xl)至C26細胞中對其體外抗小鼠結(jié)腸癌活性進行研究。姜黃素具有顯著的抗腫瘤活性,但由于其穩(wěn)定性差、難溶于水、體內(nèi)生物利用度低而限制了姜黃素在體內(nèi)的抗腫瘤作用。因此,本研究用聚合物納米粒MPEG-PCL包裹姜黃素制備成姜黃素納米粒,改善姜黃素的水溶性并提高其作用效果。首先對制備的陽離子納米粒DMP的相關(guān)參數(shù)指標來對其理化性能特征進行評價:粒徑分布、電位大小、復合siRNA能力、細胞毒性高低以及血清條件下的穩(wěn)定性和遞送能力。通過對DMP的制備工藝進行篩選得到最佳制備工藝,制備所得的納米粒具有46.4nm的平均粒徑和44.1mV的zeta電位,帶正電荷,均勻分散在水溶液中,多分散系數(shù)PDI為0.215。通過凝膠阻滯實驗證明DMP具有負載siRNA的能力。細胞毒性實驗表明,與PEI25K相比,DMP具有較低的細胞毒性。在體外血清轉(zhuǎn)染實驗中DMP顯示低細胞毒性和高轉(zhuǎn)染效率,有血清轉(zhuǎn)染組與無血清轉(zhuǎn)染組的轉(zhuǎn)染效率差別不大,DMP的轉(zhuǎn)染效率不受血清濃度的影響。其次,本實驗使用MCL1 siRNA和Bcl-xl siRNA作為治療靶點,研究它們體外抗小鼠結(jié)腸癌活性。在體外基因沉默表達檢測實驗中,用MCL1 siRNA和Bcl-xl siRNA對C26細胞進行處理,通過熒光定量PCR法對其相應表達的mRNA的含量進行測定,結(jié)果表明與空白對照組相比,經(jīng)過MCL1siRNA和Bcl-xl siRNA轉(zhuǎn)染的實驗組,C26細胞表達的mRNA含量水平明顯減少。在體外抗腫瘤活性的研究中,通過MTT實驗和克隆形成實驗來對細胞增殖能力進行考察。MTT實驗結(jié)果表示,DMP/siMCL1與DMP/siBcl-xl的細胞生存率均低于對應相同濃度的DMP組,表明DMP/siMCL1與DMP/siBcl-xl能抑制C26細胞的生長和增殖能力。在平板克隆形成實驗中,DMP/siMCL1和DMP/siBcl-xl具有較高的克隆形成抑制率,對C26細胞的生長和增殖顯示出較強的抑制作用。在凋亡實驗中,我們用流式法對體外抗腫瘤細胞凋亡進行定量的測定,DMP/siMCL1與DMP/siBclxl的細胞凋亡率明顯的高于相應的對照組與其他實驗組,具有誘導細胞凋亡的作用。Western Blot實驗表明,相對于control、DMP以及DMP/Scramble siRNA組,DMP/siBcl-xl組明顯的降低了Bcl-xl的蛋白水平的表達,且高濃度的DMP/siBclxl組作用更加明顯。姜黃素具有顯著的抗腫瘤活性,但由于其穩(wěn)定性差、代謝過快、體內(nèi)生物利用度低而限制了姜黃素在體內(nèi)的抗腫瘤作用。為了實現(xiàn)以DMP納米粒為基礎(chǔ)的中藥有效成分與基因藥物的聯(lián)合使用增強抗腫瘤的治療效果,我們使用MP納米粒包裹姜黃素改善其水溶性。所制備的姜黃素納米粒的平均粒徑38.65nm,呈電中性,多分散系數(shù)PDI為0.386,可均勻分散在水溶液中,平均包封率達92.8%,平均載藥量為1.5%。本課題中,DMP具有傳輸不同siRNA的能力,能安全高效地將MCL1 siRNA以及Bcl-xl siRNA分別遞送至C26細胞中。DMP/siMCL1和DMP/siBcl-xl具有體外抗小鼠結(jié)腸癌活性,能夠抑制小鼠結(jié)腸癌細胞的生長與增殖。姜黃素納米粒具有良好的理化性能與體外抗小鼠結(jié)腸癌活性�；贒MP,通過評價其遞送基因藥物siRNA與中藥有效成分姜黃素的相關(guān)活性,為DMP裝載姜黃素制備的納米粒與siRNA進行協(xié)同治療以增強抗腫瘤治療效果奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學 2018 屆碩士學位論文制備所得的陽離子納米粒 DMP 外觀均勻，無沉淀，平均粒徑為 46.4nm，可完全分散在水溶液中，多分散系數(shù) PDI 為 0.215，zeta 電位為 44.1mV。粒徑和zeta 電位結(jié)果如圖 3, 4 所示

11圖 4 DMP 納米粒的 zeta 電位Fig 4 Zeta potential of DMP nanoparticles1.3.2.2 陽離子納米粒 DMP 的穩(wěn)定性試驗結(jié)果將制備好的陽離子納米粒 DMP 存放于 4℃中，分別在 24 小時，48 小時，96 小時后觀察 DMP 的狀態(tài)，結(jié)果表明 DMP 在 4℃條件下存放 96 小時后仍然呈透明狀，，外觀均勻，無沉淀，表明 DMP 具有較高的穩(wěn)定性。
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;更正[J];中國醫(yī)學影像技術(shù);2016年03期

2 張鴻;亓鵬;司少艷;馬文敏;;次聲對小鼠結(jié)腸癌生長影響及其機制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2013年15期

3 劉秀均,李毅,甄永蘇;博安霉素對小鼠結(jié)腸癌及其肝轉(zhuǎn)移的抑制作用[J];藥學學報;2001年01期

4 黃曉明;練磊;鄒一豐;何曉生;吳小劍;譚偉艷;蘭平;;白細胞介素10和轉(zhuǎn)化生長因子β1與小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];中華普通外科學文獻(電子版);2012年03期

5 劉曼曼;余濤;陳e

本文編號：2609769