【摘要】：黃芪經(jīng)非解乳糖鏈球菌FGM(分離于雞盲腸內(nèi)容物)發(fā)酵處理后,多糖的提取得率有顯著提高,其促生長(zhǎng)、修復(fù)肝損傷及調(diào)節(jié)小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞成熟的生物活性也有一定程度的改善,但發(fā)酵黃芪多糖(FAPS)對(duì)免疫抑制小鼠腸道黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用還未見(jiàn)研究報(bào)道。本論文研究了 FGM菌株發(fā)酵黃芪后多糖的超聲輔助提取工藝和結(jié)構(gòu)表征,分析了發(fā)酵黃芪多糖對(duì)小鼠腸道黏膜免疫的保護(hù)作用,旨在為發(fā)酵提取的黃芪多糖進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供理論支持。1.為更高效地利用發(fā)酵黃芪提取多糖,采用超聲輔助提取法,利用單因素試驗(yàn)、Box-Behnken及Design-Expert軟件設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),通過(guò)響應(yīng)面法分析得到關(guān)于發(fā)酵黃芪粗多糖(CFAPS)得率的提取時(shí)間、液料比和提取功率的模型方程,各因素對(duì)CFAPS得率的影響程度以液料比、提取時(shí)間和提取功率依次遞減,其中液料比與功率交互作用最為顯著。最佳工藝參數(shù)為提取溫度50℃、提取時(shí)間60 min、液料比8 mL/g及提取功率480 W,得率為7.35±0.08%,高于傳統(tǒng)的熱水浸提法(6.95±0.24%)。結(jié)果表明,超聲輔助提取法的應(yīng)用能夠在縮短提取時(shí)間的同時(shí)提高多糖得率。2.為探討黃芪發(fā)酵后多糖的結(jié)構(gòu)表征及抗氧化活性的變化,通過(guò)不同的化學(xué)方法檢測(cè),FAPS的總糖含量(86.34±1.19%)和硫酸基含量(1.36±0.05%)略高于黃芪多糖(APS)的總糖含量(77.33±2.60%)和硫酸基含量(1.19±0.03%),而FAPS的蛋白含量(6.38±0.62%)略低于APS(7.01±0.94%)。兩者均無(wú)還原糖及酚類。通過(guò)高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè),APS的主要單糖摩爾比為 Glc:Gal:Ara=27.92:5.20:2.86,而 FAPS 的主要單糖摩爾比為 Glc:Gal:Ara=23.45:2.50:3.16。通過(guò)高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)檢測(cè),FAPS的平均分子量低于APS,尤其是在高分子量區(qū)段。通過(guò)紅外光譜(FT-IR)、原子力顯微鏡(AFM)及剛果紅實(shí)驗(yàn)檢測(cè),兩者均含有吡喃糖和α-糖苷鍵,FAPS顆粒直徑及高度均小于APS,且兩者均不含三股螺旋結(jié)構(gòu)。通過(guò)抗氧化活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè),FAPS表現(xiàn)出更好的DPPH和羥基自由基清除能力。結(jié)果表明,黃芪發(fā)酵后多糖的結(jié)構(gòu)表征無(wú)明顯差異,而抗氧化活性的改善可能與平均分子量下降有關(guān)。3.為探討FAPS對(duì)免疫抑制小鼠腸道黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用,采用血常規(guī)、組織切片、ELISA、RT-PCR等方法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)連續(xù)3d腹腔注射60mg/kg環(huán)磷酰胺(CY)可有效建立腸道黏膜免疫抑制模型,連續(xù)10 d灌胃400、600 mg/kg FAPS能夠恢復(fù)體重、免疫器官指數(shù)、白細(xì)胞數(shù)量以及腸組織形態(tài),調(diào)節(jié)SIgA a-chain和pIgR的基因表達(dá)量促進(jìn)SIgA分泌,增加血清中IgA、IgG、IgM及IL-2、IFN-γ含量,恢復(fù)腸道的總抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。結(jié)果表明,中、高劑量FAPS能夠改善免疫抑制小鼠的腸道黏膜免疫功能。4.為探討FAPS對(duì)免疫抑制小鼠腸道上皮屏障功能的影響,采用RT-PCR、Western blotting及組織免疫熒光檢測(cè),發(fā)現(xiàn)連續(xù)3d腹腔注射60 mg/kg CY能夠顯著降低小腸組織中緊密連接(TJ)和黏附連接(AJ)相關(guān)蛋白的表達(dá),連續(xù)10 d灌胃400、600mg/k FAPS能夠促進(jìn)Ecadherin、Occludin、ZO-1、ZO-2、ZO-3、Cingulin 及 Claudin-2 的基因表達(dá),同時(shí)能夠促進(jìn) ZO-1、E-cadherin、Claudin-2及Claudin-7的蛋白表達(dá)。結(jié)果表明,中、高劑量FAPS具有保護(hù)和維持TJ/AJ蛋白表達(dá)量和完整性的作用,通過(guò)調(diào)節(jié)腸道上皮細(xì)胞屏障功能改善CY造成的腸道黏膜損傷。
【圖文】：

Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｔｉｇｈｔ邋ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ邋（Ａ）邋（Ｆａｓａｎｏｅｔ邋ａｌ．，邋２００８）邋ａｎｄ邋ａｄｈｅｒｅｎ邋ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ邋（Ｂ）．逡逑緊密連接是由多種蛋白參與合成的并可與肌動(dòng)蛋白環(huán)結(jié)構(gòu)及功能性連接的蛋白質(zhì)復(fù)合體，如逡逑圖１．２Ａ所不。組成蛋白質(zhì)復(fù)合體的蛋白主要有兩種：一種為跨膜蛋白（Ｉｎｔｅｇｒａｌ邋ｍｅｍｂｒａｎｅ），如逡逑閉封蛋白（Ｃｌａｕｄｉｎ）、閉合蛋白（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）及連接黏附分子（Ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ邋ａｄｈｅｓｉｏｎ邋ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ＪＡＭＳ）；逡逑另一種為外周膜蛋白（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ邋ｍｅｍｂｒａｎｅ），又稱細(xì)胞質(zhì)斑塊蛋白（Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ邋ｐｌａｑｕｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎｓ），逡逑如邋ＺＯ邋（Ｚｏｎｕｌａｏｃｃｌｕｄｅｎｓ）家族、扣帶蛋白（Ｃｉｎｇｕｌｉｎ）、Ｓｙｍｐｌｅｋｉｎ邋及邋７Ｈ６邋等（ＭｉｔｉｃａｎｄＡｎｄｅｒｓｏｎ，逡逑１９９８）。緊密連接的主要功能首先是封閉上皮細(xì)胞的間隙，形成一道與外界隔離的封閉帶，保證組逡逑織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定；其次是形成上皮細(xì)胞膜蛋白與膜脂分子側(cè)向擴(kuò)散的屏障，從而維持上皮細(xì)胞的逡逑極性（Ｃｉｔｉ邋ａｎｄ邋Ｃｏｒｄｅｎｏｎｓｉ，１９９８）0逡逑黏附連接是與肌動(dòng)蛋白絲相連的錨定連接，如圖１．２邋Ｂ所示，細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附連接稱逡逑７逡逑

關(guān)于提取溫度對(duì)ＣＦＡＰＳ得率的影響。在不同的溫度水平（４０、５０、６０、７０和８０°Ｃ）下進(jìn)行逡逑超聲輔助提取，其余因素水平分別為：提取時(shí)間６０邋ｍｉｎ、液料比１５邋ｍＬ／ｇ及提取功率３６０邋Ｗ。如逡逑圖２．１邋Ａ可知，粗多糖得率起初在４０邋°Ｃ至５０邋°Ｃ的條件下呈現(xiàn)小幅升高，隨后出現(xiàn)降低并趨于平逡逑穩(wěn)。因此，由提取溫度的單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，在５０邋°Ｃ條件下ＣＦＡＰＳ得率最高，因此選定５０邋°Ｃ逡逑為最佳的提取溫度。逡逑關(guān)于提取時(shí)間對(duì)ＣＦＡＰＳ得率的影響。在不同的時(shí)間水平（２０、４０、６０、８０和１００邋ｍｉｎ）下進(jìn)逡逑行超聲輔助提取，其余因素水平分別為：提取溫度５０邋°Ｃ、液料比１５邋ｍＬ／ｇ及提取功率３６０邋Ｗ。如逡逑圖２．１邋Ｂ可知，粗多糖得率起初在２０邋ｍｉｎ至６０邋ｍｉｎ的條件下逐步升高，隨后趨于平穩(wěn)，而在１００逡逑ｍｉｎ時(shí)出現(xiàn)大幅下降。因此，，由提取時(shí)間單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，在６０邋ｍｉｎ條件下ＣＦＡＰＳ得率最逡逑高，因此選定６０邋ｍｉｎ為最佳的提取時(shí)間。逡逑關(guān)于液料比對(duì)ＣＦＡＰＳ得率的影響。在不同的液料比水平（５、１０、１５、２０和２５邋ｍＬ／ｇ）下進(jìn)逡逑行超聲輔助提取，其余因素水平分別為：提取溫度５０邋°Ｃ、提取時(shí)間６０邋ｍｉｎ及提取功率３６０邋Ｗ。逡逑如圖２．１邋Ｃ可知，粗多糖得率起初在５邋ｍＬ／ｇ至１０邋ｍＬ／ｇ的條件下呈現(xiàn)小幅升高，隨后逐步降低。逡逑因此
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 安勝英;馬學(xué)會(huì);劉觀忠;;發(fā)酵中藥添加劑對(duì)肉仔雞免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2015年05期

2 郭云霞;吳國(guó)江;魏萌;韓愈杰;劉月琴;郝慶紅;;響應(yīng)面法優(yōu)選N-14菌株發(fā)酵黃芪總多糖的工藝條件[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年05期

3 郝紅梅;劉必旺;;酵母發(fā)酵技術(shù)對(duì)黃芪中黃酮含量的影響[J];山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

4 劉必旺;許凱霞;郭羽;王一捷;李敏;解冬;;黃芪藥渣發(fā)酵產(chǎn)物富硒酵母對(duì)免疫低下糖尿病大鼠的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2014年06期

5 陳雷;張建梅;孫合美;秦波;谷巍;;乳酸菌 芽孢菌發(fā)酵黃芪對(duì)小鼠免疫功能作用的研究[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年01期

6 郭羽;;黃芪酵母菌發(fā)酵液抗腫瘤活性研究[J];山西中醫(yī);2013年08期

7 張凱;王學(xué)智;張景艷;秦哲;孟嘉仁;楊志強(qiáng);李建喜;;赤芍、何首烏和發(fā)酵黃芪提取物抗氧化作用研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年15期

8 郭羽;劉必旺;徐榮芳;薛慧清;李艷彥;閆潤(rùn)紅;周然;;酵母發(fā)酵技術(shù)對(duì)黃芪中多糖含量的影響[J];山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年03期

9 陳麗艷;李月;張迎;金爽;方自若;王偉明;;黃芪經(jīng)側(cè)耳菌發(fā)酵后多糖成分及含量的變化[J];食品工業(yè)科技;2011年10期

10 王曦;許曉燕;鄭林用;余夢(mèng)瑤;江南;楊志榮;羅霞;;乳酸菌發(fā)酵黃芪的抗疲勞保健功能研究[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2011年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 左濤;魷魚墨多糖改善化療小鼠腸道黏膜免疫的作用及機(jī)理探討[D];中國(guó)海洋大學(xué);2015年

2 秦哲;黃芪發(fā)酵后主要有效成分變化分析及多糖對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 趙圣振;乳酸菌固體發(fā)酵黃芪工藝及其在斷奶仔豬上的應(yīng)用研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 史洪濤;黃芪—枯草芽孢桿菌發(fā)酵制劑的制備及其在肉雞上的應(yīng)用研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 傅曉雪;黃芪的香菇發(fā)酵及發(fā)酵液免疫效果的研究[D];西南大學(xué);2009年

4 魏巍;靈芝—黃芪液體發(fā)酵條件優(yōu)化及緩解體力疲勞功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2603540