發(fā)布時(shí)間：2020-03-29 15:21

【摘要】：近年來,隨著藥典對(duì)金銀花藥用來源的規(guī)范、多行業(yè)(藥品、保健品、飲料、茶業(yè)等)需求的增加,金銀花價(jià)格高漲。金銀花藥材、提取物和成方制劑在生產(chǎn)、銷售過程中出現(xiàn)了一些違法違規(guī)現(xiàn)象,主要包括:金銀花和山銀花混用;金銀花莖葉替代金銀花投料;為提高綠原酸含量擅自改變提取工藝。而目前質(zhì)量控制技術(shù)方法落后,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足藥品監(jiān)管需求。為了應(yīng)對(duì)金銀花藥材及其制劑出現(xiàn)的上述問題,我們研究建立了多種技術(shù),形成質(zhì)量控制技術(shù)方法組對(duì)金銀花藥材、提取物和制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。本論文的研究內(nèi)容與結(jié)果有以下幾個(gè)方面:1金銀花與易混淆品山銀花的區(qū)別技術(shù)及其應(yīng)用1.1金銀花藥材及其易混淆品的性狀和顯微鑒別技術(shù)金銀花藥材主要市售偽品為不同植物來源的山銀花。兩者不同品種間在性狀和顯微等特征方面具有一定差異。但現(xiàn)有文獻(xiàn)大多僅以文字描述金銀花與山銀花在性狀和顯微上的區(qū)別,并不直觀。本研究拍攝了典型性狀和顯微特征照片,通過圖文的形式,翔實(shí)、生動(dòng)地展示了金銀花和不同來源山銀花的區(qū)別特征,為日常監(jiān)督和檢驗(yàn)提供了更為直觀的參考依據(jù)。此外,歸納了金銀花與山銀花藥材的鑒別特征,發(fā)現(xiàn)花冠和花萼表面被毛情況以及非腺毛排布情況是藥材鑒定中的重要特征。以上成果收錄于中國食品藥品檢定研究院編纂的《實(shí)用中藥材傳統(tǒng)鑒別手冊》。1.2市售金銀花藥材摻入山銀花銷售的問題及其檢測技術(shù)發(fā)現(xiàn)部分市售金銀花藥材存在摻入山銀花進(jìn)行銷售,以謀取高額利潤的問題。引入分子生物學(xué)技術(shù),結(jié)合傳統(tǒng)的性狀、顯微、化學(xué)成分研究和產(chǎn)地調(diào)研考察,精準(zhǔn)地鑒定了市售金銀花中摻入山銀花的植物來源為灰氈毛忍冬。深入研究了加工方式對(duì)灰氈毛忍冬花蕾外觀的影響,明確地提出并驗(yàn)證了“為了接近金銀花外觀,摻入的灰氈毛忍冬花蕾采用低溫烘干或直接干燥等慢失水干燥方式”的科學(xué)判斷。綜合考慮各檢驗(yàn)技術(shù)的專屬性、靈敏度、檢驗(yàn)成本等,優(yōu)選化學(xué)成分測定技術(shù),針對(duì)性地建立了金銀花藥材中摻入山銀花的HPLC-ELSD檢測方法。經(jīng)檢驗(yàn),收集的41批市售金銀花藥材中,15批檢出了山銀花特征三萜皂苷,占總批次的36.6%,問題金銀花藥材中,山銀花摻入比例在4%~23%。市售金銀花藥材中摻入灰氈毛忍冬花蕾的問題比較嚴(yán)重。摻入山銀花來源和加工方式的深入研究以及檢測方法的建立,為市售金銀花藥材的科學(xué)監(jiān)管提供了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)保障和依據(jù)。在此基礎(chǔ)上完成了國家藥典委員會(huì)“2015年版中國藥典多來源中藥材專項(xiàng)科研課題-易混淆藥材金銀花與山銀花”和山東省食品藥品監(jiān)督管理局“2015年山東省藥品抽驗(yàn)計(jì)劃任務(wù)-金銀花藥材”等研究和監(jiān)管任務(wù)。1.3金銀花制劑以山銀花投料的問題及其檢測技術(shù)以山銀花的特征三萜皂苷作為指標(biāo)成分,建立了6種金銀花制劑及相關(guān)金銀花提取物以山銀花投料的HPLC-ELSD檢查方法。對(duì)6種金銀花制劑121批樣品進(jìn)行檢驗(yàn),其中77批檢出了山銀花特征三萜皂苷,總檢出率為63.6%;43批金銀花提取物中13批檢出了山銀花特征三萜皂苷,占總批次的30.2%。上述結(jié)果表明金銀花提取物和制劑以山銀花投料的問題比較嚴(yán)重,相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)對(duì)金銀花原料把關(guān)不嚴(yán),或涉嫌故意以山銀花投料,應(yīng)加大監(jiān)管力度,督促企業(yè)嚴(yán)格按照處方規(guī)定投料。研究建立的銀黃片和銀黃顆粒山銀花檢查技術(shù)均已收載于《中國藥典》2015年版第一增補(bǔ)本,銀黃滴丸的山銀花檢查技術(shù)已經(jīng)在國家藥典委員會(huì)網(wǎng)站上公示。2金銀花與忍冬藤區(qū)別成分研究及其應(yīng)用忍冬藤為金銀花的藤莖,屬于同一藥用植物的不同藥用部位,在金銀花提取物、制劑中可能存在以忍冬藤違規(guī)替代金銀花投料的問題。我們通過忍冬藤與金銀花的成分比較,發(fā)現(xiàn)了一種忍冬藤的特征成分:5-0-[4'-CO-(βD-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸。從忍冬藤中分離鑒定了該成分并報(bào)道其完整的核磁共振圖譜數(shù)據(jù)。通過HPLC色譜圖中綠原酸與5-0-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸峰面積的比值,研制了判斷金銀花提取物是否摻雜忍冬藤投料的檢測方法。對(duì)48批金銀花提取物進(jìn)行檢驗(yàn),19批樣品低于規(guī)定的最低限度值,涉嫌違規(guī)以忍冬藤進(jìn)行投料,占總批次的39.6%。結(jié)果表明,市售金銀花提取物摻入忍冬藤進(jìn)行投料的問題比較嚴(yán)重。忍冬藤特征成分制備、含量測定及其在金銀花提取物摻偽投料中的應(yīng)用等3項(xiàng)技術(shù)均已獲得國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局發(fā)明專利授權(quán)(專利號(hào):ZL201610395262.1、ZL201610395041.4、ZL201610394794.3)。3金銀花制劑的多成分質(zhì)置控制技術(shù)為了片面地提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所測指標(biāo)成分綠原酸的含量,部分生產(chǎn)企業(yè)存在改變金銀花提取工藝,以減少投料量,節(jié)約成本的違規(guī)行為。不同提取工藝對(duì)金銀花提取物中主要活性成分一咖啡�？鼘幩犷惓煞值慕M成和比例影響非常顯著,進(jìn)而可能影響藥品療效。本研究持續(xù)開發(fā)了HPLC外標(biāo)法、一測多評(píng)、特征圖譜、對(duì)照提取物等多種技術(shù),對(duì)金銀花提取物和制劑中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、3,4-O-二咖啡酰奎寧酸、3,5-0-二咖啡酰奎寧酸和4,5-O-二咖啡�？鼘幩徇M(jìn)行定性、定量控制,防止企業(yè)為提高綠原酸含量擅自改變提取工藝。銀黃片、銀黃顆粒及相關(guān)金銀花提取物的特征圖譜鑒別技術(shù)已收載于《中國藥典》2015年版第一增補(bǔ)本;銀黃滴丸的特征圖譜鑒別技術(shù)已經(jīng)在國家藥典委員會(huì)網(wǎng)站上公示;制備的金銀花對(duì)照提取物組成、比例合理,目標(biāo)成分總含量超過70%,制備方法簡便,已獲國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局發(fā)明專利授權(quán)(專利號(hào):ZL201410080316.6)。本論文取得的創(chuàng)新點(diǎn)有:1構(gòu)建了金銀花藥材、提取物和制劑三個(gè)層次的質(zhì)量控制體系,全面提升銀黃系列制劑及其提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),收入《中國藥典》。所建立的藥品標(biāo)準(zhǔn)已應(yīng)用于全國100余家相關(guān)藥品生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量控制,全面提高了我國金銀花藥材及其制劑的質(zhì)量控制水平,有效監(jiān)督和控制了金銀花行業(yè)違法違規(guī)問題。2從忍冬藤中分離鑒定了 5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸,并通過HPLC色譜圖中上述成分與綠原酸色譜峰的比例關(guān)系,建立了金銀花提取物及相關(guān)產(chǎn)品的原料是否摻雜忍冬藤的檢測方法。3制備了新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、3,4-0-二咖啡�？鼘幩�、3,5-0-二咖啡�？鼘幩�、4,5-0-二咖啡酰奎寧酸等6種目標(biāo)成分質(zhì)量比例關(guān)系約為0.2~0.4:1.0:0.3～0.5:0.2～0.4:0.1～0.3:0.2～0.4,其總質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過70%的金銀花對(duì)照提取物,并將上述對(duì)照提取物應(yīng)用于抗感顆粒處方藥味金銀花的多成分鑒別。4建立了銀黃系列制劑中6種咖啡�？鼘幩岬腍PLC 一測多評(píng)含量測定方法、特征圖譜測定方法,應(yīng)用于銀黃系列制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究,實(shí)現(xiàn)多成分同步測定,整體評(píng)價(jià)藥品的質(zhì)量。
【圖文】：

３．２．１研究思路逡逑為了保證研宄內(nèi)容科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)、研究結(jié)論真實(shí)可信，我們設(shè)計(jì)了一條具體研逡逑宄思路，力求全面深入的研宄金銀花藥材、提取物和制劑的質(zhì)量控制方法，見圖逡逑１－３－１。逡逑

從而發(fā)現(xiàn)真、偽品中的特征成分，選擇合適的標(biāo)志物進(jìn)行制備與分高效液相色譜（ＨＰＬＣ）對(duì)真、偽品進(jìn)行成分比對(duì)，找到特征成分，通過柱層析色譜分離得到該化合物單體，再通過高分辨液相色譜－ＰＬＣ－ＭＳ）數(shù)據(jù)、核磁共振（ＮＭＲ）數(shù)據(jù)鑒定該成分結(jié)構(gòu)。逡逑期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開展質(zhì)量控制方法研究。制定質(zhì)量控制方法學(xué)驗(yàn)證其可行性，驗(yàn)證方法按照《中國藥典》執(zhí)行。使用建立的對(duì)收集樣品進(jìn)行測定，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，從而進(jìn)一步驗(yàn)證該質(zhì)量控性與適用性。逡逑術(shù)路線逡逑到單一檢測方法的局限性，我們通過建立性狀、顯微、ＴＬＣ、特征圖、對(duì)照提取物、ＤＮＡ分子鑒定等多種方法，形成方法組對(duì)金銀花材、提取物和制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，見圖１－３－２。逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R282.5;R283.6
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本文編號(hào)：2606155