發(fā)布時間：2020-03-19 10:35

【摘要】：癌癥已經(jīng)成為目前威脅人類生命健康的頭號疾病殺手,據(jù)統(tǒng)計,2016年中國平均每天有7500人死于癌癥,同時惡性腫瘤的發(fā)病率正在不斷劇增。對人類而言,不斷探索和開發(fā)新的抗癌藥物早已迫在眉睫。雷公藤紅素(Celastrol),屬于五環(huán)三萜類天然產(chǎn)物單體化合物,具有抗癌、抗炎抗病毒、免疫抑制、蛋白酶體抑制劑及抗肥胖等多種生物活性。其中,抗癌活性是雷公藤紅素眾多藥理活性中最為顯著的一種活性,且已有大量國內(nèi)外研究表明,雷公藤紅素對多種腫瘤細胞均有明顯地抑制增值和直接殺傷作用,具有很大的研究價值和開發(fā)潛力。盡管雷公藤紅素對多種癌細胞株抑制效果顯著,但由于自身毒性較大,口服生物利用度低以及水溶性差等特點,極大阻礙雷公藤紅素的臨床應(yīng)用,因此,有必要對雷公藤紅素進行結(jié)構(gòu)修飾的研究。氨基酸酯是多種藥物的中間體且具備一定的生物活性,同時對生物體具有特殊的滲透性、低毒性和酶催化專一性;在一些藥物的結(jié)構(gòu)中引入氨基酸片段修飾后,可以改善藥物在體內(nèi)的溶解和吸收,提高生物利用度;其次,由于腫瘤細胞自身代謝旺盛,其對氨基酸的需求量要比正常細胞大;此外,以氨基酸、氨基酸衍生物及短肽修飾具有一定生物活性的天然產(chǎn)物及藥物的研究已有大量文獻報道,同時一些短肽具有顯著的抗癌靶向性。本論文主要目的是以五種氨基酸和雷公藤紅素為起始原料,首先合成八種氨基酸酯中間體,進而實現(xiàn)氨基酸與雷公藤紅素的鍵聯(lián),以期改善雷公藤紅素溶解性;同時獲得毒性更小、活性更顯著的新型雷公藤紅素衍生物,為雷公藤紅素的靶向給藥和作用機制研究奠定基礎(chǔ)。本論文的主要內(nèi)容包含以下幾個方面:1.以五種氨基酸(丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸)為原料,通過亞硫酰氯法優(yōu)化合成氨基酸酯類(包括甲酯、乙酯、異丙酯等)中間體。氨基酸酯類中間體在溶劑二氯甲烷(DCM)中,以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCl)作為縮合劑,1-羥基苯并三唑(HOBT)為催化劑,三乙胺(TEA)作堿,與雷公藤紅素C-29位羧基進行酰胺縮合反應(yīng),制備八個目標產(chǎn)物。2.應(yīng)用現(xiàn)代波譜學方法(IR、~1H-NMR、~(13C)-NMR及ESI-MS)對合成的目標化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定與解析。3.Celastrol和目標產(chǎn)物的體外抗癌活性初步研究,選取人類宮頸癌(Hela)、人肺泡上皮癌(A549)和人肝癌(Hep G-2)細胞株三種癌細胞作為靶細胞,選用MTT法測試細胞活性,選取順鉑為陽性對照組,計算和比較各化合物的IC50值;篩選出對A549細胞株抑制增值活性最明顯的化合物2c(IC50=0.235μM)和2d(IC50=0.109μM)進行吖啶橙/溴乙錠(AO/EB)和Annexin V-FITC/PI雙染法凋亡實驗,分別采用熒光顯微鏡和流式細胞儀進行結(jié)果測定分析。4.對化合物2c,2d和母體雷公藤紅素進行初步的斑馬魚胚胎發(fā)育毒性評價研究;研究結(jié)果表明2d(LC_(50)=2.0μM)的毒性比2c(LC_(50)=1.3μM)和母體雷公藤紅素(LC_(50)=1.4μM)小。
【圖文】：

圖 2-2 1d 的 IR 圖譜Fig. 2-2 The IR spectra of 1d2.12 小結(jié)選用亞硫酰氯法合成五種氨基酸的甲酯、乙酯和異丙酯鹽酸鹽，粗產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶得到純度較高的目標產(chǎn)物，，其化學結(jié)構(gòu)經(jīng)熔點測試和紅外光譜加以鑒定。

廣東藥科大學碩士研究生畢業(yè)論文以 2f 和 2h 為例。在 2f 的1H-NMR 譜中，低場位置(ppm)7.03, 6.53, 6.34 出現(xiàn)的雙峰和單峰分別是雷公藤紅素母核上 6、1 和 7 位上的氫質(zhì)子；6.32 附近出現(xiàn)的雙峰是形成的酰胺鍵氮上的氫信號；在 4.42 附近的四重峰是纈氨酸上與氨基相連次甲基上的氫信號 3.67 附近出現(xiàn)一個較為明顯的單峰信號為甲氧基的氫信號；2.25 處出現(xiàn)的多重峰信號為纈氨酸上另外一個次甲基的氫信號；另外在 0.87 附近出現(xiàn)的雙峰分別為纈氨酸上兩個甲基的氫信號。其余的氫信號為雷公藤紅素母核上的其他氫質(zhì)子，且化學位移與文獻報道基本一致。2f 的1H-NMR 譜圖如下：
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

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本文編號：2590112