發(fā)布時間：2020-03-29 10:29

【摘要】：目的增生性瘢痕(Hyperplastic Scar,HS)是人體皮膚受到各種燒傷或手術(shù)后過度修復(fù)自身組織細胞的表現(xiàn),引起局部組織增厚、色素沉著甚至脫失,嚴重者肢體的功能可能受到瘢痕攣縮的影響。HS給患者的身心都造成沉重的負擔(dān)。已有研究顯示,成纖維細胞在瘢痕形成的過程中具有重要意義。成纖維細胞增殖能力增強,凋亡能力下降,膠原分泌增加,細胞外基質(zhì)沉積增多,最終導(dǎo)致HS的形成。青藤堿(7,8-二氫-4-羥基-3,7-二甲氧基-17-甲基嗎啡-6-酮;Sinomenine,SIN),是單體生物堿,具有治療風(fēng)濕痹痛,關(guān)節(jié)腫脹等作用。此外,有報道發(fā)現(xiàn),SIN能通過抑制TGF-β1、血清層黏連蛋白、纖維連接蛋白而發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。本研究旨在探索青藤堿對HS成纖維細胞的作用及其分子機制。方法以不同濃度SIN作用于人成纖維細胞,并按時間點收集細胞。通過MTT測定法測定細胞活力,通過流式細胞儀檢測細胞周期,并通過hoechst33258法檢測細胞凋亡。通過transwell實驗測定法測定細胞遷移,western blot法檢測相關(guān)信號分子的變化。結(jié)果1.SIN以劑量及時間依賴的方式抑制人成纖維細胞的增殖。將人成纖維細胞在25μM和50μM下連續(xù)處理12小時,24小時,36小時和48小時,并通過MTT測定法測定細胞增殖活性。24h細胞增殖抑制率分別為(13.14±5.51)%和(43.28±4.98)%;2.用相同濃度的SIN作用于成纖維細胞,以流式細胞儀對細胞周期進行檢測。發(fā)現(xiàn),G1期細胞增多,S期細胞相較對照組減少,證明存在G1/S期細胞阻滯現(xiàn)象,并且隨著SIN劑量的增加,阻滯作用加強;3.行hoechst33258染色后,發(fā)現(xiàn),與空白對照組相比,SIN作用后的的細胞存在凋亡促進現(xiàn)象,并呈劑量依賴性;4.Transwell實驗發(fā)現(xiàn),用SIN處理的成纖維細胞中觀察到了遷移抑制;5.western blot實驗發(fā)現(xiàn),經(jīng)過SIN處理后,人成纖維細胞的TGF-β1信號受到抑制,Cyclin D1、bcl-2及MMP2表達呈下降趨勢。結(jié)論1、SIN抑制成纖維細胞的生長和遷移;2、SIN對HS成纖維細胞生長和遷移的抑制作用可能是通過調(diào)節(jié)TGF-β1通路。
【圖文】：

結(jié) 果N 對人成纖維細胞活力的影響究中對人成纖維細胞進行胰酶消化，并根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果量接種于 96 孔板中。待細胞貼壁后，，分別加入 25μM、50液，與細胞共培養(yǎng)。在不同時間點將 96 孔板取出，加入 7℃孵育 4h 后加入 DMSO 終止反應(yīng)，并充分振蕩后讀取 45。結(jié)果顯示，25μM 及 50μMSIN 處理均對人成纖維細胞活用，并呈現(xiàn)劑量及時間依賴性（圖 1）。

圖 2 SIN 可引起人成纖維細胞周期 G1/S 期阻滯注：（A）以生理鹽水處理人成纖維細胞并應(yīng)用流式細胞儀測定周期；（B）以25μMSIN 處理人成纖維細胞并進行流式細胞儀檢測；（C）以 50μMSIN 處理人成纖維細胞并進行流式細胞儀檢測；（D）以不同濃度 SIN 處理人成纖維細胞后進行流式細胞儀檢測，各時期細胞所占百分比。所有實驗數(shù)據(jù)來自于 3 次以上獨立重復(fù)平行組。*：P < 0.05。3、SIN 引起人成纖維細胞凋亡實驗中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過SIN處理后的人成纖維細胞發(fā)生細胞周期阻滯。因此我們對處理后的成纖維細胞進行凋亡檢測。發(fā)現(xiàn)經(jīng)過SIN處理后的細胞不僅發(fā)生細胞阻滯，也走向了凋亡。而且隨著SIN濃度的加大，凋亡細胞數(shù)量增多（圖3）。如圖3中，藍色斑點為皺縮的染色質(zhì)，代表著已經(jīng)凋亡的細胞。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2605844