【摘要】：背景:阿爾茨海默病(Alzheimer' s Disease,AD)是一種進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病,其特征在于記憶喪失,多重認(rèn)知障礙以及個(gè)性和行為的變化。阿爾茨海默病是最常見的癡呆形式,占所有病例的約60-80%。世界衛(wèi)生組織(WHO)和阿爾茨海默病疾病國際(ADI)估計(jì)醫(yī)療費(fèi)用的老年人將繼續(xù)增加,而且診斷的癡呆癥病例數(shù)量將在2050年增加三倍。年齡相關(guān)的神經(jīng)變性疾病,如AD和癡呆,是當(dāng)今社會(huì)最大的挑戰(zhàn)之一。補(bǔ)腎益智方是由本科室賴世隆教授所創(chuàng)立,前期的實(shí)驗(yàn)及臨床研究數(shù)據(jù)表明,該方不僅能夠緩解癡呆患者的臨床癥狀,且能保護(hù)多種癡呆動(dòng)物模型的學(xué)習(xí)記憶功能。其保護(hù)作用機(jī)制主要表現(xiàn)為抗Aβ的毒性作用、抑制神經(jīng)元細(xì)胞Ca2+內(nèi)流、抗氧化應(yīng)激及抗細(xì)胞凋亡等,具有較大的研究價(jià)值。但是中藥復(fù)方成分較為復(fù)雜,其主要有效藥物成分難以說明,因而本研究所對該方進(jìn)行了深入的研究,對全方水煎液進(jìn)行提取,其中乙酰乙酯提取部位具有明顯的促進(jìn)細(xì)胞增殖及抗Aβ毒性作用。在此基礎(chǔ)上,我們開展了補(bǔ)腎益智方其提取部位對IBO致癡呆大鼠模型影響的實(shí)驗(yàn)研究。目的:探討補(bǔ)腎益智方有效提取部位三號藥(BSYZ-E)對IBO致癡呆大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力及其保護(hù)作用,期望幫助找到治療AD的理想方法,為該方的進(jìn)一步開發(fā)及臨床使用提供更有效的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。本次實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)在于研究補(bǔ)腎益智方有效提取部位三號藥能否通過減弱IBO誘導(dǎo)大鼠海馬的興奮性毒性來改善老年性癡呆的癥狀及病理改變。方法:3月齡SPF級SD大鼠把動(dòng)物按性別分層隨機(jī)分成6個(gè)組,分別是空白對照組、模型組、陽性藥組(多奈哌齊)、BSYZ-E低劑量組、BSYZ-E中劑量組、BSYZ-E高劑量組。雌雄各半,給予相應(yīng)藥液灌胃4周。行為學(xué)采用Morris水迷宮、條件恐懼實(shí)驗(yàn)檢測各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。HE染色方法檢測大鼠海馬病理改變;比色法檢測大鼠海馬乙酰膽堿酯酶(AchE)、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活力;western-blot法及qPCR 法檢測海馬 BDNF、GDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB、TrkC 及 ERK1/2的mRNA及蛋白表達(dá)水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測大鼠海馬BDNF水平。數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期采用重復(fù)測量方差分析。其余實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.行為學(xué)測試包括Morris水迷宮和條件恐懼實(shí)驗(yàn)(1)Morris水迷宮行為學(xué)結(jié)果在BSYZ-E治療IBO致癡呆大鼠的實(shí)驗(yàn)中,模型組與對照組大鼠相比,定位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期延長(P0.01),空間探索試驗(yàn)在目標(biāo)象限停留時(shí)間縮短、跨越平臺(tái)次數(shù)亦減少。(2)條件恐懼實(shí)驗(yàn)結(jié)果在BSYZ-E治療IBO致癡呆大鼠的實(shí)驗(yàn)中,模型組與對照組大鼠相比,模型組凝滯時(shí)間明顯較短(P0.05)。與模型組相比,陽性藥多奈哌齊組、BSYZ低、高劑量組凝滯時(shí)間明顯較長(P0.05);BSYZ中劑量組凝滯時(shí)間有延長趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)2.HE染色法檢測結(jié)果說明BSYZ-E及陽性藥(多奈哌齊)對IBO致癡呆大鼠腦內(nèi)神經(jīng)元有一定程度的保護(hù)作用。3.比色法檢測結(jié)果顯示,BSYZ-E可以降低IB0大鼠海馬中AChE活性,提高IBO大鼠海馬中ChAT活性。4.Western-blot法檢測結(jié)果顯示,BSYZ-E可以提高IBO大鼠海馬中BDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB 及 ERK1/2、pCREB 的蛋白表達(dá)水平。5.qPCR法檢測結(jié)果顯示,BSYZ-E可以提高IBO大鼠中海馬BDNF、GDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB、TrkC 及 ERK1/2 的 mRNA 表達(dá)水平。6.ELISA試劑盒檢測結(jié)果顯示,BSYZ-E可以明顯增加IBO大鼠海馬中BDNF含量。結(jié)論:水迷宮測試和條件恐懼實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示BSYZ-E均可以在一定程度上改善IBO大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。BSYZ-E可以通過提高IBO大鼠海馬中BDNF、NGF、pCREB、SYT、SYP、PS095、TrkA、TrkB及ERK1/2的的表達(dá),進(jìn)而改善IBO大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。BSYZ-E改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用機(jī)制可能與激活BDNF/Erk/CREB信號通路,改善膽堿能系統(tǒng)酶活性、減少神經(jīng)元損傷、改善突觸結(jié)構(gòu)域相關(guān)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)BSYZ-E對老年癡呆有一定的治療作用,值得進(jìn)行深一步研究。
【圖文】：

廣州中醫(yī)藥大學(xué)２０１７屆碩士學(xué)位論文邐邐逡逑表２邋Ｍｏｒｒｉｓ水迷宮定位航行逃避潛伏期（Ｉ±ｓ）邐逡逑別（ｎ）邐第１天邋第２天邋第３天邐第４天邐第５天逡逑組（２０）邐４４．邋７２士２．邋９５邐３７．邋３２土３．邋８１邐２０．邋７８±２．邐７６邐１７．邐７６土２．邐３７邐１４．邐０２士邋１．邋７２逡逑組（２０）邋＃＃邐５７．邋７７士０．８９邐５７．邋６土０．邋８９邐５７．邋３６士邋１．邐０３邐５８．邐８９土０．邐３２邐５６．邐１０士邋１．邋５２逡逑組（１８）邐＊＊邐４９．邋７３土２．邋９４邐４５．邐６１土３．邋７６邐４０．邋２２士４．邋３８邐４３．邐２１±３．邐７７邐３９．邋９８土４．邐０８逡逑組（１９）邐＊＊邐４８．邋７１邋士３．邋６７邐４６．邐０５士４．邋０２邐３４．邋８５士４．邋２３邐３６．邋５８土４．邋１４邐３５．邋６９土４．邐６７逡逑組（１９）邐＊＊邐４７．邋１１邋土３．邋２９邐４９．邐８９士２．邋３１邐４８．邋００土３．邋２０邐３６．邋５２土３．邋２９邐４１．邋２１±３．邐９２逡逑組（１９）邐＊＊邐５２．邋４２±１．邋８４邐５３．邐３８士邋１．邋８１邐４６．邋５２士２．邋４１邐４８．邐６８±３．邐０６邐４１．邋４４土３．邐８２逡逑對照組比較，，酣＂＜0．0１；與模型組比較，＊＊戶＜０．０１１逡逑

組：ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ）逡逑２．空間探索試驗(yàn)逡逑空間探索站臺(tái)穿越次數(shù)結(jié)果顯示，表３、圖３表示大鼠在原平臺(tái)穿越次數(shù)的組間逡逑比較。與對照組相比，模型組在原平臺(tái)穿越次數(shù)較多，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞0．0５）；逡逑與模型組相比，陽性藥多奈哌齊組、ＢＳＹＺ＿Ｅ低、中、高劑量組在原平臺(tái)穿越次數(shù)較多’逡逑但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞0．0５）。逡逑表４、圖４表示大鼠原平臺(tái)象限停留時(shí)間的組間比較。與對照組相比，模型組在逡逑原平臺(tái)象限停留時(shí)間較少，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）；與模型組相比，陽性藥多逡逑奈哌齊組、ＢＳＹ－Ｅ低、中、高劑量組原平臺(tái)象限停留時(shí)間較多
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 代建峰;高建青;方三華;;補(bǔ)腎益智方對老年性癡呆大鼠腦組織海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的影響[J];浙江中醫(yī)雜志;2008年11期

2 李敏才;胡振武;肖志宏;;補(bǔ)腎益智方對癡呆型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能影響[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年10期

3 鐘振國,賴世隆,劉茂才,程淑意;補(bǔ)腎益智方對老年性癡呆細(xì)胞模型的影響(英文)[J];中國臨床康復(fù);2004年28期

4 張魁華,賴世隆,王奇,程淑意,陳云波;補(bǔ)腎益智方對老年性癡呆模型動(dòng)物空間探索學(xué)習(xí)記憶功能的改善作用[J];中草藥;2002年12期

5 張魁華,賴世隆,王奇,程淑意,陳云波;補(bǔ)腎益智方對老年性癡呆模型動(dòng)物定位航行學(xué)習(xí)記憶功能的改善作用[J];中草藥;2002年10期

6 鐘振國 ,賴世隆 ,劉茂才 ,程淑意;補(bǔ)腎益智方對AD細(xì)胞模型影響的研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年15期

7 張魁華,賴世隆,胡鏡清,陳云波,程淑意,王奇;補(bǔ)腎益智方對AD細(xì)胞模型鈣離子內(nèi)流、細(xì)胞骨架、細(xì)胞凋亡的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2002年07期

8 張魁華,賴世隆,胡鏡清,王奇,程淑意;補(bǔ)腎益智方對AD動(dòng)物模型大腦神經(jīng)元Tau蛋白及其相關(guān)酶類的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2002年06期

9 高潔,賴世隆,胡鏡清,雷娓娓,吳玲霓;補(bǔ)腎益智方對Alzheimer病模型大鼠突觸的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

10 鐘振國,劉茂才,賴世隆,高潔,程淑意;補(bǔ)腎益智方對由A_β片段神經(jīng)毒性誘導(dǎo)NG108-15細(xì)胞老年性癡呆模型神經(jīng)遞質(zhì)釋放影響的研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年01期

本文編號：2598800