【摘要】：第一部分寒痙湯對寒凝型高血壓大鼠血清降鈣素基因相關(guān)肽及松弛素的影響目的:研究中藥復(fù)方寒痙湯對寒凝型高血壓大鼠血清中降鈣素基因相關(guān)肽和松弛素的影響,以探究寒痙湯降低高血壓的相關(guān)機(jī)制。方法:將24只SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、寒痙湯組,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。一周后模型組、寒痙湯組給予含8%高鹽飼料,自由飲水,并且每天置于(-15±2)℃冰箱中。對照組給予正常飼料,自由飲水,置于24℃~26℃,飼養(yǎng)。測量大鼠尾動脈血壓情況,每周三次。從第七周開始寒痙湯組給予中藥灌胃治療,模型組給予生理鹽水灌胃,療程為兩周。用藥兩周后斷頭取血,采用放射免疫法對各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清中降鈣素基因相關(guān)肽進(jìn)行檢測,采用酶聯(lián)免疫吸附法對各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清中松弛素進(jìn)行檢測。結(jié)果:1.血清中降鈣素基因相關(guān)肽CGRP(calcitonin generelated peptide):與正常組比較,模型組血清中CGRP表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05),與模型組比較,寒痙湯組血清中CGRP表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05)。2.血清中松弛素RLX(relaxin):與正常組比較,模型組血清中RLX降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05),與模型組比較,寒痙湯組血清中RLX表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05)。結(jié)論:1.寒痙湯降壓效果可能與升高血清中降鈣素基因相關(guān)肽水平有關(guān)。2.寒痙湯降壓效果可能與升高血清中松弛素水平有關(guān)。第二部分寒痙湯含藥血清對冷刺激大鼠血管平滑肌細(xì)胞UCP2、RXFP2的影響目的:通過體外培養(yǎng)SD大鼠血管平滑肌細(xì)胞并且給予寒冷刺激,研究中藥復(fù)方寒痙湯含藥血清對冷刺激大鼠平滑肌細(xì)胞UCP2、RXFP2的影響,探討寒痙湯對寒凝型高血壓的防治機(jī)制,為臨床上寒痙湯防治動脈粥樣硬化、高血壓等相關(guān)心血管疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:選用大鼠血管平滑肌細(xì)胞株(A7R5),傳代培養(yǎng),取4-6代平滑肌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。以冷刺激溫度20℃為實(shí)驗(yàn)條件分別選擇2h、4h、6h、8h為冷刺激時(shí)間。采用臺盼藍(lán)染色法計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率,采用MTT法對實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組進(jìn)行OD值檢測,選擇最佳冷刺激時(shí)間。選用雄性SD大鼠20只,隨機(jī)分為五組,各組分別中藥灌胃與生理鹽水灌胃,制備大鼠中藥含藥血清,作用于不同組別的平滑肌細(xì)胞。將長滿皿底的平滑肌細(xì)胞隨機(jī)分為正常組、模型組、寒痙湯組、止痙組、麻辛附組,吸棄原培養(yǎng)基,PBS清洗一遍,加入含藥血清:1.正常對照組:DMEM+10%正常大鼠血清;2.模型組:DMEM+10%模型大鼠含藥血清3.寒痙湯組:DMEM+10%寒痙湯大鼠含藥血清;4.止痙組:DMEM+10%止痙散大鼠含藥血清;5.麻辛附組:DMEM+10%麻黃附子細(xì)辛湯大鼠含藥血清。各組分別加入含10%含藥血清細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。含藥血清培養(yǎng)結(jié)束后,模型組、寒痙湯組、止痙組、麻辛附組放入20℃溫度箱給予冷刺激,正常組置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。采用熒光定量PCR、Western-blotting檢測平滑肌細(xì)胞中解偶聯(lián)蛋白2和松弛素受體2的表達(dá)。結(jié)果:1.細(xì)胞冷刺激的溫度設(shè)定20℃,寒冷刺激的時(shí)間在4h存活率降低,4h組與6h組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P(27)0.05。2.血管平滑肌細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白2蛋白表達(dá),與正常組比較,模型組蛋白表達(dá)降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P(27)0.05,與模型組比較,寒痙湯組與麻辛附組、止痙組比較蛋白表達(dá)升高,P(27)0.05或0.01。與寒痙湯組比較,止痙組蛋白表達(dá)降低,P(27)0.05。血管平滑肌細(xì)胞松弛素受體2蛋白表達(dá),與正常組比較,模型組蛋白表達(dá)降低,P(27)0.01,與模型組比較,寒痙湯組、麻辛附組和止痙組蛋白表達(dá)升高,P(27)0.05或0,01,與寒痙湯組比較,麻辛附組蛋白表達(dá)降低,P(27)0.05。3.血管平滑肌細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白2基因表達(dá),與正常組比較,模型組基因表達(dá)降低,P(27)0.05,與模型組比較,寒痙湯組、麻辛附組基因表達(dá)升高,P(27)0.05或0.01,與寒痙湯組比較,止痙組基因表達(dá)降低,P(27)0.05。血管平滑肌細(xì)胞松弛素受體2基因表達(dá),與正常組比較,模型組基因表達(dá)降低,P(27)0.05,與模型組比較,寒痙湯組、麻辛附組和止痙組基因表達(dá)升高,P(27)0.05或0.01,與寒痙湯組比較,麻辛附組、止痙組基因表達(dá)降低,P(27)0.05。結(jié)論:1.寒冷刺激可降低血管平滑肌細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白2和松弛素受體2的表達(dá)。2.寒痙湯可升高寒冷刺激血管平滑肌細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白2和松弛素受體2的表達(dá)。3.寒痙湯較其拆方麻黃細(xì)辛附子湯、止痙散升高血管平滑肌細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白2和松弛素受體2的效果更好。
【學(xué)位授予單位】：河北中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2598029