【摘要】：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性進(jìn)行性的自身免疫性疾病,其病理特點是多關(guān)節(jié)受累,滑膜炎持久反復(fù)發(fā)作,病情纏綿難愈,可導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨和骨的破壞。中醫(yī)理論認(rèn)為RA是由于肝腎虧損及寒濕阻絡(luò)引起的,其治療應(yīng)采用補(bǔ)肝腎、祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)的方法。中藥巴戟天為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的根,性溫,味辛、甘,歸肝、腎經(jīng);具有補(bǔ)腎陽,強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕的作用。研究表明巴戟天環(huán)烯醚萜苷類成分具有顯著的抗炎活性。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)巴戟天乙醇提取物能有效抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)的急性炎癥反應(yīng),降低血清IL-1β和TFN-α的水平,而環(huán)烯醚萜苷類成分為巴戟天抗炎和防治大鼠關(guān)節(jié)炎的有效成分。目的:明確巴戟天環(huán)烯醚萜苷類成分抗炎和抗類風(fēng)濕新關(guān)節(jié)炎的作用及機(jī)制,為巴戟天資源的開發(fā)利用及新藥研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.以巴戟天環(huán)烯醚萜苷類成分水晶蘭苷、去乙�；嚾~草苷酸、車葉草苷酸和車葉草苷為對照品,建立HPLC法測定巴戟天環(huán)烯醚萜苷類成分的方法。采用大孔吸附樹脂富集巴戟天中環(huán)烯醚萜苷類成分,以獲得巴戟天總環(huán)烯醚萜苷。2.按照最大給藥容量、最大藥物溶解濃度,小鼠單次灌胃給予巴戟天總環(huán)烯醚萜苷,觀察給藥后小鼠14天內(nèi)的毒性反應(yīng)及死亡情況。通過小鼠醋酸扭體實驗、小鼠氣囊肉芽腫實驗和大鼠棉球肉芽腫實驗,研究巴戟天總環(huán)烯醚萜苷的抗炎鎮(zhèn)痛作用。以LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞為模型,初步研究巴戟天總環(huán)烯醚萜苷抗炎的作用機(jī)制。3.應(yīng)用弗氏佐劑誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎模型,以去卵巢聯(lián)合Ⅱ型膠原誘導(dǎo)小鼠腎虛痹癥模型,通過觀察小鼠和大鼠的足趾腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、血清生化指標(biāo)和滑膜組織的病理變化,評價巴戟天總環(huán)烯醚萜苷抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。以TNF-α刺激的人成纖維滑膜細(xì)胞為模型,初步探討巴戟天總環(huán)烯醚萜苷的作用機(jī)制。結(jié)果:1.所建立的HPLC方法可用于巴戟天中環(huán)烯醚萜苷類成分的含量測定。水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、車葉草苷酸和車葉草苷在0.375-12μg,0.13-4.16μg,0.016-0.516μg和0.012-0.384μg范圍內(nèi),與峰面積的線性關(guān)系良好;重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度和加樣回收率試驗結(jié)果均符合要求。經(jīng)大孔樹脂富集,可得到含量為62%的巴戟天總環(huán)烯醚萜苷。2.急性毒性結(jié)果表明,巴戟天總環(huán)烯醚萜苷對小鼠沒有明顯的毒副作用。巴戟天總環(huán)烯醚萜苷在50mg/kg,100mg/kg和200mg/kg的劑量下,均可顯著減少醋酸扭體試驗中小鼠的扭體次數(shù),減少小鼠氣囊肉芽腫和大鼠棉球肉芽腫實驗中肉芽腫的干重和濕重,表明巴戟天總環(huán)烯醚萜苷具有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。巴戟天總環(huán)烯醚萜苷及其主要成分水晶蘭苷顯著抑制LPS刺激的RAW264.7產(chǎn)生IL-1β、IL-6和NO,抑制RAW264.7細(xì)胞中iNOS和COX-2蛋白的表達(dá),及NF-?B通路中的蛋白表達(dá),表明巴戟天環(huán)烯醚萜苷通過NF-?B通路產(chǎn)生抗炎作用。3.巴戟天總環(huán)烯醚萜苷能夠減輕弗氏完全佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎癥狀,顯著降低大鼠血清炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-1β和IL-17a的水平,顯示出良好的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。在去卵巢和Ⅱ型膠原聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠腎虛痹癥關(guān)節(jié)炎模型中,巴戟天總環(huán)烯醚萜苷能夠改善小鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀,顯著降低小鼠血清炎癥細(xì)胞因子IL-6和IL-10的水平,減緩關(guān)節(jié)炎小鼠滑膜組織的增生,顯示出良好的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用。同時,巴戟天總環(huán)烯醚萜苷能夠增加腎虛痹癥關(guān)節(jié)炎小鼠血清骨形成指標(biāo)骨鈣素的含量,降低血清堿性磷酸酶的活性,顯著降低血清骨吸收指標(biāo)DPD和RANKL的水平,顯著增加小鼠股骨的骨密度和骨礦物質(zhì)含量,增加骨小梁數(shù)目,降低骨小梁分離度,改善骨組織的微結(jié)構(gòu),具有良好的改善腎虛痹癥小鼠骨丟失和骨質(zhì)破壞的作用。巴戟天總環(huán)烯醚萜苷及水晶蘭苷能顯著抑制TNF-α刺激的滑膜成纖維細(xì)胞的增殖及IL-6、IL-8的產(chǎn)生,具有抑制滑膜增生的作用。結(jié)論:巴戟天總環(huán)烯醚萜苷具有確切的抗炎和抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用,可為巴戟天資源的開發(fā)利用和中藥新藥研制提供科學(xué)的依據(jù)。
【圖文】：

乙醇等試劑為分析純.1.3 材料巴戟天 2015 年 4 月購于廣西玉林和安徽亳州藥材市場，產(chǎn)地分別為：廣西、廣東福建。由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室張巧艷教授鑒定為茜草科 Rubiaceae 植巴戟天 Morinda officinlis How.的干燥根。.2 實驗方法.2.1 巴戟天環(huán)烯醚萜苷的含量測定方法.2.1.1 色譜條件艾杰爾 VenusilMPCl8（250mm×4.6mm,5μm）色譜柱，流動相：乙腈（A）-0.2%酸+0.01moL/L 磷酸氫二鈉緩沖鹽（B）梯度洗脫（0~12min,1%~2%A;12~30min% ~25% A）；檢測波長：235 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20μL；照品和樣品色譜圖見圖 2-1。

佳木斯大學(xué)碩士學(xué)位論線性范圍 0.13~4.16μg；車葉草甘酸 Y=15883X+6.294，r=0.9997，線性范圍 0.016~0μg；車葉草苷 Y=14329X-2.533，r=0.9995，線性范圍 0.012~0.384μg。以上結(jié)果表明水晶蘭苷、去乙酰車葉草苷酸、車葉草苷酸、車葉草苷在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)良好。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2589013