【摘要】：從中藥中篩選活性成分是創(chuàng)新藥物的重要源泉,而活血化瘀藥在血栓性疾病防治方面獨具優(yōu)勢。血栓性疾病致死率高,血小板的聚集是引發(fā)其產(chǎn)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。P2Y12受體是血小板上重要受體,具有良好的組織分布特異性及放大血小板信號的作用,已成為抗血小板聚集最重要的靶點。本論文建立P2Y12受體色譜模型,旨在篩選活血化瘀藥抗血小板聚集活性成分,主要分為兩部分:一、通過“氧化切割”方式制備了石墨烯量子點(GQDs),利用EDCI/NHS為偶聯(lián)劑,以牛血清白蛋白(BSA)為工具蛋白,制備BSA/GQDs/Si02色譜填料。采用掃描電子顯微鏡和表面能譜分析等方法對固定相進行表征并對構(gòu)建的BSA色譜模型進行色譜行為考察。采用直接進樣法研究了 BSA與配體沒食子酸、原兒茶醛、阿魏酸、香草酸、原兒茶酸和咖啡酸的相互作用。結(jié)果表明,BSA能夠成功固載于GQDs/Si02色譜填料表面且具有較好的生物活性,BSA色譜模型能夠穩(wěn)定且特異性分離同母核結(jié)構(gòu)的六種配體,并且在BSA上均存在一類結(jié)合位點。以上結(jié)果說明GQDs/Si02的色譜填料可有效固載蛋白質(zhì),并可保證蛋白質(zhì)的生物活性,該方法可用于構(gòu)建生物大分子藥物篩選色譜模型。二、以P2Y12受體為模型蛋白,構(gòu)建基于GQDs/Si02色譜填料的P2Y12受體色譜,并對P2Y12受體鍵合量和保留特性等進行考察。以此為藥物篩選模型,對丹參、丹紅注射液以及化合物丹參素異丙酯(IDHP)、丹參素冰片酯(DBZ)進行活性篩選、富集,并采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)進行鑒定,輔以抗血小板聚集活性驗證。結(jié)果顯示,P2Y12配體依諾格雷等在P2Y12受體色譜模型上有特異性保留;確定了丹參醇提液中與P2Y12受體具有相互作用的3個活性成分(二氫丹參酮Ⅰ等);水提液中的10個活性成分(丹參素等);丹紅注射液中的7個活性成分(原兒茶醛等);并發(fā)現(xiàn)DBZ和IDHP均在P2Y12受體色譜模型上有保留且能夠抑制ADP誘導(dǎo)的血小板的聚集。以上結(jié)果均表明基于GQDs/Si02新型色譜填料構(gòu)建的P2Y12受體色譜模型可以應(yīng)用于抗血小板活性成分的篩選,并為活血化瘀藥活性成分高通量篩選提供了方法學(xué)支撐。
【圖文】：

逡逑容納配體分子ＡＺＤ１２８３邋（阿斯利康研發(fā)）。也有可能存在著其他的結(jié)合位點。圖１所逡逑示為Ｐ２Ｙ１２Ｒ主要氨基酸與ＡＺＤ１２８３的相互作用［３５＿３６］。逡逑０９４＾＾１０９＾邋＊邋ｒ４逡逑圖１邋Ｐ２Ｙ１２受體關(guān)鍵氨基酸與ＡＺＤ１２８３相互作用結(jié)構(gòu)圖逡逑附注１：邋ＡＺＤ１２８３（紫紅色），關(guān)鍵氨基酸（綠色）逡逑Ｐ２Ｙ１２受體因其在血小板發(fā)生反應(yīng)過程中具有重要地位，成為一個治療血栓的一個逡逑非常重要的靶點蛋白。目前對于急性冠狀動脈綜合征（ＡＣＳ）患者的治療，相關(guān)指南推逡逑薦以阿司匹林聯(lián)同Ｐ２Ｙ１２受體拮抗劑組合用藥。并且推薦患有ＡＣＳ的患者盡早用Ｐ２Ｙ１２逡逑受體抑制劑治療［３Ｍ＇傳統(tǒng)用藥中，阿司匹林一直占有重要的一部分。越來越多研究表逡逑明，阿司匹林在治療中，使用正常劑量或者增加用量并不能完全減少ＴＸＡ２的產(chǎn)生和血逡逑小板聚集過程，且同時可能會出現(xiàn)血栓性疾病，，這種現(xiàn)象被稱作為阿司匹林抵抗現(xiàn)象｜４（）］。逡逑Ｐ２Ｙ１２受體拮抗劑是除阿司匹林外，ＡＣＳ病人和經(jīng)皮冠狀動脈介入（ＰＣＩ）病人的治療逡逑基礎(chǔ)［４１１。主要作用于Ｐ２Ｙ１２受體抑制劑有以下幾種：逡逑噻吩吡啶衍生物

２．４．１基于ＧＱＤｓ固載ＢＳＡ色譜模型的表征逡逑①基于石墨烯量子點的蛋白色譜固定相的形態(tài)及能譜分析逡逑基于ＧＱＤｓ固載的ＢＳＡ固定相掃描電子顯微鏡結(jié)果見下圖２。裸硅膠表面相對光滑，逡逑１２逡逑
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：O652.6;R284

【參考文獻】

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本文編號：2605809