【摘要】：糖類不僅是植物生命活動的能源物質(zhì)和骨架成分,而且具有抗輻射、抗腫瘤、抗病毒及免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用。因此糖類物質(zhì)的定量、定性以及結(jié)構(gòu)分析成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。由于糖的種類多、極性大、結(jié)構(gòu)相似,且無紫外或熒光吸收基團(tuán),一般要先通過化學(xué)標(biāo)記將其轉(zhuǎn)化為具有紫外或熒光吸收的衍生物,再對其進(jìn)行測定。然而目前所報(bào)道的大多數(shù)衍生化試劑在對還原糖進(jìn)行直接標(biāo)記時,會破壞還原糖環(huán)狀結(jié)構(gòu)的完整性,導(dǎo)致糖失去本身構(gòu)型,衍生所得的產(chǎn)物與原來的糖存在著明顯差異,從而使某些還原糖無法得到分離而影響測定。本文旨在建立一種新的還原糖兩步衍生化方法克服這一難題,即采用乙酰丙酮先與還原糖在弱堿條件下生成糖苷酮,保留糖環(huán)狀結(jié)構(gòu)的完整性;再與2,4-二硝基苯肼在酸性體系中生成糖酮腙衍生物后進(jìn)行HPLC分析。對此,取得了以下的研究成果和結(jié)論:(1)通過對衍生化條件和色譜條件的優(yōu)化以及含量測定的一系列方法學(xué)考察,結(jié)果表明本文所建立的柱前兩步衍生化HPLC法可用于中藥水煎液中木糖、果糖、葡萄糖、乳糖等8種還原糖的分析測定。該法克服了大多數(shù)衍生化試劑無法修飾果糖,和直接衍生化造成單糖結(jié)構(gòu)開環(huán),使部分糖因失去構(gòu)型而無法得到分離的問題。(2)用已建立的方法對71種常用中藥中還原糖進(jìn)行了測定。分別從中藥所含還原糖種類及含量差異、中藥藥理活性、中藥藥用部位、中藥藥性及中藥分類等方面探究與中藥中所含還原糖種類及含量之間的關(guān)系。結(jié)果表明,中藥所含還原糖種類及含量與中藥藥理活性和中藥藥用部位有關(guān),而與中藥藥性及中藥的分類無關(guān)。(3)首次對決明子、喜樹、槐樹、毛豆及女貞子各部位中還原糖的分布及曬干前后的還原糖含量變化進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示葡萄糖在各藥材葉中的含量最高,其次是莖;在藥材曬干過程中,麥芽糖和乳糖發(fā)生了部分降解,含量降低,而葡萄糖和半乳糖含量升高。(4)用該法測定了成熟柿果中還原糖的種類及含量,測定結(jié)果與報(bào)道的基本一致,表明該法除了可以用于中藥水煎液中還原糖的測定,還可用于柿果樣本中還原糖的測定,進(jìn)一步拓寬了該方法的應(yīng)用范圍。(5)本文除測定了已知的還原糖種類及含量外,還總結(jié)了所測樣品中部分未知還原糖出峰情況,這將為后續(xù)進(jìn)一步研究提供參考依據(jù)。
【圖文】：

圖 5 還原糖酮腙衍生物紫外最大吸收波長在 229nm 處測定還原糖酮腙衍生物，色譜雜峰較多，且各峰響應(yīng)值均低于 370nm處的。因此為了提高測定的選擇性和靈敏度，最終選擇 370nm 作為檢測波長。2.3.1.2 流動相的選擇由于每個還原糖都對應(yīng)兩種衍生化產(chǎn)物，因此在色譜峰上每個還原糖會顯示兩個峰（見附錄圖 S1-S8），這就大大增加了分離難度，使需要進(jìn)行分離的物質(zhì)包括衍生化試劑 DNP 在內(nèi)達(dá)到了 17 種，因此為了更好的對衍生化產(chǎn)物進(jìn)行分離，本研究初步選用 3 種流動相進(jìn)行分離條件的優(yōu)化，結(jié)果見圖 6。色譜條件：柱溫：40℃；流速：1.2mL/min；進(jìn)樣量：10μL。流動相：甲醇（A）-水（B）。流動相 a：0-40min，40%A。流動相 b：0-22min，33% A；22-27min，，33%-40% A；27-30min，40%-50% A；30-35min，50%A；35-38min，50%-33% A；38-40min，33%A。

圖 15 兩峰面積比值對果糖含量百分比的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可通過 HPLC 測得 Glc-DNP1/Fru-DNP1（A1）與 Glc-DNP2/Fru-后，將兩峰面積比值（A1/A2）代入上述圖中的標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)，即可總含量中果糖所占的百分比，相應(yīng)地，葡萄糖所占的百分比也可以用如下一系列方程求得樣品中葡萄糖和果糖的各自含量：0041a+1.7815 b 2818a+551736b)X-(6675+97104) X X I 表示 A1/A2；a 表示果糖和葡萄糖混合液中果糖的含量百分比；混合液中葡萄糖的含量百分比；Y 表示 A1與 A2面積和；X 表示葡量；X1表示果糖的含量；X2表示葡萄糖的含量。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2604215