【摘要】：糖尿病性心肌病(Diabetic Cardiomyopathy)是一種由高血糖誘發(fā)的心血管系統(tǒng)并發(fā)癥,由Rubler等人在1972年首次提出,是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一。糖尿病性心肌病的主要病理特征為:心肌組織間隙膠原沉積、心肌纖維化,心肌細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)炎癥反應(yīng),脂質(zhì)聚集以及心肌細(xì)胞壞死、凋亡等。研究表明,糖尿病性心肌病的發(fā)病機(jī)制可能主要與心肌組織氧化應(yīng)激水平、心肌纖維化、心肌脂質(zhì)聚集以及炎癥反應(yīng)有關(guān)。近年來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)糖尿病性心肌病做了大量的研究,但其發(fā)病機(jī)制、早期診斷以及治療措施仍然不是十分明確,主要的治療策略還是以降血糖、調(diào)血脂等為主。鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是蘭科石斛屬的一種名貴藥材,在我國(guó)及亞太地區(qū)已有兩千多年的藥用歷史。研究表明,鐵皮石斛主要有降血糖、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗腫瘤等多種藥理作用。多糖是鐵皮石斛的主要成分,有文獻(xiàn)報(bào)道,鐵皮石斛多糖具有抑制炎癥因子釋放的作用,能夠發(fā)揮強(qiáng)大的抗炎作用。但到目前為止,關(guān)于鐵皮石斛對(duì)心血管系統(tǒng)是否具有保護(hù)作用還未見文獻(xiàn)報(bào)道,我們實(shí)驗(yàn)室對(duì)鐵皮石斛的前期研究發(fā)現(xiàn),鐵皮石斛能夠明顯減輕心肌缺血引起的損傷,改善心臟功能,對(duì)心臟具有很好的保護(hù)作用。因此,基于實(shí)驗(yàn)室的前期研究成果,本實(shí)驗(yàn)通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討了鐵皮石斛對(duì)糖尿病性心肌病的保護(hù)作用及初步的作用機(jī)制。首先,對(duì)鐵皮石斛水提物中多糖含量、單糖種類及含量進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,鐵皮石斛水提物中主要成分是石斛多糖,其含量為72.10%;而多糖中則主要包含甘露糖和葡萄糖兩種單糖,兩種單糖的含量分別為19.51%和14.03%。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,選用H9c2細(xì)胞,分別采用含有50 mM葡萄糖的高糖培養(yǎng)基和1μg/mL的脂多糖(LPS)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)細(xì)胞模型,研究鐵皮石斛水提物對(duì)高糖和LPS誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷及炎癥反應(yīng)的作用。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的心肌細(xì)胞,分為5個(gè)組:空白對(duì)照組、鐵皮石斛水提物預(yù)處理組(100μg/mL、200μg/m L、400μg/m L)和模型組。在高糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的實(shí)驗(yàn)中,預(yù)先給予鐵皮石斛水提物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理可以明顯提高高糖刺激下的心肌細(xì)胞的存活率(P0.01),降低細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量,增加細(xì)胞內(nèi)總超氧化物歧化酶(T-SOD)的活力(P0.01),并具有劑量依賴性;用DCFH-DA探針對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,與高糖模型組相比,用鐵皮石斛水提物對(duì)細(xì)胞預(yù)處理能明顯抑制細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。在LPS誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中,鐵皮石斛水提物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理能明顯提高脂多糖刺激下心肌細(xì)胞的存活率(P0.01);用DCFH-DA探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量,結(jié)果顯示鐵皮石斛水提物預(yù)處理組中ROS的產(chǎn)生受到了明顯的抑制;吖啶橙染色結(jié)果表明鐵皮石斛水提物還具有抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用;此外,實(shí)驗(yàn)中還通過蛋白免疫印跡法對(duì)炎癥相關(guān)蛋白:核因子-κB(NF-κB)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的表達(dá)進(jìn)行的測(cè)定,結(jié)果表明鐵皮石斛水提物能夠顯著下調(diào)炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)(P0.01)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,采用50 mg/kg劑量的鏈脲佐菌素(STZ)連續(xù)腹腔注射5天制備小鼠糖尿病模型。注射第5天完畢,72 h后尾靜脈取血,測(cè)空腹血糖值,血糖值≥11.1 mmol/L視為造模成功。糖尿病模型制備成功后,在第四周左右開始出現(xiàn)心肌損傷,在第八周心肌損傷達(dá)到頂點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為5組,未注射STZ的設(shè)為空白對(duì)照組,造模成功的小鼠隨機(jī)均勻的分成四組:鐵皮石斛水提物低劑量組(75 mg/kg)、鐵皮石斛水提物中劑量組(150 mg/kg)、鐵皮石斛水提物高劑量組(300 mg/kg)以及模型組(STZ組),每組7-10只小鼠,小鼠連續(xù)灌胃8周,給藥結(jié)束后,小鼠眼球取血,摘取心臟。結(jié)果表明,與空白組相比,模型組小鼠血清中肌酸激酶(CK)、LDH明顯升高(P0.01),而給予鐵皮石斛水提物后,小鼠心臟體重比、體重明顯增加,血清中CK、LDH、總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量明顯下降,血清中MDA的水平也有明顯的下降,T-SOD活力明顯升高(P0.01);心臟HE染色結(jié)果表明在給予鐵皮石斛水提物后,小鼠心肌組織的損傷得到明顯的改善,心肌細(xì)胞排列較為整齊,空泡樣病變減少,未見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn);油紅氧和天狼星紅染色結(jié)果表明鐵皮石斛水提物能夠明顯減少心肌組織脂質(zhì)聚集以及膠原在組織間隙的沉積;此外用蛋白免疫印跡法對(duì)纖維化相關(guān)蛋白:生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子-β(TGF-β)、Ⅰ型膠原(Collegan-1)、纖維連接蛋白(Fibronectin)及炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白:NF-κB、TNF-α、IL-1β的表達(dá)進(jìn)行分析,結(jié)果表明鐵皮石斛水提物能夠通過下調(diào)纖維化和炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白的表達(dá)來發(fā)揮抗纖維化及抗炎癥作用(P0.01),抑制心肌纖維化和心肌炎癥反應(yīng),從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,鐵皮石斛水提物在體內(nèi)外均具有心血管系統(tǒng)保護(hù)作用,能夠顯著改善糖尿病對(duì)心肌造成的損傷。其作用機(jī)制可能是與抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、下調(diào)炎癥細(xì)胞因子減輕炎癥反應(yīng)、抑制心肌細(xì)胞凋亡以及減少心肌細(xì)胞纖維化有關(guān)。本研究首次表明鐵皮石斛水提物具有改善糖尿病性心肌病,保護(hù)心血管系統(tǒng)的作用,可以作為糖尿病性心肌病治療或輔助治療的候選藥物。當(dāng)然,我們目前的研究還非常有限,鐵皮石斛對(duì)心血管系統(tǒng)保護(hù)作用的機(jī)制還需要更深入的研究。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 湯志遠(yuǎn);周曉宇;馮健;劉華;李軍;吳怡;野栩梅;倪松石;;鐵皮石斛多糖降血糖作用研究[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2016年06期

2 寧英海;顧敬文;劉志萍;銀勝高;;鐵皮石斛活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2016年13期

3 何曉艷;吳人照;楊兵勛;樓正家;楊芳亮;陳宇;龍華晴;;鐵皮石斛花對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠降壓作用研究[J];浙江中醫(yī)雜志;2016年02期

4 李靜文;李國(guó)文;秦瑜;李春霞;;鐵皮石斛多糖對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜炎癥因子表達(dá)干預(yù)的研究[J];中國(guó)中醫(yī)眼科雜志;2016年01期

5 李偉;張靜;周雯;唐慧;范軼歐;陳萌;李慧;;鐵皮石斛對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用和血清細(xì)胞因子的影響[J];衛(wèi)生研究;2016年01期

6 趙航;馮景輝;吳秀萍;;糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國(guó)際心血管病雜志;2016年01期

7 侯清濤;李蕓;李舍予;田浩明;;全球糖尿病疾病負(fù)擔(dān)現(xiàn)狀[J];中國(guó)糖尿病雜志;2016年01期

8 王嬋媛;汪曉霞;;糖尿病心肌病與氧化應(yīng)激[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年17期

9 王庸晉;劉暢;曹文君;郭穎;李丹;趙婷婷;;糖毒性對(duì)心肌細(xì)胞損傷的研究初探[J];國(guó)際心血管病雜志;2015年03期

10 吳人照;陳立鉆;樓正家;盧瑛;楊兵勛;謝培怡;李靜芝;楊芳亮;李亞平;應(yīng)永軍;沈春香;夏克中;沈盛暉;馬彩艷;;鐵皮石斛治療高血壓病120例動(dòng)態(tài)血壓觀察[J];浙江中醫(yī)雜志;2015年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 常文光;黃連素對(duì)糖尿病心肌病的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2013年

2 王敏;燈盞花素對(duì)糖尿病心肌病大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響及其機(jī)制的探討[D];浙江大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：2589608