【摘要】：目的本研究以來(lái)曲唑加高脂誘導(dǎo)肥胖型多囊卵巢模型大鼠為研究對(duì)象,通過(guò)觀察補(bǔ)腎化痰法對(duì)肥胖PCOS大鼠血清性激素、卵巢形態(tài)學(xué)以及卵巢組織顆粒細(xì)胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA表達(dá)的影響,探索補(bǔ)腎化痰法調(diào)控PCOS卵泡發(fā)育的機(jī)制,從而為該法改善肥胖PCOS卵泡發(fā)育障礙提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法選取7~8周齡SD雌性大鼠,通過(guò)來(lái)曲唑加高脂灌胃制備肥胖PCOS模型,根據(jù)大鼠陰道脫落細(xì)胞學(xué)涂片及體重的變化,篩選出造模成功的大鼠,根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分為模型對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組、達(dá)英-35組,再加空白對(duì)照組。采取補(bǔ)腎化痰中藥干預(yù)21天后,用放射免疫法檢測(cè)大鼠血清FSH、E_2、LH及T含量的變化,HE染色觀察卵巢組織病理學(xué)改變,Real-time PCR測(cè)定卵巢顆粒細(xì)胞中Smad3、Cyp19al及CCND2的mRNA表達(dá)量,免疫組化法檢測(cè)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中Ki-67的表達(dá)。結(jié)果(1)與模型對(duì)照組比較,中藥高、中劑量組及達(dá)英-35組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)與模型對(duì)照組比較,中藥及達(dá)英-35組初級(jí)卵泡數(shù)、竇狀卵泡數(shù)、囊狀卵泡數(shù)及閉鎖卵泡數(shù)減少,成熟卵泡數(shù)及黃體數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)與模型對(duì)照組比較,中藥高、中劑量組及達(dá)英-35組清FSH、E_2增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),中藥高、中劑量組及達(dá)英-35組T含量降低,中藥中劑量組及達(dá)英-35組LH含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(4)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組卵巢顆粒細(xì)胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA的表達(dá)降低(P0.05);與模型對(duì)照組比較,中藥高、中劑量組及達(dá)英-35組卵巢顆粒細(xì)胞中Smad3、Cyp19al及CCND2mRNA的表達(dá)升高(P0.05);(5)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組卵巢組織顆粒細(xì)胞中Ki-67的表達(dá)降低(P0.05);與模型對(duì)照組比較,中藥中劑量組及達(dá)英-35組卵巢組織顆粒細(xì)胞中Ki-67的表達(dá)升高(P0.05)。結(jié)論(1)補(bǔ)腎化痰法可抑制肥胖PCOS大鼠卵巢多囊樣改變及改善卵泡發(fā)育障礙。(2)補(bǔ)腎化痰法可通過(guò)降低T、LH水平,提高FSH及E_2的水平,糾正機(jī)體性激素紊亂的狀態(tài),調(diào)節(jié)卵巢功能。(3)補(bǔ)腎化痰法可能是通過(guò)促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞TGFβ/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而增強(qiáng)Cyp19almRNA的表達(dá),促進(jìn)雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素分泌,維持機(jī)體性激素穩(wěn)態(tài);及可能通過(guò)調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞TGFβ/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而增強(qiáng)CCND2的表達(dá),促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖以及卵泡發(fā)育與成熟。
【圖文】：

（1）向 GC 中加入 1ml TRIZOL 裂解液裂解細(xì)胞，用槍細(xì)胞裂解。（2）將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 1.5mlEP 管中入 0.2ml 氯仿，充分搖勻左右，，4℃低溫離心機(jī) 12000r/min，離心 10min。（3）用移液器吸取上清液，轉(zhuǎn)移上清液至新的 EP 管中，醇，混勻后，室溫孵育 5min 左右，4℃低溫離心機(jī) 12000r/min（4）棄上清液，加入 75%的乙醇 1ml 清洗沉淀，離心機(jī)心 2min。（5）除去乙醇溶液，室溫干燥沉淀 5~10min，加入去離子（6）取 3μL 細(xì)胞總 RNA 采用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn) RN凝膠成像系統(tǒng)觀察，判斷 RNA 的完整性。如圖中 RNA 條帶清彌散帶，28S 條帶約為 18S 條帶亮度的 2 倍，提取的 RNA 質(zhì)續(xù)實(shí)驗(yàn)。

26中藥低劑量組（100×） 達(dá)英-35 組（100×）圖 6 各組大鼠卵巢組織 HE 染色1.3 補(bǔ)腎化痰法對(duì)各組大鼠性激素水平的影響.3.1 補(bǔ)腎化痰法對(duì)各組大鼠 FSH、E2的影響與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清 FSH 及 E2的水平降低，
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2588732