【摘要】：類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。常累積對(duì)稱的肢體小關(guān)節(jié),以侵蝕性滑膜炎為主要病變,可導(dǎo)致軟骨和骨質(zhì)的破壞,使關(guān)節(jié)功能受限、最終發(fā)生關(guān)節(jié)畸形,嚴(yán)重影響RA患者的生活質(zhì)量。在RA疾病的治療中,抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)滑膜組織和調(diào)節(jié)體內(nèi)細(xì)胞亞群的失衡有關(guān)。赤雹(Thladiantha dubia Bunge)屬葫蘆科多年蔓生草本植物,藥用部位主要為塊根,為滿族民間常用藥材。其多用于治療跌打損傷、腰腿痛、風(fēng)濕痛等,無(wú)明顯的毒副作用,治療效果顯著。本研究通過(guò)采用與RA患者病理機(jī)制相似的膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)大鼠模型,探討赤雹根總皂苷(Total saponins of Thladiantha Dubia Root,TSTR)對(duì)CIA大鼠滑膜和脾臟中IL-12、IL-21及IL-23表達(dá)的影響,以了解TSTR治療RA的相關(guān)機(jī)理。目的:觀察TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜和脾臟中IL-12、IL-21與IL-23表達(dá)的影響,探討TSTR治療RA的作用機(jī)理,為T(mén)STR在臨床治療RA提供治療方向和科學(xué)依據(jù)。方法:1分組、造模及給藥80只SPF級(jí)8周齡雄性Wistar大鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)取10只作為正常對(duì)照(Normal control,NC)組,其余大鼠均腹腔注射(Intraperitoneal injection,ip)5%水合氯醛(1 ml/100 g)麻醉,剪去背部及尾根部的鼠毛,多點(diǎn)注射牛Ⅱ型膠原蛋白與FCA的混合制劑,以注射點(diǎn)周?chē)@現(xiàn)白泡為佳,1周后再加強(qiáng)注射1次復(fù)制CIA模型。從初次免疫后第14天開(kāi)始,計(jì)算大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)值,若AI≥4則判定造模成功。將模型大鼠分層隨機(jī)分為模型對(duì)照(Model control,MC)組、雷公藤多苷(Tripterygium Glycoside,TG,12 mg·kg~(-1))組和TSTR低、中、高劑量組(20、40、80 mg·kg~(-1)),每組10只。給藥組大鼠每天灌胃(ig)給藥1次,NC組和MC組大鼠ig等體積蒸餾水,連續(xù)給藥35 d。2檢測(cè)指標(biāo)2.1計(jì)算AI值;2.2 HE觀察滑膜病理學(xué)變化;2.3免疫組化檢測(cè)滑膜中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表達(dá);2.4 RT-qPCR檢測(cè)滑膜中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表達(dá);2.5免疫組化檢測(cè)脾臟中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表達(dá);2.6 RT-qPCR檢測(cè)脾臟中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表達(dá)結(jié)果:1 TSTR對(duì)大鼠AI值的影響以AI值≥4判定RA大鼠建模成功。治療前,與NC組比,所有模型大鼠AI值均顯著升高(P0.01);治療后,與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠AI值均顯著降低(P0.01),TG組大鼠AI值顯著降低(P0.01)。2 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中病理變化的影響與NC組比較,MC組滑膜細(xì)胞布局紊亂,內(nèi)部可見(jiàn)新生血管及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)給藥治療后,與MC組比較,TSTR 20 mg·kg~(-1)組和TG組未見(jiàn)新生血管和炎性細(xì)胞浸潤(rùn),TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組可見(jiàn)少量新生血管和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。3 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表達(dá)的影響3.1 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-12蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-12蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01);與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-12蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-12蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。3.2 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-21蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-21蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-21蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-21蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。3.3 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-23蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-23蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-23蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-23蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。4 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23mRNA表達(dá)的影響4.1 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-12mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-12mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-12mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-12mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。4.2 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-21mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-21mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-21mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-21mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。4.3 TSTR對(duì)CIA大鼠滑膜中IL-23mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠滑膜中IL-23mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠滑膜中IL-23mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01),TG組大鼠滑膜中IL-23mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。5 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表達(dá)的影響5.1 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-12蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-12蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-12蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠脾臟中IL-12蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。5.2 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-21蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-21蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-21蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠脾臟中IL-21蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。5.3 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-23蛋白表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-23蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-23蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠脾臟中IL-23蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。6 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-12、IL-21和IL-23mRNA表達(dá)的影響6.1 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-12mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-12mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-12mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠脾臟中IL-12mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。6.2 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-21mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-21mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-21mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01),TG組大鼠脾臟中IL-21mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。6.3 TSTR對(duì)CIA大鼠脾臟中IL-23mRNA表達(dá)的影響與NC組比,MC組大鼠脾臟中IL-23mRNA表達(dá)顯著升高(P0.01),與MC組比,TSTR 20 mg·kg~(-1)組、TSTR 40 mg·kg~(-1)組和TSTR 80 mg·kg~(-1)組大鼠脾臟中IL-23mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01或P0.05),TG組大鼠脾臟中IL-23mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。結(jié)論:1 TSTR能顯著降低AI值,說(shuō)明TSTR對(duì)大鼠CIA有明顯的治療作用;2 TSTR對(duì)大鼠CIA的顯著治療作用,與下調(diào)滑膜和脾臟中IL-12、IL-21及IL-23蛋白和mRNA的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2603897