【摘要】：斑蝥對(duì)多種腫瘤疾病具有獨(dú)特療效,已成為現(xiàn)代抗癌藥的研究熱點(diǎn),由于其主要的藥效成分斑蝥素毒性強(qiáng)烈,限制了斑蝥的臨床應(yīng)用。課題組利用光合細(xì)菌的生物轉(zhuǎn)化能力,對(duì)斑蝥進(jìn)行轉(zhuǎn)化,前期研究證明光合細(xì)菌生物轉(zhuǎn)化斑蝥可以達(dá)到“減毒增效”的效果,機(jī)理仍有待研究。在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析光合細(xì)菌中的同工酶酶活性、同工酶譜及代謝前后主要活性成分等變化,試圖探索光合細(xì)菌生物轉(zhuǎn)化斑蝥的基礎(chǔ)機(jī)理。本文主要研究結(jié)果如下:1.代謝前后培養(yǎng)液中p H值及菌體蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定:測(cè)定代謝前后培養(yǎng)液的p H值和考察代謝前后光合細(xì)菌菌體蛋白質(zhì)濃度的變化,p H的改變表明光合細(xì)菌對(duì)斑蝥進(jìn)行了轉(zhuǎn)化,生成的酸性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致p H下降(0-3天),生成的堿性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致p H升高(4-10天);由菌體蛋白質(zhì)濃度結(jié)果可知,可能是由于斑蝥的參與,改變了生長(zhǎng)環(huán)境,迫使光合細(xì)菌作出了應(yīng)急反應(yīng),生物轉(zhuǎn)化后光合細(xì)菌蛋白質(zhì)濃度增大。2.代謝前后菌體輔酶Q10及加氧酶的活性:選取Box-Behnken響應(yīng)面的試驗(yàn)方法優(yōu)化超聲輔助提取菌體輔酶Q10工藝,并進(jìn)一步采用HPLC法測(cè)定代謝前后輔酶Q10含量和加氧酶活性實(shí)驗(yàn)中的吲哚消耗量。輔酶Q10最優(yōu)提取工藝為超聲波輸出功率250W、超聲波每次提取10 min、超聲波每次輻射8 s。由于斑蝥的參與,光合細(xì)菌Co-Q10的濃度增加了;測(cè)定吲哚的轉(zhuǎn)化率來(lái)確定底物被加氧酶轉(zhuǎn)化的量,從而間接地確定轉(zhuǎn)化前后光合細(xì)菌的加氧酶活性,為了進(jìn)一步了解光合細(xì)菌轉(zhuǎn)化斑蝥的轉(zhuǎn)變過(guò)程。3.為了更進(jìn)一步了解光合細(xì)菌轉(zhuǎn)化斑蝥的過(guò)程,在生物轉(zhuǎn)化前后利用HPLC測(cè)定斑蝥素及斑蝥的三種有效活性轉(zhuǎn)化產(chǎn)物含量的變化,從而對(duì)斑蝥生物轉(zhuǎn)化起到一定的質(zhì)量監(jiān)控。結(jié)果表明,斑蝥素的量顯著減少,一方面,光合細(xì)菌對(duì)斑蝥起了作用,向著毒性減小的方向發(fā)展;另一方面,課題組前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)化液的抗腫瘤效果并沒(méi)有發(fā)生明顯的變化,表明在轉(zhuǎn)化過(guò)程中,除了斑蝥素減少外,應(yīng)該是增加了某些抗腫瘤物質(zhì)的含量或促進(jìn)了其他抗腫瘤物質(zhì)的生成。課題組前期體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)表明,斑蝥轉(zhuǎn)化產(chǎn)物化學(xué)物A、化合物B和化合物C對(duì)肺癌A549及子宮頸癌Hela細(xì)胞均有明顯的抑制作用,從而用HPLC檢測(cè)這三種化合物的含量變化。4.同工酶活性:轉(zhuǎn)化前后光合細(xì)菌中酯酶(EST)活性都表現(xiàn)為逐漸降低,實(shí)驗(yàn)組EST活性顯著高于空白組(P0.05);空白組和實(shí)驗(yàn)組的過(guò)氧化物酶(POD)活性都表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢(shì),實(shí)驗(yàn)組活性均比空白組高,表現(xiàn)極顯著性差異(P0.01);空白組和實(shí)驗(yàn)組超氧化物歧化酶(SOD)活性都表現(xiàn)為先升高后下降的趨勢(shì),實(shí)驗(yàn)組活性均比空白組高,表現(xiàn)極顯著性差異(P0.01)。因此EST、POD和SOD可能對(duì)光合細(xì)菌生物轉(zhuǎn)化斑蝥的轉(zhuǎn)化過(guò)程發(fā)揮著一定的作用。5.光合細(xì)菌同工酶譜的變化:代謝前后光合細(xì)菌EST、POD、SOD同工酶譜體現(xiàn)的同工酶酶活性與上述同工酶活性測(cè)定結(jié)果基本一致。由EST、SOD同工酶譜可知,實(shí)驗(yàn)組與空白組相比出現(xiàn)一條新的EST、SOD譜帶,光合細(xì)菌中某些EST、SOD在斑蝥成分的誘導(dǎo)下開(kāi)始表達(dá),可能參與了生物轉(zhuǎn)化;由POD同工酶譜可知,空白組和實(shí)驗(yàn)組POD同工酶只有譜帶顏色的加深或變淺,沒(méi)有條帶的產(chǎn)生和消失,斑蝥對(duì)光合細(xì)菌POD酶帶表達(dá)的影響不明顯。
【圖文】：

時(shí)間 / 天 空白組 實(shí)驗(yàn)組0 6.80 ± 0.00 6.70 ± 0.001 7.07 ± 0.12 7.03 ± 0.122 7.97 ± 0.12 7.50 ± 0.103 7.73 ± 0.06 7.80 ± 0.004 7.93 ± 0.12 7.93 ± 0.065 7.97 ± 0.15 8.07 ± 0.066 8.00 ± 0.10 8.23 ± 0.067 8.10 ± 0.00 8.23 ± 0.068 8.23 ± 0.12 8.33 ± 0.069 8.27 ± 0.06 8.40 ± 0.1010 8.37 ± 0.06 8.50 ± 0.10

表 2-3 蛋白質(zhì)濃度（gprot·L-1）Table 2-3 Protein concentration（gprot·L-1）時(shí)間 / 天 空白組 實(shí)驗(yàn)組2 3.245 ± 0.382 3.871 ± 0.2774 3.777 ± 0.345 4.481 ± 0.3876 4.293 ± 0.343 4.668 ± 0.1718 4.872 ± 0.357 5.403 ± 0.08810 3.746 ± 0.225 4.872 ± 0.273
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R28

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2589277