【摘要】：目的:本研究通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)了解白夏湯抑制銅綠假單胞菌的效果及最小抑菌濃度;通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)了解白夏湯在體內(nèi)抑制銅綠假單胞菌的效果;通過(guò)生物膜實(shí)驗(yàn)觀察白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成和結(jié)構(gòu)的影響;通過(guò)臨床研究觀察白夏湯治療四肢創(chuàng)面銅綠假單胞菌感染的效果。方法:(1)白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的體外抑菌實(shí)驗(yàn),利用含藥培養(yǎng)基測(cè)定白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌效果;用K-B法測(cè)定白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌效果;采用倍比稀釋法測(cè)定白夏湯的MIC。(2)白夏湯溻漬對(duì)SD大鼠銅綠假單胞菌感染模型的干預(yù)作用,建立SD大鼠背部組織急性缺損銅綠假單胞菌感染模型,創(chuàng)面用白夏湯溻漬,并與慶大霉素對(duì)比,在實(shí)驗(yàn)第1、3、6、9、14天觀察創(chuàng)面面積大小變化,創(chuàng)面肉芽中細(xì)菌含量,病理切片觀察創(chuàng)面肉芽組織中巨噬細(xì)胞及炎性細(xì)胞含量。(3)白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的干預(yù)作用,采用瓊脂平板稀釋法測(cè)定白夏湯的MIC,白夏湯梯度濃度作用于銅綠假單胞菌生物膜,結(jié)晶紫染色法于650nm處測(cè)其A值,測(cè)定白夏湯的SMIC_(50)和SMIC_(80)值,以評(píng)價(jià)白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌生物膜的干預(yù)作用;實(shí)驗(yàn)第6h、1d、3d、7d觀察白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌生物膜的形成和結(jié)構(gòu)的影響,并與慶大霉素和空白組作對(duì)照。(4)白夏湯溻漬對(duì)銅綠假單胞菌感染的臨床療效觀察,選取創(chuàng)面缺損并有銅綠假單胞菌感染的患者作為研究對(duì)象,60例患者平均分成白夏湯組和慶大霉素組,治療組給予白夏湯每日溻漬,對(duì)照組給予常規(guī)換藥慶大霉素濕敷,療程14天,觀察創(chuàng)面滲出、肉芽生長(zhǎng)、創(chuàng)面面積、炎性指標(biāo)及中醫(yī)癥候積分等的變化情況。結(jié)果:(1)白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果,白頭翁、夏枯草和白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌均有明顯的抑制作用,抑菌效果按從大到小排列為,白夏湯夏枯草白頭翁。經(jīng)Kruskal-Wallis檢驗(yàn),Chi-Square=25.818,P0.05,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白頭翁對(duì)銅綠假單胞菌的MIC為1:8,夏枯草對(duì)銅綠假單胞菌的MIC為1:16,白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的MIC為1:32。(2)白夏湯溻漬對(duì)SD大鼠銅綠假單胞菌感染模型的干預(yù)作用結(jié)果,用藥第1-3天紅腫逐漸消退,第1-6天膿液逐漸增多,以后逐漸減少,第9-14天膿液消失;早期隨著膿液的增多創(chuàng)面肉芽開(kāi)始生長(zhǎng),第6天創(chuàng)面肉芽已明顯生長(zhǎng),創(chuàng)面變淺,面積減小,第9-14天,肉芽長(zhǎng)滿創(chuàng)面,創(chuàng)面進(jìn)一步縮小,與慶大霉素組和空白組比較,差異具有顯著性(P0.01)。第14天在創(chuàng)面中心及邊緣取部分組織塊,作病理切片,行光學(xué)顯微鏡觀察,白夏湯組可見(jiàn)巨噬細(xì)胞數(shù)量較多;慶大霉素組可見(jiàn)較多淋巴、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞,可見(jiàn)少量巨噬細(xì)胞;對(duì)照組可見(jiàn)大量壞死組織及炎性細(xì)胞。感染創(chuàng)面肉芽中細(xì)菌含量,白夏湯組和硫酸慶大霉素組均明顯減少,造模后第5天,白夏湯組和慶大霉素組肉芽中細(xì)菌含量與空白組比較均有顯著差異(P0.01),造模后第9天,白夏湯組和慶大霉素組肉芽中細(xì)菌含量均明顯降低,兩者無(wú)明顯差異(P0.05)。(3)白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成和結(jié)構(gòu)的干預(yù)作用,通過(guò)瓊脂平板稀釋法測(cè)得白夏湯MIC為64mg/ml,白夏湯梯度濃度作用于銅綠假單胞菌生物膜,結(jié)晶紫染色法于650nm處測(cè)其A值,測(cè)得白夏湯的SMIC_(50)和SMIC_(80)值分別為512mg/ml和128mg/ml,慶大霉素的SMIC_(50)和SMIC_(80)值分別為64μg/ml和8μg/ml。6h時(shí)光鏡顯示空白組可見(jiàn)細(xì)菌處于初期粘附階段,白夏湯組和慶大霉素組細(xì)菌粘附量有所減少,但仍然可見(jiàn);1d時(shí)光鏡顯示空白組微菌落初步形成,而白夏湯組和慶大霉素組微菌落沒(méi)有完整形成;3d時(shí)光鏡顯示空白組可以看到大量的細(xì)菌融合在一起,生物被膜已初步形成,白夏湯組和慶大霉素組未形成生物膜;7d時(shí)掃描電鏡顯示,空白組形成了完整的生物被膜,白夏湯組和慶大霉素組均可見(jiàn)生物被膜被破壞。(4)白夏湯溻漬對(duì)創(chuàng)面銅綠假單胞菌感染的臨床療效觀察,年齡經(jīng)秩和檢驗(yàn)P0.05,性別經(jīng)卡方檢驗(yàn)P0.05,治療前創(chuàng)面面積、證候積分、炎性指標(biāo)經(jīng)t檢驗(yàn)P值均0.05,兩組治療前各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,具有可比性。治療兩周后臨床總療效,經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩周后兩組創(chuàng)面減小率,經(jīng)t檢驗(yàn)P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩組治療前后中醫(yī)證候主癥積分,經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn),P0.01,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩組治療前后中醫(yī)證候積分比較,經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn),P0.01,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩周后中醫(yī)證候主癥積分減少率,經(jīng)t檢驗(yàn),P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩周后中醫(yī)證候積分減少率,經(jīng)t檢驗(yàn),P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩周后兩組患者WBC、NE%及CRP的比較,經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn),P0.01,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,通過(guò)組內(nèi)比較和組間比較,治療組在降低WBC、NE%及CRP含量方面優(yōu)于對(duì)照組;兩組不同時(shí)間創(chuàng)面面積,組內(nèi)與治療前比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),組間比較第3、6、9天P0.05,第14天P0.05,后期有差異;兩組不同時(shí)間創(chuàng)面愈合速度,組內(nèi)比較兩組早期均減慢(P0.05),后期均加快(P0.05),組間比較早期實(shí)驗(yàn)組較快(P0.05),中期和后期兩組相當(dāng)(P0.05)。結(jié)論:(1)白頭翁、夏枯草和白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌均有抑菌作用,抑菌效果按從大到小排列為:白夏湯夏枯草白頭翁。(2)白夏湯對(duì)SD大鼠銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合,抑制銅綠假單胞菌生長(zhǎng)作用。(3)白夏湯具有抑制銅綠假單胞菌早期粘附生長(zhǎng)形成生物膜和破壞已形成的成熟生物膜作用。(4)白夏湯能抑制創(chuàng)面銅綠假單胞菌生長(zhǎng)作用,促進(jìn)患者感染創(chuàng)面愈合作用,能改善中醫(yī)癥候癥狀。
【圖文】：

白頭翁、夏枯草、白夏湯對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑均值示意圖

三組創(chuàng)面面積的比較（mm2）
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2599906