【摘要】：目的尿路結(jié)石為臨床常見病、多發(fā)病,對患者造成巨大的痛苦,且復(fù)發(fā)率高,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。排石沖劑是湖北中醫(yī)名家的驗(yàn)方,配伍嚴(yán)謹(jǐn),臨床療效確切。本研究以草酸鈣結(jié)石大鼠為模型,基于P38MAPK信號通路,觀察排石沖劑對草酸、草酸鈣結(jié)晶所致大鼠腎臟氧化應(yīng)激與炎癥損傷、腎臟局部RAS系統(tǒng)的改變和腎臟細(xì)胞緊密連接改變的影響,探討排石沖劑干預(yù)草酸鈣結(jié)石形成的具體作用機(jī)制,為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供理論支持和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1動物分組、造模與取材1.1動物分組與造模48只雄性SPF級Wistar大鼠(體重180g-220g),隨機(jī)分為A、B、C、D組,A組(空白組),12只(普通大鼠飼料喂養(yǎng)及生理鹽水灌胃,1ml/100g/次,1次/天),B組(模型組),12只(普通大鼠飼料喂,1%乙二醇自由飲水和2%氯化銨溶液灌胃,lml/100g/次,1次/天),C組(排石沖劑組),12只[臨用前將排石沖劑配成0.58g/ml的混懸液(按照體表面積折算接近臨床人用量),造模同時(shí)予中藥混懸液灌胃,1ml/100g/次,1次/天],D組(枸櫞酸鉀組),12只(邊造模邊予枸櫞酸鉀灌胃,25%枸櫞酸鉀溶液lml/100g/次,1次/天)。1.2取材實(shí)驗(yàn)第4周時(shí),將大鼠置于代謝籠收集其24h尿液,將其分為四份并標(biāo)記。分別用真空采血管采集血標(biāo)本,4℃冰箱隔夜靜置后,留取淡黃色的上清液(血清),㧟80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｕ〈笫竽I臟,右腎置4%甲醛溶液中固定;左腎標(biāo)記后置入液氮,后移入㧟80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?標(biāo)本檢測2.1生化檢查用收集的尿液標(biāo)本分別檢測尿草酸、尿生化(尿鈣、磷、鎂),分離備用的血清標(biāo)本檢測BUN、Cr水平,以了解排石沖劑對結(jié)石形成的理化危險(xiǎn)因素和腎功能的影響。2.2病理切片將固定備用的腎組織標(biāo)本做成石蠟切片,觀察腎臟結(jié)晶沉淀及腎臟病理學(xué)改變(Von Kossa's染色)。2.3免疫組化法檢測各組大鼠腎組織MCP-1、TGF-β1、AngⅡ、ACE、ACE2、AT1R及p38MAPK/p-p38MAPK、occludin、ZO-1的蛋白表達(dá)。2.4 Real Time PCR檢測各組大鼠腎組織TGF-β1、MCP-1、AngⅡ、AT1R、ACE、ACE2及p38MAPK、occludin、ZO-1m RNA表達(dá)。2.5 Western blotting檢測各組大鼠腎組織p38MAPK、occludin、ZO-1蛋白表達(dá)。結(jié)果1大鼠一般情況、體質(zhì)量情況、尿液、血清生化及腎臟形態(tài)學(xué)改變1.1大鼠一般情況:B組大鼠第4周時(shí)表現(xiàn)出食欲衰減,活動減少,毛發(fā)枯槁,身體蜷縮等現(xiàn)象,其飲水及尿量減少。而D組和C組大鼠,尿量增加,精神狀況較好,飲食活動未受明顯影響,C組較D組一般情況更佳。1.2大鼠體質(zhì)量情況:大鼠體重治療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。大鼠治療后體質(zhì)量比較。治療后體重情況:與A組比,B組、C組體重較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。和B組比較,C組、D組體重較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。1.3尿液、血清生化:B組大鼠尿草酸、鈣、磷離子水平較A組均明顯升高,尿鎂水平則明顯降低。B組大鼠血清BUN、Cr水平較A組升高。與B組比較,C組、D組大鼠尿草酸、鈣、磷離子水平降低,尿鎂水平升高;BUN、Cr水平也較B組降低。1.4腎臟形態(tài)學(xué)改變:腎組織Ca Ox結(jié)晶評分,B組和C組、D組Ca Ox結(jié)晶評分均顯著高于A組(P0.01);與B組比,C組、D組評分明顯較低(P0.01)。2排石沖劑通過干預(yù)P38MAPK信號通路對大鼠氧化應(yīng)激和炎癥損傷的影響:B組SOD水平降低,MDA水平增高;p/p-p38MAPK、MCP-1和TGF-β1 m RNA和蛋白表達(dá)水平增高,C組MDA、p/p-p38MAPK、MCP-1和TGF-β1等指標(biāo)表達(dá)均降低,SOD水平增高。提示排石沖劑可能通過干預(yù)P38MAPK通路減輕草酸、草酸鈣晶體誘導(dǎo)的大鼠腎臟氧化應(yīng)激和炎癥損傷。3排石沖劑通過干預(yù)P38MAPK信號通路對大鼠腎臟局部RAS系統(tǒng)改變的影響:B組較A組p/p-p38MAPK、Ang II和AT1R、ACE m RNA和蛋白水平均升高,ACE2m RNA和蛋白表達(dá)水平降低。C組較B組p38MAPK、Ang II和AT1R、ACEm RNA和蛋白水平均降低,ACE2m RNA和蛋白表達(dá)水平升高。提示排石沖劑可能通過干預(yù)P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導(dǎo)的大鼠腎臟局部RAS系統(tǒng)的改變,減輕大鼠腎臟損傷并抑制結(jié)石形成。4排石沖劑通過干預(yù)P38MAPK信號通路對大鼠腎臟緊密連接蛋白改變的影響:B組較A組p/p-p38MAPK蛋白和m RNA表達(dá)升高,ZO-1和occludin蛋白和m RNA表達(dá)則較A組均降低;C組較B組p/p-p38MAPK蛋白和m RNA表達(dá)降低,ZO-1和occludin表達(dá)較B組升高,提示排石沖劑可能通過干預(yù)P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導(dǎo)的大鼠腎臟緊密連接的改變。結(jié)論排石沖劑可能通過干預(yù)P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導(dǎo)的大鼠腎臟氧化應(yīng)激和炎癥損傷反應(yīng)、腎臟局部RAS系統(tǒng)改變、腎臟緊密連接的改變,從而起到抑制草酸鈣結(jié)石形成和保護(hù)腎臟的作用。
【圖文】：

圖 1 大鼠體質(zhì)量情況：A 為空白組，，B 為模型組，C 為排石沖劑組，D 為枸櫞酸鉀組；與 A組比較#P＜0.05，##P＜0.01，與 B 組比較，＆P＜0.05，＆＆P＜0.01。3.2 大鼠尿 Ox、尿生化情況大鼠尿 Ox、Ca2+、P3+含量：與 A 組比較，B 組、C 組和 D 組均升高

大鼠體質(zhì)量情況：A 為空白組，B 為模型組，C 為排石沖劑組，D 為枸櫞酸鉀組；#P＜0.05，##P＜0.01，與 B 組比較，＆P＜0.05，＆＆P＜0.01。大鼠尿 Ox、尿生化情況大鼠尿 Ox、Ca2+、P3+含量：與 A 組比較，B 組、C 組和 D 組均升有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與 B 組比較，C 組、D 組均降低，計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。大鼠尿 Mg2+含量：與 A 組比較，B 組及 C均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與 B 組比較，C 組、高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（見圖 2）
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐建華,劉洪實(shí),商洪濤,李祥永,董慧,張廷峰;橘茴排石沖劑治療尿路結(jié)石100例觀察[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2003年12期

2 杜佳林,李顯華,向紹杰,張宏,王玉良;通膽排石沖劑Ⅰ號利膽及抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;1998年01期

3 賴恒,陳昭頡,李黔生,王四旺,陳貴銀,王松培,吳天浪;復(fù)方排石沖劑治療泌尿系結(jié)石315例的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[J];中國醫(yī)藥學(xué)報(bào);1989年04期

4 黃小平;陳協(xié)輝;趙立琳;潘達(dá)亮;黃進(jìn)明;陳日來;;上尿路排石沖劑治療尿路結(jié)石的臨床研究[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年02期

5 王翠玲,賀曉華,葉宇;強(qiáng)力排石沖劑的制備工藝及療效觀察[J];實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2003年02期

6 李淑葉,尹本茹,牟曉虹;通膽排石沖劑1號利膽效應(yīng)的觀察[J];中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2000年03期

7 吳克讓，酈鴻雁，葉根余，方毅，馮丙江，謝華棟，涂華富;強(qiáng)力排石沖劑的實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);1994年01期

8 張蕾,朱蓉貞,王秋霜;排石沖劑中總黃酮的含量測定[J];中國野生植物資源;1996年04期

9 李佩富;國家銀質(zhì)獎(jiǎng)產(chǎn)品——排石沖劑[J];中成藥研究;1985年02期

10 劉川玉;鄧俊剛;唐建紅;何潔;;金沙排石沖劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J];中國民族民間醫(yī)藥;2017年23期

相關(guān)會議論文 前4條

1 李永祝;鄧衛(wèi)鋒;張克禮;郎建新;;復(fù)方排石沖劑的研制[A];全國中成藥學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];1994年

2 喬化民;喬艷;蔡林;吳雪;楊素葉;;薄層色譜法檢測排石沖劑的質(zhì)量[A];《醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》第八屆編委會成立大會暨2009年度全國醫(yī)藥學(xué)術(shù)交流會和臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2009年

3 喬化民;喬艷;蔡林;吳雪;楊素葉;;薄層色譜法檢測排石沖劑的質(zhì)量[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第九屆中藥鑒定學(xué)術(shù)會議論文集——祝賀中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥鑒定分會成立二十周年[C];2008年

4 王光春;鄭軍華;鄢陽;彭波;許云飛;張海民;高其若;楊斌;耿江;;坦索羅辛和排石沖劑治療輸尿管下段小結(jié)石的隨機(jī)對照研究[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 江蘇常州孟河醫(yī)派傳承學(xué)會 張明權(quán);排石沖劑治腎結(jié)石效果好[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳偉棟;排石沖劑對腎結(jié)石大鼠氧化炎癥損傷及p38MAPK、Claudin-14表達(dá)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 曹秋實(shí);排石沖劑對腎結(jié)石大鼠腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷及occludin、ZO-1表達(dá)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 韓晗;基于P38MAPK信號通路探討排石沖劑干預(yù)草酸鈣結(jié)石形成的機(jī)制[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 宋俐;排石沖劑治療尿路結(jié)石的臨床觀察[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2003年

本文編號：2591431