【摘要】：背景尋找天然產(chǎn)物的活性成份已成為現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)的途徑之一。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)小檗堿具有廣泛的藥理學(xué)作用,其作為抗腫瘤藥物先導(dǎo)化合物的應(yīng)用已被廣泛報(bào)道。在前期研究中采用計(jì)算機(jī)反向虛擬篩選發(fā)現(xiàn),小檗堿與腫瘤新生血管密切相關(guān)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)有良好的結(jié)合作用,因此推斷該小檗堿具有抗腫瘤血管生成的潛能。目的探討小檗堿對(duì)腫瘤血管生成的影響及相關(guān)機(jī)制。方法通過(guò)反向虛擬篩選尋找小檗堿潛在的靶點(diǎn);分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)、表面等離子體實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)、酶活性實(shí)驗(yàn)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小檗堿與靶點(diǎn)之間的相互作用;MTT實(shí)驗(yàn)和遷移抑制實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小檗堿對(duì)EA.hy926細(xì)胞增殖、遷移的影響;雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小檗堿對(duì)血管新生的抑制作用;免疫印跡實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小檗堿在分子水平作用于相關(guān)靶點(diǎn)產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果反向篩選和分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小檗堿與VEGFR2有良好的結(jié)合作用,這一結(jié)果通過(guò)表面等離子體實(shí)驗(yàn)和酶活性實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí);MTT實(shí)驗(yàn)、遷移抑制實(shí)驗(yàn)和雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠顯著抑制EA.hy926細(xì)胞增殖、遷移,并能夠減少雞胚絨毛尿囊膜表面的血管生成;此外,免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠通過(guò)抑制VEGFR2的活性進(jìn)而阻斷VEGFR2介導(dǎo)的Akt/mTOR/P70S6K信號(hào)通路的激活。結(jié)論小檗堿能夠結(jié)合并抑制VEGFR2的活性、阻斷其介導(dǎo)的Akt/mTOR/P70S6K信號(hào)通路的激活,進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤血管生成作用。
【圖文】：

1. 研究背景惡性腫瘤是嚴(yán)重影響人體健康和威脅人類生命的重要疾病之一。它已成為人類死亡的第二個(gè)原因，也是最難治療的疾病之一。血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵過(guò)程。沒(méi)有血管生成，最大的腫瘤只能長(zhǎng)到 1-2mm，很容易使用傳統(tǒng)的化療藥物治療[1-2]。因此，通過(guò)阻斷腫瘤新生血管的生成，已成為抑制腫瘤生長(zhǎng)的腫瘤治療新策略[3]。1.1 腫瘤血管的特征與正常組織血管相比，腫瘤脈管系統(tǒng)表現(xiàn)出非典型的形態(tài)學(xué)特征。腫瘤血管網(wǎng)絡(luò)的特征呈現(xiàn)出擴(kuò)張、曲折和無(wú)組織的血管，血管不成熟和缺乏壁細(xì)胞導(dǎo)致滲透性不足，灌注不良和缺氧增加（圖 1）[4-5]。

KDR)[17-18]。 與 RTK 家族其它成員一樣均為單次跨膜蛋白，，主要包括膜外結(jié)合域、膜內(nèi)酪氨酸激酶和跨膜區(qū)組成。其膜內(nèi)域有蛋白酪氨酸激酶活性并ATP 結(jié)合位點(diǎn)和下游信號(hào)蛋白結(jié)合位點(diǎn)[19]。VEGFR2 酪氨酸激酶域的晶體顯示該區(qū)域內(nèi)的肽鏈折疊成 2 個(gè)蛋白小葉，2 個(gè)蛋白小葉由一段被稱為絞(Hinge Region)的肽鏈連接，2 個(gè)蛋白小葉之間扁平的空隙為 ATP 結(jié)合位點(diǎn)（[20]。VEGFR2 抑制劑能夠與 ATP 競(jìng)爭(zhēng)性與 VEGFR2 結(jié)合，從而阻礙 VEGF自磷酸化，抑制酶的活性，血管生成信號(hào)通路被阻斷[21]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)與相應(yīng)的 VEGFR2 結(jié)合后，會(huì)引起受體的二聚化和自身的交互磷酸化，磷酸受體會(huì)引起胞內(nèi)酪氨酸殘基磷酸化，非受體酪氨酸激酶同源結(jié)構(gòu)-2（SH-2）與 VEGF-2 特異性結(jié)合，隨后激活下游信號(hào)蛋白，從而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)上述研究表明，在血管生成的信號(hào)通路中，VEGFR2 發(fā)揮著關(guān)鍵作用，目前越多的研究以 VEGFR2 為靶點(diǎn)，合成新型抗癌藥物。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2601658