【摘要】：背景尋找天然產(chǎn)物的活性成份已成為現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)的途徑之一�，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)小檗堿具有廣泛的藥理學作用,其作為抗腫瘤藥物先導化合物的應(yīng)用已被廣泛報道。在前期研究中采用計算機反向虛擬篩選發(fā)現(xiàn),小檗堿與腫瘤新生血管密切相關(guān)的血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)有良好的結(jié)合作用,因此推斷該小檗堿具有抗腫瘤血管生成的潛能。目的探討小檗堿對腫瘤血管生成的影響及相關(guān)機制。方法通過反向虛擬篩選尋找小檗堿潛在的靶點;分子對接實驗、表面等離子體實驗實驗、酶活性實驗和免疫印跡實驗評價小檗堿與靶點之間的相互作用;MTT實驗和遷移抑制實驗評價小檗堿對EA.hy926細胞增殖、遷移的影響;雞胚絨毛尿囊膜實驗評價小檗堿對血管新生的抑制作用;免疫印跡實驗評價小檗堿在分子水平作用于相關(guān)靶點產(chǎn)生的生物學效應(yīng)。結(jié)果反向篩選和分子對接實驗結(jié)果顯示小檗堿與VEGFR2有良好的結(jié)合作用,這一結(jié)果通過表面等離子體實驗和酶活性實驗進一步證實;MTT實驗、遷移抑制實驗和雞胚絨毛尿囊膜實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠顯著抑制EA.hy926細胞增殖、遷移,并能夠減少雞胚絨毛尿囊膜表面的血管生成;此外,免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠通過抑制VEGFR2的活性進而阻斷VEGFR2介導的Akt/mTOR/P70S6K信號通路的激活。結(jié)論小檗堿能夠結(jié)合并抑制VEGFR2的活性、阻斷其介導的Akt/mTOR/P70S6K信號通路的激活,進而發(fā)揮抗腫瘤血管生成作用。
【圖文】：

1. 研究背景惡性腫瘤是嚴重影響人體健康和威脅人類生命的重要疾病之一。它已成為人類死亡的第二個原因，也是最難治療的疾病之一。血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵過程。沒有血管生成，最大的腫瘤只能長到 1-2mm，很容易使用傳統(tǒng)的化療藥物治療[1-2]。因此，通過阻斷腫瘤新生血管的生成，已成為抑制腫瘤生長的腫瘤治療新策略[3]。1.1 腫瘤血管的特征與正常組織血管相比，腫瘤脈管系統(tǒng)表現(xiàn)出非典型的形態(tài)學特征。腫瘤血管網(wǎng)絡(luò)的特征呈現(xiàn)出擴張、曲折和無組織的血管，血管不成熟和缺乏壁細胞導致滲透性不足，灌注不良和缺氧增加（圖 1）[4-5]。

KDR)[17-18]。 與 RTK 家族其它成員一樣均為單次跨膜蛋白，，主要包括膜外結(jié)合域、膜內(nèi)酪氨酸激酶和跨膜區(qū)組成。其膜內(nèi)域有蛋白酪氨酸激酶活性并ATP 結(jié)合位點和下游信號蛋白結(jié)合位點[19]。VEGFR2 酪氨酸激酶域的晶體顯示該區(qū)域內(nèi)的肽鏈折疊成 2 個蛋白小葉，2 個蛋白小葉由一段被稱為絞(Hinge Region)的肽鏈連接，2 個蛋白小葉之間扁平的空隙為 ATP 結(jié)合位點（[20]。VEGFR2 抑制劑能夠與 ATP 競爭性與 VEGFR2 結(jié)合，從而阻礙 VEGF自磷酸化，抑制酶的活性，血管生成信號通路被阻斷[21]。血管內(nèi)皮細胞生長與相應(yīng)的 VEGFR2 結(jié)合后，會引起受體的二聚化和自身的交互磷酸化，磷酸受體會引起胞內(nèi)酪氨酸殘基磷酸化，非受體酪氨酸激酶同源結(jié)構(gòu)-2（SH-2）與 VEGF-2 特異性結(jié)合，隨后激活下游信號蛋白，從而發(fā)揮其生物學效應(yīng)上述研究表明，在血管生成的信號通路中，VEGFR2 發(fā)揮著關(guān)鍵作用，目前越多的研究以 VEGFR2 為靶點，合成新型抗癌藥物。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285

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本文編號：2601658