【摘要】：目的:通過九香蟲水提液對錳暴露大鼠的干預(yù)行為,來探討九香蟲水提液對錳暴露大鼠睪酮合成的影響及其機制。方法:48只成年雄性SD大鼠,按照隨機數(shù)字表分為6組,即:空白組、模型組、九香蟲水提液低、中、高劑量干預(yù)組及陽性組,8只/組。模型組、九香蟲水提液各組和陽性組大鼠每天固定時間根據(jù)大鼠體重腹腔注射相應(yīng)體積的氯化錳水溶液(MnCl_2·4H_2O)5 d/w,1次/d,共30天;空白組根據(jù)大鼠體重腹腔注射相應(yīng)體積的生理鹽水。九香蟲水提液低、中、高劑量干預(yù)組在腹腔注射氯化錳的同時,分別灌胃給予50mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg的九香蟲水提液,陽性組在在腹腔注射氯化錳的同時給予櫞酸西地那非水溶液(1.25 mg/kg)灌胃,空白組給予雙蒸水灌胃。7 d/w,1次/d,共30天。對如下指標進行檢測:1.大鼠生殖能力和性功能指標的檢測:大鼠附睪精子數(shù)目、睪丸及雄激素依賴性器官(附睪、精囊腺+前列腺、提肛肌、包皮腺)的臟器系數(shù);2.雄性大鼠相關(guān)行為學觀察實驗,其主要通過觀察15 min之內(nèi)雄性大鼠的交配行為相關(guān)指標,包括大鼠交配行為的四個階段(撲捉、騎跨、插入及射精)的潛伏期及次數(shù);3.蘇木精-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察大鼠睪丸和附睪組織的顯微結(jié)構(gòu)變化,電鏡下觀察睪丸間質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)的變化;4.ELISA法檢測大鼠血漿中睪酮(T)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;5.qPCR檢測睪酮合成通路中的相關(guān)基因star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達情況;6.Western blot檢測睪酮合成通路中的關(guān)鍵蛋白StAR、CYP11A1和HSD3β1的表達情況。結(jié)果:1、精子數(shù)目、睪丸和雄激素依賴性器官的臟器系數(shù):與空白組相比,模型組大鼠在附睪精子數(shù)目,睪丸和雄激素依賴性器官(附睪、提肛肌、精囊腺和前列腺)的臟器系數(shù)間存在顯著性差異(P0.05);經(jīng)過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非水溶液灌胃以后,其附睪精子數(shù)目及雄激素依賴性器官的臟器系數(shù)均有所提高,其中以九香蟲水提液50 mg/kg、100 mg/kg劑量灌胃干預(yù)組和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)組在大鼠附睪精子數(shù)目,雄激素依賴性器官(精囊腺+前列腺以及提肛肌)的臟器系數(shù)方面具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。2、大鼠交配行為:與空白組相比,模型組大鼠在交配行為四個階段的潛伏期明顯延長(P0.05),同時其交配行為四個階段的次數(shù)顯著降低(P0.05);經(jīng)不同劑量九香蟲水提液灌胃干預(yù)后,錳損傷大鼠在交配行為四個階段的潛伏期顯著縮短同時次數(shù)明顯增加,其中以九香蟲水提液低、中劑量灌胃干預(yù)組和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)組最為顯著(P0.05)。3、大鼠睪丸和附睪組織形態(tài):與空白組相比,模型組大鼠睪丸間質(zhì)組織與生精小管之間明顯疏離,生精小管內(nèi)部結(jié)構(gòu)出現(xiàn)較明顯破壞,生精小管內(nèi)觀察到較少精子細胞的存在,各級生精細胞排列紊亂、層數(shù)明顯減少,生精小管內(nèi)部可見部分生精細胞空泡化改變。經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,睪丸生精小管的基膜較完整,睪丸間質(zhì)組織與生精小管之間的間隙明顯縮小,生精小管管腔中各級生精細胞排列緊密有序,可看到管腔中較多精子細胞的存在。與空白組相比,模型組大鼠錳暴露后,附睪的輸出小管中存在的精子數(shù)量明顯減少。經(jīng)過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,錳暴露大鼠附睪輸出小管內(nèi)的精子數(shù)量顯著增加,接近空白組。電鏡結(jié)果表明,模型組大鼠睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多處擴張,經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非干預(yù)后,擴張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯好轉(zhuǎn),接近正常組。4、大鼠血漿睪酮、黃體生成素和卵泡刺激素水平:與空白組相比,模型組錳暴露大鼠血漿睪酮水平顯著降低(P0.05)。通過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,大鼠血漿中的睪酮水平顯著升高(P0.05)。其中以九香蟲水提液低劑量灌胃干預(yù)組效果最好。與空白組相比,模型組大鼠血漿中的黃體生成素和卵泡刺激素水平顯著升高(P0.05),通過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,大鼠血漿中的黃體生成素和卵泡刺激素水平顯著降低(P0.05),接近空白組。其中以九香蟲水提液低劑量組效果較好。5、大鼠睪酮合成通路相關(guān)基因表達:與空白組相比,模型組錳暴露大鼠睪酮合成通路的相關(guān)基因star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達顯著下調(diào)(P0.05),經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達顯著上調(diào)(P0.05)。6、大鼠睪酮合成通路相關(guān)蛋白表達:與空白組相比,模型組錳暴露大鼠睪酮合成通路的相關(guān)蛋白StAR、CYP11A1和HSD3β1蛋白表達量顯著下降;經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,StAR、CYP11A1和HSD3β1蛋白的表達顯著增加(P0.05),這點可以通過大鼠血漿睪酮水平反映出來。結(jié)論:1.九香蟲水提液可以改善錳暴露大鼠的生殖能力及交配行為。2.九香蟲水提液對錳暴露大鼠睪丸曲細精管、附睪輸出小管和睪丸間質(zhì)細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)具有改善作用,有利于大鼠生精微環(huán)境的改善。3.九香蟲水提液改善錳暴露大鼠睪丸間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)和功能的可能干預(yù)機制為:通過增加錳暴露大鼠睪酮合成通路中的相關(guān)基因和蛋白的表達,提高了大鼠血漿睪酮水平,降低了黃體生成素和卵泡刺激素水平,維持大鼠體內(nèi)生殖內(nèi)分泌激素的動態(tài)平衡,改善大鼠的生精狀態(tài)。
【圖文】：

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文 王涌從圖 1 和圖 2 中我們可觀察到大鼠睪丸組織顯微結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化：空白組大鼠的睪丸組織結(jié)構(gòu)完整，生精小管內(nèi)部分布著排列有序的各級生精細胞，管腔中分布著較多的精子細胞，睪丸間質(zhì)組織中具有豐富的毛細血管以及圍繞毛細血管周圍呈簇狀分布的間質(zhì)細胞（圖 1A、2A 圖標所示）。與空白組相比較，模型組（圖 1B、2B）錳暴露大鼠睪丸生精小管和間質(zhì)組織之間的間隙明顯增寬，生精小管管腔內(nèi)部的精子細胞較少，生精小管內(nèi)部可見部分生精細胞呈空泡化改變。與模型組相比較，經(jīng)不同劑量九香蟲干預(yù)后，睪丸組織的生精小管內(nèi)分布著排列有序的各級生精細胞，管腔中分布著較多的精子細胞，睪丸生精小管和間質(zhì)組織之間的間隙明顯縮小，接近正常組（見圖 1C、2C）。

圖 2 九香蟲對錳暴露雄性大鼠睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響（HE 40×，比例尺=20 um）注：A 空白組; B 模型組;（C-E）九香蟲低、中、高劑量組；F 陽性組.2.3.2 光鏡下大鼠附睪組織顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)評估從圖 3 和圖 4 中我們可觀察到大鼠附睪組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化：空白組中可觀察到大鼠精子均勻的分布于附睪的輸出小管內(nèi)，充滿于附睪輸出小管。從圖 4A 中可以看出，附睪管內(nèi)的內(nèi)層黏膜上皮完整、光滑，，主細胞緊密排布在一起。與空白組相比，模型組的附睪輸出小管內(nèi)，精子淡染，精子的密度減少，并且相對集中的分布于附睪輸出小管一側(cè)。經(jīng)不同劑量九香蟲和枸櫞酸西地那非干預(yù)后，附睪輸出小管中的精子密度得到顯著改善，分布也較均勻（見圖 3C、4C）。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2590587