【摘要】：目的:糖尿病皮膚潰瘍是臨床難愈性創(chuàng)面中比較公認(rèn)的棘手問(wèn)題,臨床上綜合治療方法繁多,但中醫(yī)中藥方面治療手段較匱乏,尤其愈合機(jī)制及抗氧化機(jī)制方面基礎(chǔ)研究較少。本實(shí)驗(yàn)研究是通過(guò)觀(guān)察外用燒傷中藥濕潤(rùn)燒傷膏(MEBO)對(duì)糖尿病皮膚潰瘍模型小鼠創(chuàng)面愈合情況、病理方面改變的影響,進(jìn)一步評(píng)價(jià)MEBO對(duì)糖尿病皮膚潰瘍小鼠創(chuàng)面愈合機(jī)制的干預(yù)作用。通過(guò)檢測(cè)小鼠血清SOD、GSH-px含量,皮損處肌肉組織中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)水平,探討MEBO對(duì)糖尿病皮膚潰瘍小鼠創(chuàng)面抗氧化作用及氧化應(yīng)激的調(diào)控機(jī)制,為臨床應(yīng)用濕潤(rùn)燒傷膏治療糖尿病皮膚潰瘍提供更多的科學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。材料與方法:SPF級(jí)雄性昆明種小鼠40只,實(shí)驗(yàn)前一天,禁食24小時(shí),次日采用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射法,誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型,注射STZ 72小時(shí)后,隨機(jī)檢測(cè)血糖2次或2次以上,大于或等于16.7mmol/L確定糖尿病小鼠模型成功復(fù)制。然后給予小鼠背部去毛,用手術(shù)刀于背部將皮膚做“井”字形切口,切口長(zhǎng)1cm左右,深度至暴露肌肉層。同時(shí)將復(fù)制成功的糖尿病小鼠模型隨機(jī)分為3組,每組10只:分別為模型對(duì)照組、濕潤(rùn)燒傷膏組(實(shí)驗(yàn)組)、康復(fù)新液對(duì)照組(陽(yáng)性對(duì)照組),另設(shè)健康小鼠作為空白對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分別給予康復(fù)新液及濕潤(rùn)燒傷膏進(jìn)行外用藥物換藥干預(yù)創(chuàng)面,每日一次,連續(xù)用藥7天。1周后,連續(xù)觀(guān)察傷口愈合情況并做詳細(xì)記錄;經(jīng)小鼠球后靜脈叢采集全血,檢測(cè)血清中SOD、GSH-PX抗氧化酶含量;HE染色法觀(guān)察肌肉組織的病理變化;采集傷口部位肌肉組織,分為兩塊,一塊兒直接凍存,用于western-blot法檢測(cè)Nrf2、NQO1、HO-1表達(dá)水平;另一塊固定于4%多聚甲醛溶液中,用于IH C法檢測(cè)Nrf2、NQO1、HO-1表達(dá)水平。結(jié)果:1.創(chuàng)面愈合情況:濕潤(rùn)燒傷膏組,康復(fù)新液組創(chuàng)面愈合量率明顯優(yōu)于模型組對(duì)照組(p0.01),愈合速度較快。濕潤(rùn)燒傷膏組,康復(fù)新液組,模型對(duì)照組與空白對(duì)照組創(chuàng)面愈合率比較差異顯著(p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2.HE染色觀(guān)察:造模用藥1周后肌肉組織鏡下病理顯示4組間觀(guān)察有明顯差異性;3.比色法檢測(cè):濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組糖尿病小鼠血清中SOD、GSH-px抗氧化酶含量與模型對(duì)照組相比有明顯差異性(p0.01),濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組,模型對(duì)照組SOD、GSH-px抗氧化酶含量與空白對(duì)照組相比有明顯差異性(p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;4.WB法和IHC法檢測(cè):濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組小鼠肌肉組織中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)水平與模型對(duì)照組相比有明顯差異性(p0.01),濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組,模型對(duì)照組糖尿病皮膚潰瘍小鼠肌肉組織中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組上述蛋白的表達(dá)對(duì)比差異顯著(p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;結(jié)論:1.基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果在一定程度上揭示了濕潤(rùn)燒傷膏提高了糖尿病皮膚潰瘍的愈合率,與康復(fù)新液組比較有差異性,加速了創(chuàng)面愈合的速度。2.外用濕潤(rùn)燒傷膏治療糖尿病皮膚潰瘍小鼠檢測(cè)血清中SOD、GSH-px含量表達(dá)明顯增加,與陽(yáng)性對(duì)照組及模型組比較有明顯差異性;小鼠皮損肌肉利用WB法和IHC法檢測(cè)濕潤(rùn)燒傷膏組Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達(dá)水平都明顯增高,充分揭示了MEBO對(duì)糖尿病皮膚潰瘍小鼠的抗氧化作用及Nrf2如何干預(yù)調(diào)控NQO1、HO-1蛋白的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制。
【圖文】：

大量團(tuán)狀膠原纖維增生，有部分毛細(xì)血管增生；陽(yáng)性對(duì)照組成纖維細(xì)胞、膠原纖維也排列整齊，毛細(xì)血管網(wǎng)萎縮；實(shí)驗(yàn)組肌肉組織中可見(jiàn)成纖維細(xì)胞肥大 ，膠原纖維排列致密成形。附圖一 各組小鼠肌肉組織 HE 染色鏡下觀(guān)察情況圖 1 空白對(duì)照組(HE，200×）圖 2 模型對(duì)照組(HE，200×）

大量團(tuán)狀膠原纖維增生，有部分毛細(xì)血管增生；陽(yáng)性對(duì)照組成纖維細(xì)胞、膠原纖維也排列整齊，毛細(xì)血管網(wǎng)萎縮；實(shí)驗(yàn)組肌肉組織中可見(jiàn)成纖維細(xì)胞肥大 ，膠原纖維排列致密成形。附圖一 各組小鼠肌肉組織 HE 染色鏡下觀(guān)察情況圖 1 空白對(duì)照組(HE，200×）圖 2 模型對(duì)照組(HE，200×）
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2597508