【摘要】：目的增生性瘢痕(Hyperplastic Scar,HS)是人體皮膚受到各種燒傷或手術(shù)后過度修復(fù)自身組織細(xì)胞的表現(xiàn),引起局部組織增厚、色素沉著甚至脫失,嚴(yán)重者肢體的功能可能受到瘢痕攣縮的影響。HS給患者的身心都造成沉重的負(fù)擔(dān)。已有研究顯示,成纖維細(xì)胞在瘢痕形成的過程中具有重要意義。成纖維細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),凋亡能力下降,膠原分泌增加,細(xì)胞外基質(zhì)沉積增多,最終導(dǎo)致HS的形成。青藤堿(7,8-二氫-4-羥基-3,7-二甲氧基-17-甲基嗎啡-6-酮;Sinomenine,SIN),是單體生物堿,具有治療風(fēng)濕痹痛,關(guān)節(jié)腫脹等作用。此外,有報(bào)道發(fā)現(xiàn),SIN能通過抑制TGF-β1、血清層黏連蛋白、纖維連接蛋白而發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。本研究旨在探索青藤堿對(duì)HS成纖維細(xì)胞的作用及其分子機(jī)制。方法以不同濃度SIN作用于人成纖維細(xì)胞,并按時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞。通過MTT測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞活力,通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,并通過hoechst33258法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。通過transwell實(shí)驗(yàn)測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞遷移,western blot法檢測(cè)相關(guān)信號(hào)分子的變化。結(jié)果1.SIN以劑量及時(shí)間依賴的方式抑制人成纖維細(xì)胞的增殖。將人成纖維細(xì)胞在25μM和50μM下連續(xù)處理12小時(shí),24小時(shí),36小時(shí)和48小時(shí),并通過MTT測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞增殖活性。24h細(xì)胞增殖抑制率分別為(13.14±5.51)%和(43.28±4.98)%;2.用相同濃度的SIN作用于成纖維細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行檢測(cè)。發(fā)現(xiàn),G1期細(xì)胞增多,S期細(xì)胞相較對(duì)照組減少,證明存在G1/S期細(xì)胞阻滯現(xiàn)象,并且隨著SIN劑量的增加,阻滯作用加強(qiáng);3.行hoechst33258染色后,發(fā)現(xiàn),與空白對(duì)照組相比,SIN作用后的的細(xì)胞存在凋亡促進(jìn)現(xiàn)象,并呈劑量依賴性;4.Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用SIN處理的成纖維細(xì)胞中觀察到了遷移抑制;5.western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),經(jīng)過SIN處理后,人成纖維細(xì)胞的TGF-β1信號(hào)受到抑制,Cyclin D1、bcl-2及MMP2表達(dá)呈下降趨勢(shì)。結(jié)論1、SIN抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移;2、SIN對(duì)HS成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移的抑制作用可能是通過調(diào)節(jié)TGF-β1通路。
【圖文】：

結(jié) 果N 對(duì)人成纖維細(xì)胞活力的影響究中對(duì)人成纖維細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化，并根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果量接種于 96 孔板中。待細(xì)胞貼壁后，，分別加入 25μM、50液，與細(xì)胞共培養(yǎng)。在不同時(shí)間點(diǎn)將 96 孔板取出，加入 7℃孵育 4h 后加入 DMSO 終止反應(yīng)，并充分振蕩后讀取 45。結(jié)果顯示，25μM 及 50μMSIN 處理均對(duì)人成纖維細(xì)胞活用，并呈現(xiàn)劑量及時(shí)間依賴性（圖 1）。

圖 2 SIN 可引起人成纖維細(xì)胞周期 G1/S 期阻滯注：（A）以生理鹽水處理人成纖維細(xì)胞并應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定周期；（B）以25μMSIN 處理人成纖維細(xì)胞并進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)；（C）以 50μMSIN 處理人成纖維細(xì)胞并進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)；（D）以不同濃度 SIN 處理人成纖維細(xì)胞后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，各時(shí)期細(xì)胞所占百分比。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來自于 3 次以上獨(dú)立重復(fù)平行組。*：P < 0.05。3、SIN 引起人成纖維細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過SIN處理后的人成纖維細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯。因此我們對(duì)處理后的成纖維細(xì)胞進(jìn)行凋亡檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)經(jīng)過SIN處理后的細(xì)胞不僅發(fā)生細(xì)胞阻滯，也走向了凋亡。而且隨著SIN濃度的加大，凋亡細(xì)胞數(shù)量增多（圖3）。如圖3中，藍(lán)色斑點(diǎn)為皺縮的染色質(zhì)，代表著已經(jīng)凋亡的細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2605844