【摘要】：目的:觀察金花茶多酚(Camellia nitidissima polyphenols,CNP)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖和胰腺的影響,和CNP對(duì)胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞(INS-1)的增殖活力影響、抗鏈尿佐菌素(streptozotocin,STZ)損傷和抗氧化作用,探討金花茶多酚對(duì)胰腺的保護(hù)作用和抗糖尿病作用。方法:建立2型糖尿病大鼠模型的方法為高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周結(jié)合腹腔注射小劑量STZ(30mg/kg)。設(shè)正常組,高脂組,模型組,CNP(50、100、200 mg/kg)組。各CNP組預(yù)防給藥7天后造模,用快速血糖儀測(cè)定各組大鼠的空腹血糖值(FBG)。造模后分別于第1,2,3天摘取大鼠胰腺,制成石蠟切片,蘇木精-伊紅(HE)染色,觀察胰腺組織病理變化;免疫組化法(IHC)標(biāo)記胰島素分泌情況并統(tǒng)計(jì)胰島細(xì)胞陽(yáng)性率。建立INS-1細(xì)胞損傷模型的方法為STZ(160μg/mL)干預(yù)24小時(shí)。設(shè)正常對(duì)照組,損傷組(STZ組),預(yù)防組(CNP 5、10、20μg/m L+STZ組)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的INS-1細(xì)胞按1×10~4個(gè)/孔接種于96孔板,細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后分組給藥。利用CCK-8試劑盒檢測(cè)CNP對(duì)INS-1細(xì)胞活性的影響,和對(duì)STZ損傷的細(xì)胞增殖活力的影響。建立INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的方法為Cu~(2+)(150μM)干預(yù)2小時(shí)。設(shè)正常對(duì)照組,模型組(Cu~(2+)組),抗氧化組(Cu~(2+)+CNP 5、10、20μg/mL組)。利用CCK-8試劑盒檢測(cè)CNP對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激模型增殖活力的影響。利用丙二醛(MDA)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA的含量。結(jié)果:與正常組和高脂組比較,模型組大鼠FBG顯著升高(P0.05),胰島β細(xì)胞有明顯形態(tài)學(xué)改變,胰島細(xì)胞陽(yáng)性率明顯降低(P0.05)。與模型組比較,CNP中、高劑量(100,200 mg/kg)組FBG顯著降低(P0.05),并且呈現(xiàn)一定程度的劑量相關(guān)性,胰島β細(xì)胞損傷程度明顯降低,胰島細(xì)胞陽(yáng)性率顯著回升(P0.05),CNP低劑量組無(wú)明顯差異。與STZ損傷組比較,CNP中、高劑量(10、20μg/mL)預(yù)防組細(xì)胞存活率顯著升高(P0.05),細(xì)胞形態(tài)學(xué)較正常對(duì)照組更為接近。與氧化應(yīng)激模型組比較,CNP中、高劑量(10、20μg/mL)抗氧化組細(xì)胞存活率顯著升高(P0.05),MDA含量顯著降低(P0.05)。結(jié)論:金花茶多酚能夠降低2型糖尿病大鼠空腹血糖,保護(hù)大鼠胰腺組織,減輕胰島β細(xì)胞損傷,促進(jìn)胰島素分泌,而且能夠顯著性降低細(xì)胞中MDA水平,提示金花茶多酚能保護(hù)胰腺組織,增強(qiáng)胰島β細(xì)胞分泌胰島素的功能,發(fā)揮抗糖尿病作用,其作用機(jī)制可能與抗氧化、抑制氧化應(yīng)激有關(guān)。
【圖文】：

采用 SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示，組間差異性判斷采用 t 檢驗(yàn)或單因素方差分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 金花茶多酚純度采用福林酚法測(cè)定茶多酚含量。以沒(méi)食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，制作沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖 1�；貧w方程為：y = 1.4975x - 0.01（R2= 0.9905）。精密稱取 CNP 樣品 0.54 mg，配制成 1 mL 水溶液，按照福林酚法檢測(cè)，在765 nm 吸光度為 0.07847。根據(jù)公式（1）計(jì)算，樣品中茶多酚含量為 97.04%

2.2.3 金花茶多酚對(duì)大鼠胰腺組織形態(tài)的影響造模后分別于第 1，2，3 天分組摘取大鼠胰腺，制成石蠟切片。采用蘇木精—伊紅（HE）染色法標(biāo)記細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核著紫藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)著紅色。光鏡下觀察：正常組大鼠胰島為近圓形的細(xì)胞團(tuán)，分散于胰腺腺泡之間，邊緣界限清晰整齊，數(shù)量較多，細(xì)胞分布均勻。胞漿豐富，細(xì)胞核多為橢圓形，大小均一。高脂組與正常組的胰腺組織相似。模型組胰島數(shù)量顯著下降，分布稀疏，邊緣不清，胰島細(xì)胞數(shù)量減少，松散紊亂，，體積縮小，且組織損傷程度隨時(shí)間加劇。與模型組相比，CNP 中、高劑量組損傷程度明顯改善，且改善情況與劑量和時(shí)間呈一定的正相關(guān)性。見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2598085