【摘要】：近年來,隨著藥典對金銀花藥用來源的規(guī)范、多行業(yè)(藥品、保健品、飲料、茶業(yè)等)需求的增加,金銀花價格高漲。金銀花藥材、提取物和成方制劑在生產、銷售過程中出現了一些違法違規(guī)現象,主要包括:金銀花和山銀花混用;金銀花莖葉替代金銀花投料;為提高綠原酸含量擅自改變提取工藝。而目前質量控制技術方法落后,遠遠不能滿足藥品監(jiān)管需求。為了應對金銀花藥材及其制劑出現的上述問題,我們研究建立了多種技術,形成質量控制技術方法組對金銀花藥材、提取物和制劑進行質量控制。本論文的研究內容與結果有以下幾個方面:1金銀花與易混淆品山銀花的區(qū)別技術及其應用1.1金銀花藥材及其易混淆品的性狀和顯微鑒別技術金銀花藥材主要市售偽品為不同植物來源的山銀花。兩者不同品種間在性狀和顯微等特征方面具有一定差異。但現有文獻大多僅以文字描述金銀花與山銀花在性狀和顯微上的區(qū)別,并不直觀。本研究拍攝了典型性狀和顯微特征照片,通過圖文的形式,翔實、生動地展示了金銀花和不同來源山銀花的區(qū)別特征,為日常監(jiān)督和檢驗提供了更為直觀的參考依據。此外,歸納了金銀花與山銀花藥材的鑒別特征,發(fā)現花冠和花萼表面被毛情況以及非腺毛排布情況是藥材鑒定中的重要特征。以上成果收錄于中國食品藥品檢定研究院編纂的《實用中藥材傳統(tǒng)鑒別手冊》。1.2市售金銀花藥材摻入山銀花銷售的問題及其檢測技術發(fā)現部分市售金銀花藥材存在摻入山銀花進行銷售,以謀取高額利潤的問題。引入分子生物學技術,結合傳統(tǒng)的性狀、顯微、化學成分研究和產地調研考察,精準地鑒定了市售金銀花中摻入山銀花的植物來源為灰氈毛忍冬。深入研究了加工方式對灰氈毛忍冬花蕾外觀的影響,明確地提出并驗證了“為了接近金銀花外觀,摻入的灰氈毛忍冬花蕾采用低溫烘干或直接干燥等慢失水干燥方式”的科學判斷。綜合考慮各檢驗技術的專屬性、靈敏度、檢驗成本等,優(yōu)選化學成分測定技術,針對性地建立了金銀花藥材中摻入山銀花的HPLC-ELSD檢測方法。經檢驗,收集的41批市售金銀花藥材中,15批檢出了山銀花特征三萜皂苷,占總批次的36.6%,問題金銀花藥材中,山銀花摻入比例在4%~23%。市售金銀花藥材中摻入灰氈毛忍冬花蕾的問題比較嚴重。摻入山銀花來源和加工方式的深入研究以及檢測方法的建立,為市售金銀花藥材的科學監(jiān)管提供了堅實的技術保障和依據。在此基礎上完成了國家藥典委員會“2015年版中國藥典多來源中藥材專項科研課題-易混淆藥材金銀花與山銀花”和山東省食品藥品監(jiān)督管理局“2015年山東省藥品抽驗計劃任務-金銀花藥材”等研究和監(jiān)管任務。1.3金銀花制劑以山銀花投料的問題及其檢測技術以山銀花的特征三萜皂苷作為指標成分,建立了6種金銀花制劑及相關金銀花提取物以山銀花投料的HPLC-ELSD檢查方法。對6種金銀花制劑121批樣品進行檢驗,其中77批檢出了山銀花特征三萜皂苷,總檢出率為63.6%;43批金銀花提取物中13批檢出了山銀花特征三萜皂苷,占總批次的30.2%。上述結果表明金銀花提取物和制劑以山銀花投料的問題比較嚴重,相關生產企業(yè)對金銀花原料把關不嚴,或涉嫌故意以山銀花投料,應加大監(jiān)管力度,督促企業(yè)嚴格按照處方規(guī)定投料。研究建立的銀黃片和銀黃顆粒山銀花檢查技術均已收載于《中國藥典》2015年版第一增補本,銀黃滴丸的山銀花檢查技術已經在國家藥典委員會網站上公示。2金銀花與忍冬藤區(qū)別成分研究及其應用忍冬藤為金銀花的藤莖,屬于同一藥用植物的不同藥用部位,在金銀花提取物、制劑中可能存在以忍冬藤違規(guī)替代金銀花投料的問題。我們通過忍冬藤與金銀花的成分比較,發(fā)現了一種忍冬藤的特征成分:5-0-[4'-CO-(βD-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸。從忍冬藤中分離鑒定了該成分并報道其完整的核磁共振圖譜數據。通過HPLC色譜圖中綠原酸與5-0-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸峰面積的比值,研制了判斷金銀花提取物是否摻雜忍冬藤投料的檢測方法。對48批金銀花提取物進行檢驗,19批樣品低于規(guī)定的最低限度值,涉嫌違規(guī)以忍冬藤進行投料,占總批次的39.6%。結果表明,市售金銀花提取物摻入忍冬藤進行投料的問題比較嚴重。忍冬藤特征成分制備、含量測定及其在金銀花提取物摻偽投料中的應用等3項技術均已獲得國家知識產權局發(fā)明專利授權(專利號:ZL201610395262.1、ZL201610395041.4、ZL201610394794.3)。3金銀花制劑的多成分質置控制技術為了片面地提高質量標準所測指標成分綠原酸的含量,部分生產企業(yè)存在改變金銀花提取工藝,以減少投料量,節(jié)約成本的違規(guī)行為。不同提取工藝對金銀花提取物中主要活性成分一咖啡�？鼘幩犷惓煞值慕M成和比例影響非常顯著,進而可能影響藥品療效。本研究持續(xù)開發(fā)了HPLC外標法、一測多評、特征圖譜、對照提取物等多種技術,對金銀花提取物和制劑中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、3,4-O-二咖啡�？鼘幩�、3,5-0-二咖啡�？鼘幩岷�4,5-O-二咖啡�？鼘幩徇M行定性、定量控制,防止企業(yè)為提高綠原酸含量擅自改變提取工藝。銀黃片、銀黃顆粒及相關金銀花提取物的特征圖譜鑒別技術已收載于《中國藥典》2015年版第一增補本;銀黃滴丸的特征圖譜鑒別技術已經在國家藥典委員會網站上公示;制備的金銀花對照提取物組成、比例合理,目標成分總含量超過70%,制備方法簡便,已獲國家知識產權局發(fā)明專利授權(專利號:ZL201410080316.6)。本論文取得的創(chuàng)新點有:1構建了金銀花藥材、提取物和制劑三個層次的質量控制體系,全面提升銀黃系列制劑及其提取物質量標準,收入《中國藥典》。所建立的藥品標準已應用于全國100余家相關藥品生產企業(yè)的產品質量控制,全面提高了我國金銀花藥材及其制劑的質量控制水平,有效監(jiān)督和控制了金銀花行業(yè)違法違規(guī)問題。2從忍冬藤中分離鑒定了 5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡�；鵠奎寧酸,并通過HPLC色譜圖中上述成分與綠原酸色譜峰的比例關系,建立了金銀花提取物及相關產品的原料是否摻雜忍冬藤的檢測方法。3制備了新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、3,4-0-二咖啡�？鼘幩�、3,5-0-二咖啡�？鼘幩�、4,5-0-二咖啡�？鼘幩岬�6種目標成分質量比例關系約為0.2~0.4:1.0:0.3～0.5:0.2～0.4:0.1～0.3:0.2～0.4,其總質量分數超過70%的金銀花對照提取物,并將上述對照提取物應用于抗感顆粒處方藥味金銀花的多成分鑒別。4建立了銀黃系列制劑中6種咖啡�？鼘幩岬腍PLC 一測多評含量測定方法、特征圖譜測定方法,應用于銀黃系列制劑質量標準研究,實現多成分同步測定,整體評價藥品的質量。
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３．２．１研究思路逡逑為了保證研宄內容科學嚴謹、研究結論真實可信，我們設計了一條具體研逡逑宄思路，力求全面深入的研宄金銀花藥材、提取物和制劑的質量控制方法，見圖逡逑１－３－１。逡逑

從而發(fā)現真、偽品中的特征成分，選擇合適的標志物進行制備與分高效液相色譜（ＨＰＬＣ）對真、偽品進行成分比對，找到特征成分，通過柱層析色譜分離得到該化合物單體，再通過高分辨液相色譜－ＰＬＣ－ＭＳ）數據、核磁共振（ＮＭＲ）數據鑒定該成分結構。逡逑期實驗的基礎上，進一步開展質量控制方法研究。制定質量控制方法學驗證其可行性，驗證方法按照《中國藥典》執(zhí)行。使用建立的對收集樣品進行測定，并進行數據分析，從而進一步驗證該質量控性與適用性。逡逑術路線逡逑到單一檢測方法的局限性，我們通過建立性狀、顯微、ＴＬＣ、特征圖、對照提取物、ＤＮＡ分子鑒定等多種方法，形成方法組對金銀花材、提取物和制劑進行質量控制，見圖１－３－２。逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R282.5;R283.6
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本文編號：2606155