紫地榆防齲活性部位和活性成分的篩選

發(fā)布時間：2020-03-28 16:13

【摘要】：目的:研究紫地榆提取物對人工早期根面齲的作用并對其活性成分進行分離和篩選,為紫地榆防治根面齲提供理論依據(jù)。方法:(1)采用瓊脂稀釋法測定紫地榆提取物對常駐口腔細菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC),再以低于MIC的4個濃度梯度配制含藥的TPY液體培養(yǎng)基測定紫地榆提取物對口腔常駐細菌產(chǎn)酸的影響。(2)采用變形鏈球菌誘導(dǎo)法形成早期人工根面齲模型,以去離子水作為陰性對照組,以20.00 mg/LNaF作為陽性對照組,用不同濃度的紫地榆提取物處理早期根面齲,再放入新鮮菌液24h,通過24h, 48h, 72h三個時間點鈣溶出量的檢測和掃描電子顯微鏡觀察紫地榆提取物再礦化人工根面齲后牙根組織表面礦物質(zhì)的沉積情況定性分析紫地榆抑制根面齲的作用效果;采用離體牛切牙制備人工離體牙根組織塊,開窗,置37℃脫礦液中96h,形成人工根面齲后,隨機分組,每組6個樣本,用不同實驗組進行再礦化循環(huán)。應(yīng)用偏光顯微鏡觀察各組樣本再礦化后的形態(tài)學(xué)變化和激光掃描共聚焦顯微鏡觀察樣本再礦化后礦物質(zhì)含量的變化分析紫地榆提取物對根面齲的再礦化效果。(3)測定紫地榆活性成分對變形鏈球菌和粘性放線菌的最低抑菌濃度(MIC)及最低殺菌濃度(MBC),再以低于MIC的4個濃度梯度配制含藥的TPY液體培養(yǎng)基測定紫地榆活性成分對2種口腔常駐細菌產(chǎn)酸的影響。(4)采用硅膠、SephadexLH-20凝膠等現(xiàn)代色譜分離材料對紫地榆活性部位(正丁醇萃取物)進行分離純化,再通過波譜學(xué)(核磁共振波譜)方法對分離的化合物進行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果:(1)紫地榆提取物對常駐口腔細菌生長和產(chǎn)酸均有不同程度的抑制作用。(2)紫地榆正丁醇、乙酸乙酯、乙醇提取物對變形鏈球菌的最低抑菌濃度分別為4.00 g/L、4.00 g/L、8.00 g/L;紫地榆提取物在最低抑菌濃度時對早期根面齲的發(fā)展有抑制作用;偏光顯微鏡觀察結(jié)果和激光掃描共聚焦顯微鏡分析顯示紫地榆提取物對早期根面齲的再礦化作用效果:乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物乙醇提取物水提取物,其中再礦化效果較好的是4.5 mg/mL乙酸乙酯提取物組和4.5 mg/mL正丁醇提取物組。(3)紫地榆活性成分(沒食子酸、五倍子酸甲酯、兒茶素、鞣花酸)可影響致齲菌生長代謝并能有效抑制其產(chǎn)酸。(4)從紫地榆正丁醇部位中首次分離得到四個化學(xué)成分:胡蘿卜苷(daucosterol),齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖苷(Oleanolic acid 3-O-β-D -xylopyranoside),1 個雙黃酮(3,2'-Epilarixinol),3,3',4-三甲基鞣花酸-4'-O-β-D-葡萄糖苷(3,3',4-tri-methylellagic acid-4'-O-β-D-glucopyranoside)。結(jié)論:紫地榆提取物對常駐口腔細菌生長和產(chǎn)酸有抑制作用,并能抑制根面齲脫礦并促進其再礦化,從而有效抑制人工早期根面齲的發(fā)展,其效果較好的是紫地榆正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物;紫地榆活性成分(沒食子酸、五倍子酸甲酯、兒茶素、鞣花酸)對變形鏈球菌和粘性放線菌生長及產(chǎn)酸均有抑制作用。對紫地榆正丁醇提取物提取物進行分離純化得到胡蘿卜苷(daucosterol),齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖苷(Oleanolic acid 3-O-β-D-xylopyranoside),1個新的雙黃酮(3,2,-Epilarixinol),3,3',4-三甲基鞣花酸-4'-O-β-D-葡萄糖苷(3, 3'4-tri-methylellagic acid-4'-O-β-D-glucopyranoside)四個化合物。
【圖文】：

紫地榆防齲活性部位和活性成分的篩選