【摘要】：苦丁茶冬青Ilex kudincha C.J.Tseng是冬青科冬青屬喬木植物,其葉作茶是苦丁茶主流商品之一�？喽〔瓒嗷瘜W(xué)成分豐富,其中三萜皂苷類化合物是其主要的活性成分,如何提高苦丁茶冬青皂苷的含量是近年研究的熱點(diǎn)。本文利用生物轉(zhuǎn)化的方法,篩選高效菌株,通過對生物轉(zhuǎn)化的初始pH值、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、搖床轉(zhuǎn)速等條件的研究,獲得最佳發(fā)酵工藝條件,并對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的抗氧化、抗腫瘤作用進(jìn)行研究,為苦丁茶冬青皂苷的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本文選取四種微生物菌株分別為大腸埃希氏菌、凝結(jié)芽孢桿菌、黑根霉、黑曲霉發(fā)酵苦丁茶冬青總皂苷,HPLC系統(tǒng)分析比較轉(zhuǎn)化前后化合物的含量變化。結(jié)果表明,大腸埃希氏菌、凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵后各個(gè)單體皂苷含量變化不明顯,黑根霉發(fā)酵后各個(gè)單體皂苷含量顯著降低,黑曲霉發(fā)酵后苦丁皂苷C、苦丁皂苷E含量顯著降低,苦丁皂苷A、苦丁皂苷D含量顯著提高。本文以苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的含量為指標(biāo),在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化黑曲霉轉(zhuǎn)化苦丁茶冬青總皂苷生成苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的條件,最佳工藝條件為:初始pH值6.0,發(fā)酵溫度25℃,發(fā)酵時(shí)間7d,搖床轉(zhuǎn)速120r/min。通過硅膠柱色譜、ODS柱色譜對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,并利用HPLC、NMR鑒定檢識,確定轉(zhuǎn)化產(chǎn)物結(jié)構(gòu),外標(biāo)法顯示純度均≥95%。本文對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的抗氧化作用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,包括還原能力、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力、抑制脂質(zhì)過氧化能力的測定。結(jié)果表明,苦丁皂苷A的抑制脂質(zhì)過氧化能力顯著(P0.05),苦丁皂苷D的DPPH自由基清除能力顯著(P0.05),苦丁皂苷C的羥自由基和超氧陰離子自由基清除能力顯著(P0.05),苦丁皂苷E的抗氧化活性與苦丁皂苷C的抗氧化活性規(guī)律是一致的。本文對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的抗腫瘤作用也進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,包括人肺癌細(xì)胞NCI-H460、人肝癌細(xì)胞Bel-7402、人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901、人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞HCT116、人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞U251的抑制作用。結(jié)果表明,苦丁皂苷A的人肺癌細(xì)胞NCI-H460抑制作用顯著(P0.05),苦丁皂苷D的人肝癌細(xì)胞Bel-7402、人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901抑制作用顯著(P0.05),苦丁皂苷C的人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞HCT116、人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞U251抑制作用顯著(P0.05),苦丁皂苷E的腫瘤抑制作用不顯著(P0.05)。
【圖文】：

圖 1-1 苦丁茶冬青中常見三萜母核及糖基Figure 1-1 Common triterpenoid saponins nucleus and sugar bases in Ilex kudingcha表 1-1 苦丁茶冬青中三萜皂苷類化合物結(jié)構(gòu)Table 1-1 The structure of triterpenoid saponins in Ilex kudingcha稱 母核 R1R2R3參考文side G A S3Me Glc [13side H A Ara Me Glc [13side L A S4Me Glc [19side M A S4Me S1 [19side P A S5CH2OH Glc [19inoside B A Glc Me Glc [14inoside D A Ara CH2OH Glc [14inoside E A S2Me Glc [14inoside W A S6Me S1[21oside A A SMe S[22

151. 苦丁皂苷 C;2. 苦丁皂苷 A;3. 苦丁皂苷 E;4. 苦丁皂苷 D圖 1-2 苦丁茶冬青皂苷轉(zhuǎn)化前后 HPLC 圖Figure 1-2 HPLC diagram before and after saponin transformation in Ilex kudingcha
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2600231