【摘要】：【目的】研究吳茱萸堿的兩種不同衍生物:吳茱萸堿硝基化合物(Evodiamine nitro compound,END)和吳茱萸堿氨基衍生物(Evodiamine amino derivative,EAD)以及它們的納米制劑吳茱萸堿硝基衍生物磷脂復(fù)合物(Evodiamine nitro derivative complex,ENPD)和吳茱萸堿氨基衍生物磷脂復(fù)合物(Evodiamine amino derivative complex,EAPD)對小細(xì)胞肺癌H1688細(xì)胞株的抗腫瘤活性及作用機(jī)制�！痉椒ā矿w外培養(yǎng)H1688小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株,在不同濃度EVO、END、EAD、ENPD、EAPD作用后和相同濃度不同作用時間作用后,運(yùn)用MTT法檢測細(xì)胞存活率、用流式細(xì)胞術(shù)考察H1688細(xì)胞凋亡的情況和有絲分裂周期。熒光探針染色考察H1688細(xì)胞內(nèi)活性氧、鈣離子濃度和線粒體膜電位變化。并用細(xì)胞器共定位等方法觀察熒光標(biāo)記的納米磷脂復(fù)合物在細(xì)胞中被攝取的行為和主要攝取部位。另用western blot檢測caspase 12、caspase 9、caspase 3、cyt C等凋亡相關(guān)蛋白及chop、bim等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白和自噬標(biāo)志蛋白LC 3的表達(dá)。繼而采用裸鼠體內(nèi)成瘤、HE染色等方法進(jìn)一步考察吳茱萸堿衍生物及其納米磷脂復(fù)合物對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1688細(xì)胞的體內(nèi)抗腫瘤作用�！窘Y(jié)果】MTT結(jié)果顯示,END與EAD及其納米制劑ENPD與EAPD都對H1688小細(xì)胞肺癌細(xì)胞有抑制作用,且呈時間和濃度依賴性,以END及ENPD作用最強(qiáng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),END、EAD、ENPD、EAPD均可誘導(dǎo)H1688細(xì)胞發(fā)生凋亡,且阻滯其有絲分裂于G2/M期。用以上方法考察END、EAD、ENPD、EAPD對H1688細(xì)胞的效應(yīng)后,進(jìn)一步檢測凋亡相關(guān)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)經(jīng)以上藥物處理后H1688細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位下降,活性氧升高及鈣離子濃度升高,顯示出明顯的凋亡現(xiàn)象。Western blot結(jié)果顯示,END、EAD處理后,H1688細(xì)胞的caspase 3/9/12等蛋白表達(dá)上調(diào)不明顯,但ENPD和EAPD作用后caspase 3/9/12明顯上調(diào),且Cyt C釋放增加,同時自噬蛋白LC 3Ⅰ/LC3Ⅱ值在EVO、END、EAD、ENPD、EAPD處理后顯著降低。以上結(jié)果說明END、EAD、ENPD、EAPD均能通過線粒體途徑誘導(dǎo)H1688細(xì)胞發(fā)生凋亡但END與EAD效果遠(yuǎn)弱于ENPD和EAPD,同時可誘導(dǎo)自噬發(fā)生。對納米磷脂復(fù)合物在細(xì)胞中的行為進(jìn)行考察后可知,ENPD和EAPD主要通過細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取,并聚集于胞質(zhì)中,使ENPD和EAPD更多聚集于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附近誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生。裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)顯示各化合物均能抑制裸鼠體重下降和體內(nèi)腫瘤生長�！窘Y(jié)論】兩種不同的吳茱萸堿衍生物END和EAD都具有抗小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H1688的抗腫瘤活性,且抗腫瘤活性比母體藥物EVO更顯著,END作用最強(qiáng)。納米磷脂復(fù)合物ENPD和EAPD增強(qiáng)了藥物抗腫瘤作用。各化合物的主要抗腫瘤機(jī)制均是通過線粒體途徑誘導(dǎo)H1688細(xì)胞發(fā)生凋亡,也與藥物誘導(dǎo)自噬增強(qiáng)有關(guān)。
【圖文】：

劑的方法改善其生物利用度使吳茱萸堿的抗腫瘤應(yīng)用前景得到顯著改來，國內(nèi)外對吳茱萸堿進(jìn)行了不同衍生物的合成與篩選并成為改良吳瘤活性的研究熱點(diǎn)，目前多數(shù)研究的衍生物有：烷基，苯甲�；�，芐到吳茱萸堿的吲哚氮原子中[14]；有活性的 10-羥基吳茱萸堿和 3-氨基-1萸堿[15]等。那么，吳茱萸堿經(jīng)過衍生后，其衍生物抗腫瘤的活性和機(jī)，其藥學(xué)特征和構(gòu)效關(guān)系均值得進(jìn)一步研究，也是為發(fā)掘新藥提供重?fù)?jù)。故本課題主要研究 EVO 的兩種不同的衍生物，吳茱萸堿氨基衍生物和基衍生物（結(jié)構(gòu)式如圖 1 所示）對 H1688 細(xì)胞株的抗腫瘤活性以及機(jī)藥物-納米磷脂復(fù)合物[16]的方法進(jìn)一步提高 END 與 EAD 對細(xì)胞的親和利用度。同時對 END、EAD 以及它們的納米制劑在體內(nèi)的抗腫瘤活性進(jìn)行初步評價(jià)。

分別考察了 END、EAD 在不同濃度（0 μM、0.625 μM、1.25μM、2.5 μM5 μM、10 μM 和 20 μM）和不同時間（24 h、48 h、72 h）對 H1688 細(xì)胞存活率的影響。用 0.625μM 的 EVO、END、EAD 處理 24 h，H1688 細(xì)胞即可觀察到細(xì)胞死亡。高濃度 END 和 EAD（20 μM）處理 24 h、48 h、72 h 后，其存活率分別為約16.45 %和 61.20 %（24 h）、9.10 %和 43.37 %（48 h）、5.24 %和 29.55 %（72 h），與 0 μM 相比顯著降低。EVO 處理組存活率分別為 60.81 %（24 h）、21.99 %（4h）、18.51 %（72 h）。24 h 時 EVO 和 EAD 僅最高濃度（20 μM）的存活率與 Contro組存在顯著性差異，10 μM 組與 Control 組存活率之間未見顯著性差異（EVO 組P= 0.438> 0.05；EAD 組 P= 1.000> 0.05）而 END 組在處理 24 h 后存活率與 Contro組存活率間即出現(xiàn)明顯差異（P= 0.010< 0.05）。END、EAD 對 H1688 的抑制作用呈現(xiàn)時間依賴性和劑量依賴性，，20 μM END處理 72 h后對H1688的抑制效果最好存活率僅 5.24 %，如圖 1 所示。A EVO B END C EAD
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 馮長梅;王占黎;周立社;;吳茱萸堿作為多靶點(diǎn)化合物的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年04期

2 張志仙;蔣美玲;王欣慧;李云展;龔國清;;吳茱萸堿的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年21期

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本文編號：2604457