發(fā)布時間：2020-03-31 11:33

【摘要】：目的:結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和傳統(tǒng)中醫(yī)理論構(gòu)建治療高血壓心肌纖維化的新型中藥復(fù)方一一降壓抗纖方,建立降壓抗纖方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并通過動物和細(xì)胞實驗研究其治療高血壓心肌纖維化的作用和機(jī)制。方法:(1)檢索中藥數(shù)據(jù)庫TCMSP中的藥物、成分、靶標(biāo)和疾病信息,運用網(wǎng)絡(luò)分析軟件Cytoscape從中篩選出能同時作用于高血壓和心肌纖維化疾病靶標(biāo)的中藥,最后根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論進(jìn)一步篩選并構(gòu)建降壓抗纖方;(2)高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)繪制降壓抗纖方的中藥指紋圖譜,并通過指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)對各批次的藥物進(jìn)行相似度分析,建立降壓抗纖方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);(3)動物實驗研究降壓抗纖方對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)模型心肌纖維化的作用,檢測其血壓、心臟功能和血清生化指標(biāo),觀察心臟的組織形態(tài)學(xué)改變和膠原分布情況;(4)高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用分析降壓抗纖方的入血活性成分,通過分子對接找到活性成分所對應(yīng)的疾病靶點并分析其所作用的信號通路,經(jīng)動物實驗對相關(guān)通路蛋白表達(dá)進(jìn)行驗證;(5)基因芯片分析降壓抗纖方給藥后SHR心肌組織中差異表達(dá)的基因,通過KEGG功能富集揭示降壓抗纖方所調(diào)控的信號通路,經(jīng)動物和細(xì)胞實驗對相關(guān)的通路蛋白表達(dá)進(jìn)行驗證。結(jié)果:(1)確認(rèn)降壓抗纖方組成成分為丹參、三七、黃芪、雞血藤和化橘紅;(2)高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用繪制了降壓抗纖方的中藥指紋圖譜并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),確保后續(xù)實驗中藥物成分的穩(wěn)定性;(3)動物實驗中,降壓抗纖方能有效降低SHR的血壓并改善心臟功能和心肌纖維化,同時減輕大鼠血清中的心肌損傷指標(biāo)、抑制血管炎癥反應(yīng),提示降壓抗纖方對高血壓心肌纖維化有良好的治療作用;(4)高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用鑒定出降壓抗纖方的十一種入血活性成分,經(jīng)分子對接和功能富集分析提示降壓抗纖方可能通過調(diào)控線粒體功能和氧化應(yīng)激反應(yīng)來發(fā)揮治療高血壓心肌纖維化的作用;動物實驗發(fā)現(xiàn),降壓抗纖方能修復(fù)SHR心肌組織中損傷的線粒體結(jié)構(gòu)和功能,并能減輕心血管的氧化應(yīng)激反應(yīng);(5)基因芯片分析得到降壓抗纖方治療后心肌組織中的137個差異表達(dá)基因,經(jīng)功能富集分析顯示降壓抗纖方可能通過調(diào)控TGF-beta通路來改善心肌纖維化;動物實驗中,降壓抗纖方能下調(diào)SHR心肌組織中TGF-beta通路相關(guān)蛋白的表達(dá);細(xì)胞實驗中,降壓抗纖方含藥血清能抑制心肌成纖維細(xì)胞的增殖、遷移和膠原分泌活性,同時也能下調(diào)細(xì)胞中TGF-beta通路蛋白的表達(dá)。結(jié)論:運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和傳統(tǒng)中醫(yī)理論所構(gòu)建的新型復(fù)方降壓抗纖方具有抗高血壓心肌纖維化的作用,其機(jī)制可能跟修復(fù)線粒體功能、減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)以及抑制TGF-beta通路相關(guān)。
【圖文】：

在負(fù)離子模式下可得到１０批供試品的指紋圖譜（如圖１），然后將其導(dǎo)逡逑入到《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（２．０版本），設(shè)定Ｓ２樣品為對照逡逑指紋圖譜，，經(jīng)過全峰匹配生成對照指紋圖譜，見圖２－１。逡逑１３．５００邐Ｉ逡逑１３．０００邐｜｜逡逑；＝邐Ａ邐＼邋ｓ逡逑”．５００邐｜邋＼邐＼邋ｆ逡逑＝邋４、一一＇邐／．」／廣、一秦、？邐邐邐—＿邋＝＊逡逑｜邋邐邐邋；；逡逑�。颍�0邋？邐ｉ：＼邐／ｉ邋：逡逑Ｈ邋：：邐■邋＾邐ｊｉ邋：邐Ｓｒ逡逑ｉ：Ｅ邋廣一一￣…邐ｒ．邋一邐—．一一．．一．邋ｓ？逡逑１０§ＥＥＥ＾ｋ￡￡ＥＥＥＥＥ＾邋：逡逑Ｇ１２３４Ｓ？７（？ｔ0１ｔｌ２逡逑ＭＨｌｍｔｎ］逡逑圖２－１降壓抗纖方指紋圖譜逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ邋ｏｆ邋Ｊｉａｎｇｙａ邋Ｋａｎｇｘｉａｎ邋Ｆｏｒｍｕｌａ逡逑（Ｓ１－Ｓ１０為１０批樣品的抗纖方指紋圖譜；Ｒ為對照指紋圖譜）逡逑３，ＢＯＯ逡逑）．？００逡逑Ｓ．４００邐３逡逑３＾００逡逑３．０００逡逑２．Ｓ３Ｓ逡逑２６００．邐＊逡逑２－＊？邐｜邐，邐７逡逑Ｉ：：逡逑？邋１．８００逡逑：丨＾人逡逑Ｓ邐？邐３邐？邐Ｓ邐ｅ邐７邐８邐Ｂ邐１０邐１１邐１２逡逑■｛ｆ｜｜邋ｍｉｎ］逡逑圖２－２降壓抗纖方對照指紋圖譜逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｃｏｎｔｒａｓｔ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉ

３．１降壓抗纖方對大鼠血壓和心臟功能的影響逡逑與冒１＾組相比，８？１１１組大鼠的８８？和０８？均顯著升高（均／｝＜０．００１），逡逑而反映心臟功能的ＥＦ和ＦＳ數(shù)值降低（均Ｐ＜０．００１）（圖３－１，表３－１）。與ＳＨＲ逡逑組相比，降壓抗纖方治療后能有效降低ＳＢＰ和ＤＢＰ，且效果呈劑量依賴性關(guān)系，逡逑但降壓效果與陽性藥卡托普利相比仍有較大差距。此外，相比ＳＨＲ組，降壓抗逡逑纖方各劑量組能有效增加ＥＦ和ＦＳ邋（均Ｐ＜邋０．００１），其中降壓抗纖方高劑量組逡逑大鼠的ＥＦ和ＦＳ與卡托普利相比無統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＞０．０５）。逡逑ＷＫＹ邐ＳＨＲ邐ＣＡＰ逡逑ＫＸＬ邐ＫＸＭ邐ＫＸＨ逡逑圖３－１大鼠心臟二尖瓣的彩色多普勒圖像逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．邋３－１邋Ｉｍａｇｅ邋ｏｆ邋ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ邋ｃａｒｄｉｏｇｒａｍ邋ｏｎ邋ｍｉｔｒａｌ邋ｖａｌｖｅ逡逑表３－１大鼠血壓和心臟功能指標(biāo)（Ｘ邋±邋５’）逡
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2609021