【摘要】：目的:觀察化痰通瘀解毒方(Huatan-Tongyu-Jiedu Decoction,HTJD)對(duì)人胃癌MKN-45細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。方法:1.采用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導(dǎo)人胃癌MKN-45細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型;2.觀察不同濃度化痰通瘀解毒方水提取物對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人胃癌MKN-45細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響;分別采用細(xì)胞劃痕法和Transwell小室法觀察對(duì)人胃癌細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響;3.觀察不同濃度化痰通瘀解毒方水提取物對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人胃癌MKN-45細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物的影響;采用Western blot法檢測(cè)人胃癌MKN-45細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表達(dá);采用ELISA法檢測(cè)人胃癌MKN-45細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-7,9蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組細(xì)胞劃痕愈合率明顯升高(P0.01);與模型組比,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL劑量組劃痕愈合率明顯減小(P0.05或P0.01);且劃痕愈合率在(5~40)μg/mL各劑量組間呈一定劑量依賴性(P0.05或P0.01);2.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比,模型組細(xì)胞穿膜數(shù)明顯增多(P0.01);與模型組比較,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL劑量組細(xì)胞穿膜數(shù)明顯減少(P0.01);在(10~40)μg/mL各組之間呈一定劑量依賴性(P0.05或P0.01);3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白組比,模型組N-cadherin、Vimentin及Snail蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01),E-cadherin蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01);與模型組比,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL劑量組N-cadherin、Vimentin及Snail蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05或P0.01),E-cadherin蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05或P0.01);在(5~40)μg/mL劑量組間呈一定劑量依賴性;4.ELISA結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組人胃癌MKN-45細(xì)胞N-cadherin、Vimentin和MMP-7,9的含量明顯上調(diào)(P0.01),E-cadherin的含量顯著下調(diào)(P0.01);與模型組比較,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL劑量組N-cadherin、Vimentin和MMP-7,9的含量明顯下調(diào)(P0.05或P0.01),E-cadherin的含量明顯上調(diào)(P0.05或P0.01);在(5~40)μg/mL劑量組間呈一定劑量依賴性。結(jié)論:1.化痰通瘀解毒方能夠抑制人胃癌細(xì)胞MKN-45侵襲、遷移能力。2.化痰通瘀解毒方能夠通過(guò)調(diào)控人胃癌細(xì)胞MKN-45上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物發(fā)揮抑制侵襲轉(zhuǎn)移作用。
【圖文】：

A.空白組 B.模型組 C.HTJD（2.5μg/mL）組 D.HTJD（5μg/mL）組 E.HTJD（10μg/mL組 F.HTJD（20μg/mL）組 G.HTJD（40μg/mL）組圖 2.HTJD 對(duì) TGF-β1 作用人胃癌細(xì)胞 MKN-45 后侵襲能力的影響（×200）（與空白組相比*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；HTJD 組間比較，△P<0.05，△△P<0.01A.blank control group B.Model group C.HTJD（2.5μg/mL）group D.HTJD（5μg/mL）grouE.HTJD（10μg/mL）group F.HTJD（20μg/mL）group G.HTJD（40μg/mL）groupFig2. effect of HTJD on invasion ability of human gastric cancer cells MKN-45 afterTGF-β1 treatment（×200）（Compared with blank control group，*P<0.05，**P<0.01；Compared with Model group，#P<0.05，##P<0.01；Comparison among HTJD groups ,△P<0.05△△P<0.01）

圖 4. HTJD 對(duì)人胃癌 MKN-45 細(xì)胞 E-cadherin、N-cadherin 含量的影響Fig4. Effect of HTJD on the contents of E-cadherin and N-cadherin in Human GastricCancer Cells MKN-454.3.5 對(duì)人胃癌 MKN-45 細(xì)胞 Vimentin 含量的影響采用 ELISA 技術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞株 MKN-45 上 Vimentin 蛋白的表達(dá)情況。算方法同 3.3.2，回歸方程是 y=158.73x-4.84，R2=0.9999。檢測(cè)結(jié)果顯示，與空組比較，模型組中 Vimentin 的含量顯著升高（p<0.01）；與模型比較，HTJD度 20、40μg/mL 組顯著下降（p<0.01）；HTJD 各組間比較，（10、20、40）μg/m之間隨濃度升高，Vimentin 含量降低（p<0.01），呈現(xiàn)劑量依賴性。結(jié)果見(jiàn)表圖 5。表 2. HTJD 對(duì)人胃癌 MKN-45 細(xì)胞 Vimentin 含量的影響（ x ±s，n=3）Tab2. Effect of HTJD on the content of Vimentin in Human Gastric Cancer Cells MKN（ x ±s,n=3）
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2590169