【摘要】：目的:研究淫羊藿苷對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞分化及周期的影響,并進(jìn)一步探討其相關(guān)的分子機(jī)制。方法:MTT法檢測不同濃度淫羊藿苷(ICA)對B16細(xì)胞增殖的影響;鏡下觀察B16細(xì)胞經(jīng)不同濃度ICA處理后細(xì)胞形態(tài)的變化;集落形成實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度ICA對B16細(xì)胞的集落形成能力的影響;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)觀察ICA對B16細(xì)胞遷移能力的影響;比色法檢測不同濃度ICA作用于B16細(xì)胞后,對細(xì)胞黑色素含量以及酪氨酸酶活性的影響;通過流式細(xì)胞儀檢測ICA對B16細(xì)胞周期的影響;RT-qPCR檢測酪氨酸酶相關(guān)基因Tyr、Trp 1及Trp 2的表達(dá);Western blot檢測分化和周期相關(guān)蛋白及MAPK通路相關(guān)蛋白MITF、Cyclin A、CDK2、p21、Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38、JNK 以及 p-JNK 的表達(dá)。結(jié)果:ICA能明顯抑制B16細(xì)胞的增殖,且呈濃度及時(shí)間依賴性;隨著藥物濃度的增加,B16細(xì)胞體積逐漸增大變成梭形,呈現(xiàn)樹突網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)且細(xì)胞數(shù)量減少。同時(shí),ICA可明顯抑制B16細(xì)胞集落形成能力,而且隨著藥物作用濃度的增加或者藥物作用時(shí)間的延長,與對照組相比,淫羊藿苷可以呈濃度與時(shí)間依賴性的抑制B16細(xì)胞的遷移能力。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),ICA處理后的B16細(xì)胞的黑色素含量與酪氨酸酶活性明顯增加,呈濃度依賴性;Tyr、Trp 1及Trp 2的mRNA表達(dá),以及MITF的蛋白表達(dá)明顯增加。另外,經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),B16細(xì)胞經(jīng)不同濃度ICA處理后,G0/G1期細(xì)胞分布比率增加,G2/M期與S期細(xì)胞分布比率下降,表明細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期;同時(shí),Westernblot檢測發(fā)現(xiàn),周期相關(guān)蛋白Cyclin A、CDK2和p21的表達(dá)均降低。MAPK通路相關(guān)蛋白Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38 以及 p-JNK 的表達(dá)下降。結(jié)論:研究結(jié)果表明ICA可能通過抑制MAPK通路相關(guān)蛋白Erk1/2、p-Erk1/2、p38、p-p38以及p-JNK的表達(dá),促進(jìn)MITF蛋白及酪氨酸酶相關(guān)基因Tyr、Trp1和Trp 2的表達(dá),從而提高黑色素含量與酪氨酸酶活性,同時(shí),ICA能抑制細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Cyclin A、CDK2和p21的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,因此,ICA誘導(dǎo)B16細(xì)胞分化與周期阻滯。
【圖文】：

淫羊藿苷處理后，與正常對照組相比，我們發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷處理組對Ｂ１６細(xì)胞增逡逑殖具有明顯的抑制作用，而且隨著藥物作用濃度的增加與藥物處理時(shí)間的延長，逡逑淫羊藿苷對細(xì)胞增殖的抑制率明顯升高，呈現(xiàn)濃度與時(shí)間的依賴性。如圖１所逡逑示，淫羊藿苷作用于Ｂ１６細(xì)胞２４ｈ后，其細(xì)胞增殖抑制率分別為１２．８０±３．３３％、逡逑２３．５１±３．９０°／0、４２．５５±７．１０°／。、５５．９６±５．６２°／0和邋６７．８４±１．０７％；而作用邋４８ｈ邋后，其細(xì)逡逑胞增殖抑制率分別為邋２２．９３±４．５３°／。、４６．３５±４．７８％、６６．３２±２．６４％、７７．９７±５．０７％和逡逑８５．３０±３．１４％，說明淫羊藿苷可有效抑制Ｂ１６細(xì)胞的增殖，并且呈現(xiàn)濃度與時(shí)間的逡逑７逡逑

和１００邋Ｍｍ0ｌ／Ｌ）的淫羊藿苷培養(yǎng)基培養(yǎng)１４邋ｄ后，可以看出經(jīng)過淫羊藿苷處理的Ｂ１６逡逑細(xì)胞集落數(shù)與集落形成率均明顯低于未經(jīng)藥物處理的對照組的Ｂ１６細(xì)胞集落數(shù)與逡逑集落形成率（圖２Ａ－Ｂ），，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，進(jìn)一步證實(shí)逡逑了淫羊藿苷對Ｂ１６細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，并且呈現(xiàn)濃度依賴性。逡逑８逡逑
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2590029