發(fā)布時間：2020-03-27 19:07

【摘要】：目的為了探究趕黃草和葛花配伍制備的含藥血清對乙醇誘導(dǎo)下的L-02肝細(xì)胞的影響及其機(jī)制。方法SD大鼠50只隨機(jī)分為5組,分別給予趕黃草配伍葛花1:1水煎液,2:1水煎液,1:2水煎液,生理鹽水和凱西萊灌胃制備含藥血清。體外培養(yǎng)L-02肝細(xì)胞,將其分為:空白組,模型組,趕黃草配伍葛花1:1組,2:1組,1:2組和凱西萊組。各組先加入相應(yīng)的含藥血清,1小時后除空白組外,其余各組均給予100 mmol/L乙醇誘導(dǎo)損傷24h。MTT法檢測L-02細(xì)胞存活率情況,酶標(biāo)儀檢測各組培養(yǎng)液及細(xì)胞中肝酶ALT、AST、SOD、MDA的活性,篩選出對乙醇損傷肝細(xì)胞模型具有更好治療作用的趕黃草和葛花配伍組合。real-time PCR法檢測TNF-α、IL-6、Nrf2、HO-1 mRNA的表達(dá),Western-blot法檢測TNF-α,IL-6、Nrf2、HO-1蛋白的表達(dá),從而探討趕黃草配伍葛花組方對乙醇損傷肝細(xì)胞模型的作用機(jī)制及最佳配伍。結(jié)果1.對乙醇損傷肝細(xì)胞轉(zhuǎn)氨酶活性的影響:模型組ALT、AST均顯著高于空白組,給藥后各治療組值均低于模型組且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但各配伍組之間的ALT、AST值相比較,未見效果最佳配伍組。2.對乙醇損傷肝細(xì)胞SOD、MDA活性的影響:模型組MDA顯著高于空白組,而SOD顯著低于空白組;各個給藥組與模型組相比,MDA低于模型組,SOD顯著高于模型組且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但各組之間的SOD、MDA值相比較,未見效果更突出的配伍組。3.機(jī)制研究中,趕黃草配伍葛花組方均能顯著下調(diào)乙醇損傷肝細(xì)胞模型中TNF-α和IL-6的基因和蛋白的表達(dá),說明其具有調(diào)節(jié)體內(nèi)促炎細(xì)胞因子的平衡的作用。1:2組下調(diào)TNF-α蛋白效果最好。4.機(jī)制研究中,趕黃草配伍葛花組方均能顯著上調(diào)乙醇損傷肝細(xì)胞模型中Nrf2和HO-1的基因和蛋白的表達(dá),說明其具有調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化與抗氧化平衡的作用。2:1組上調(diào)Nrf2基因效果最好。1:1組上調(diào)Nrf2蛋白效果最好。結(jié)論(1)各組趕黃草配伍葛花含藥血清對乙醇誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷有顯著的治療作用,1:1組治療趨勢稍明顯。(2)趕黃草配伍葛花含藥血清可通過下調(diào)TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表達(dá),同時上調(diào)Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表達(dá),從而降低L-02肝細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和減輕氧化應(yīng)激,進(jìn)而發(fā)揮抗酒精性肝損傷作用,可能存在新的通路。
【圖文】：

圖 1:含藥血清對乙醇損傷 L-02 細(xì)胞中 TNF-α， IL-6 mRNA 的影響s of Drug-containing serum on expression of TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 mRNL-02 liver cells induced by Ethanolern blot 法檢測 TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 蛋白的表達(dá)F-α，IL-6 蛋白的表達(dá)顯示：與空白組相比，模型組 TNF-α，IL-6 蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，有P<0.01）。與模型組相比，1:1 組、2:1 組、和凱西萊組 TNF-α，IL-6下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。配伍治療組間 1:2 組下調(diào) TNF-α 效組，見下圖及表 7。

干預(yù)劑量TNF-a I0 0.262±0.180 0.2100mmol/L 0.887±0.016* 0.812.5g/kg 0.627±0.007△0.618.75g/kg 0.669±0.047△0.518.75g/kg 0.488±0.047△0.560mg/kg 0.654±0.022△0.5<0.01；△與模型組比較 P<0.01。Western-blot 圖片:a b c d e f
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2603262