【摘要】：目的:通過把益氣化瘀清熱方及其拆方作用于實驗性IgA腎病大鼠模型,檢測實驗中各組大鼠腎組織表達mTOR信號通路下游信號蛋白S6及4EBP1的磷酸化表達,進一步探討mTOR信號通路在IgA腎病中的作用機制以及益氣化瘀清熱方及其拆方對IgA腎病的作用機理。方法:以SPF級雄性Wistar大鼠作為實驗研究載體,將它們采用隨機分組法分為6組:空白組、益氣組、模型組、清熱組、化瘀組、復(fù)方組。采用牛血清白蛋白(BSA)灌胃400mg/kg兩天一次,持續(xù)8周,頸部皮膚下注射四氯化碳(CCL_4)0.1ml+蓖麻油0.3ml每周一次,持續(xù)9周,第6周經(jīng)尾靜脈注射脂多糖(LPS)0.25mg/kg的實驗方法制作IgA腎病模型。實驗中運用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測mTOR信號通路下游信號蛋白S6及4EBP1的磷酸化表達部位,并對其進行半定量分析;運用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測各組大鼠腎皮質(zhì)pS6及p-4EBP1表達量,從而進一步了解益氣化瘀清熱方的作用機制。結(jié)果:1在pS6蛋白的表達方面1.1磷酸化的S6蛋白在IgA腎病大鼠模型腎臟組織中主要在腎小球足細胞及壁層上皮細胞中表達,腎小管中散在表達。1.2免疫組化結(jié)果顯示,各實驗組pS6蛋白表達量模型組最高,益氣組次之,其次依次為化瘀組、清熱組、復(fù)方組、空白組,其中化瘀組與復(fù)方組及清熱組與復(fù)方組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,各實驗組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。1.3 Western blot結(jié)果顯示,各實驗組磷酸化的S6蛋白表達量模型組最高,益氣組次之,化瘀組、清熱組與復(fù)方組最低。結(jié)果同免疫組化結(jié)果一致。2在p-4EBP1蛋白表達方面2.1磷酸化的4EBP1在IgA腎病大鼠模型腎組織中主要在腎皮質(zhì)內(nèi)腎小球足細胞及壁層上皮細胞中表達,腎小管中散在表達。2.2免疫組化結(jié)果顯示,各實驗組p-4EBP1蛋白表達量模型組最高,益氣組、化瘀組、清熱組次之,復(fù)方組、空白組最低,其中益氣組、化瘀組、清熱組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,各實驗組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,空白組亦有散在表達。2.3 Western blot結(jié)果顯示,各實驗組p-4EBP1蛋白表達量模型組最高,其次為益氣組、化瘀組、清熱組,復(fù)方組、空白組最低,其中益氣組、化瘀組、清熱組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),各實驗組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果同免疫組化。結(jié)論:根據(jù)以上實驗我們得知,(1)IgAN中mTOR信號通路被異常激活;(2)益氣化瘀清熱方能通過抑制mTOR的異常活化發(fā)揮治療作用,復(fù)方組作用最強,清熱組、化瘀組次之,益氣組作用最弱;(3)mTOR信號傳導(dǎo)通路下游效應(yīng)蛋白pS6、p-4EBP1在IgA腎病大鼠模型中除在腎小管中表達外,尚在腎小球的足細胞及壁層上皮細胞表達。
【圖文】：

3 各組大鼠 pS6/Tubulin、p-4EBP1/Tubulin 值( x±s)n（只） pS6/Tubulin p-4EBP1/Tubu12 0.5609±0.0158 0.4893±0.10210 1.2174±0.0311●▲1.3102±0.1137●9 0.8439±0.0666●▲0.8734±0.0724●10 0.7378±0.0352●▲△0.8194±0.0476●8 0.6718±0.0235●▲△◇0.8597±0.0532●▲9 0.6160±0.0127▲△◇&0.5456±0.1632▲●P<0.05；與模型組比較▲P<0.05；與益氣組比較△P<0.05，◆P>0.05；，#P<0.05；與清熱組比較&P>0.05，■P<0.05空白組 模型組 益氣組 化瘀組 清熱組 復(fù)方組

9 0.6160±0.0127▲△◇&0.5456±0.1632▲△●P<0.05；與模型組比較▲P<0.05；與益氣組比較△P<0.05，，◆P>0.05；，#P<0.05；與清熱組比較&P>0.05，■P<0.05圖 1 pS6 蛋白表達條帶空白組 模型組 益氣組 化瘀組 清熱組 復(fù)方組N空白組 模型組 益氣組 化瘀組 清熱組 復(fù)方組
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2610106