【摘要】：目的:通過建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,觀察黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)對人乳腺癌MDA-MB-231細胞株裸鼠移植瘤生長抑制作用及其對腫瘤細胞凋亡的影響,研究黃芪多糖抑制三陰性乳腺癌MDA-MB-231生長、誘導(dǎo)其凋亡的作用及其可能分子機制。方法:將人乳腺癌細胞MDA-MB-231注射于BALB/c-nu裸鼠右側(cè)腋窩皮下建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,乳腺癌裸鼠移植瘤瘤體生長達100 mm~3時,將乳腺癌移植瘤裸鼠隨機分為三組,模型組(M組:予0.9%生理鹽水)、APS低劑量組(A組:予200 mg·kg~(-1)APS藥物)、APS高劑量組(B組:予400 mg·kg~(-1)APS藥物),每組6只;另選取6只正常裸鼠設(shè)為正常組(N組:予0.9%生理鹽水);每天灌胃給藥200μL,連續(xù)21天;給藥期間,每隔2天觀察記錄裸鼠體重并測量瘤體大小。實驗結(jié)束,觀察比較APS低、高劑量組與模型組乳腺癌裸鼠體重、腫瘤質(zhì)量、瘤體體積的變化,計算腫瘤抑制率及各組裸鼠脾臟指數(shù);蘇木精-伊紅(HE)染色觀察乳腺癌腫瘤組織及各組裸鼠肝肺組織的細胞形態(tài)學(xué)改變;原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測乳腺癌腫瘤組織中細胞產(chǎn)生的凋亡;蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測乳腺癌腫瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase等的表達水平。結(jié)果:(1)APS藥物干預(yù)后,APS低、高劑量組乳腺癌裸鼠移植瘤體的質(zhì)量和體積與模型組比較均減小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),APS低、高劑量組的腫瘤抑制率分別是37.9%和59.57%;(2)APS藥物干預(yù)后,APS低、高劑量乳腺癌裸鼠的脾指數(shù)與模型組比較均有增加(P0.05);而APS低、高劑量組與正常組裸鼠脾指數(shù)比較則差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(3)HE染色檢測實驗中部分組織的細胞形態(tài)學(xué)變化。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn),APS低、高劑量組的腫瘤組織出現(xiàn)明顯細胞凋亡狀態(tài),凋亡細胞增多。同時,肝、肺組織細胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)均正常,腫瘤細胞未見肝、肺組織轉(zhuǎn)移;(4)TUNEL檢測乳腺癌腫瘤組織中細胞凋亡情況。實驗證實了APS能導(dǎo)致乳腺癌腫瘤組織細胞發(fā)生凋亡;同時APS低、高劑量組腫瘤組織細胞凋亡率增加,與模型組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(5)Western blot檢測乳腺癌腫瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白的表達,經(jīng)實驗研究發(fā)現(xiàn),相比較于模型組,APS低、高劑量組腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達量減少(P0.05),同時Bax、Caspase-9及Caspase-7的蛋白表達量增加(P0.05);結(jié)論:(1)APS在體內(nèi)能有效抑制MDA-MB-231人乳腺癌裸鼠移植瘤的生長,其機制可能與APS能誘導(dǎo)人乳腺癌MDA-MB-231腫瘤組織細胞發(fā)生凋亡相關(guān);(2)APS通過劑量依賴性地影響人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠腫瘤組織凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9及Caspase-7的表達水平,參與乳腺癌細胞的線粒體凋亡途徑,促進了乳腺癌腫瘤組織細胞發(fā)生凋亡,進而抑制人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的生長。
【圖文】：

準(zhǔn)差（ x±s）形式表示，經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)實驗中各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，方差齊，故本實驗數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，認(rèn)為結(jié)果 P < 0.05 則差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。3 結(jié)果3.1 MDA-MB-231 人乳腺癌移植瘤裸鼠的一般狀況經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，裸鼠成功接種 MDA-MB-231 人乳腺癌細胞后，各乳腺癌裸鼠的攝食量略有減少。同時在乳腺癌細胞接種后第 7 天，細胞接種部位皮下出現(xiàn)灰白色細小結(jié)節(jié)，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，，小結(jié)節(jié)不消失，質(zhì)韌，并逐步增長，說明乳腺癌細胞接種成功，乳腺癌裸鼠移植瘤模型成功建立，其成功率為 100%。如圖 1，隨著時間的延長，可以看到裸鼠乳腺癌腫瘤體積不斷增大，可以作為評價乳腺癌腫瘤生長的指標(biāo)。APS 藥物干預(yù)前各組裸鼠體重、乳腺癌瘤體體積差別無統(tǒng)計學(xué)意義APS 干預(yù)實驗過程中，裸鼠情況均可，模型組以及 APS 藥物干預(yù)組裸鼠飲食、情志、活動等情況相對正常組裸鼠略差，各實驗組裸鼠未出現(xiàn)死亡情況。

3.6 APS 對乳腺癌移植瘤腫瘤組織及肝、肺組織形態(tài)的影響HE 染色觀察乳腺癌瘤體組織，模型組中可見乳腺癌腫瘤細胞呈現(xiàn)不規(guī)則的團塊狀或條索狀分布，腫瘤細胞出現(xiàn)明顯的異型性；同時可見乳腺癌細胞核表現(xiàn)為圓形或者卵形，細胞核出現(xiàn)明顯增大和異型性表現(xiàn)（圖 2M）；而 APS 低、高劑量組腫瘤細胞則表現(xiàn)出不同程度的核固縮以及細胞核深染，同時出現(xiàn)細胞核碎片，凋亡細胞增多（圖 2A、B）。由此可以推測 APS 可能誘導(dǎo)了乳腺癌細胞的凋亡。由于 MDA- MB-231 乳腺癌細胞非常容易出現(xiàn)侵襲和轉(zhuǎn)移的情況，其中多見內(nèi)臟轉(zhuǎn)移[40]。為驗證本實驗中乳腺癌裸鼠內(nèi)臟轉(zhuǎn)移情況，取裸鼠肺與肝臟組織，行 HE 染色并在光鏡下觀察（圖 3），發(fā)現(xiàn)各實驗組裸鼠的肝臟與肺的組織、細胞形態(tài)均正常，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的腫瘤轉(zhuǎn)移現(xiàn)象；此外，APS 藥物干預(yù)組與正常組相比，其肝、肺并無明顯損傷。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2598855