【摘要】：背景:欣夢顆粒由丹參、酸棗仁、五味子、桑葚等五味中藥組成,以滋陰補腎、養(yǎng)心安神為治療法則,用于治療心腎兩虛引起的失眠。欣夢顆粒由重慶華森藥業(yè)和西南大學中醫(yī)藥學院聯(lián)合創(chuàng)制,按照國家中藥6類新藥研制,其制劑與制備方法已經(jīng)獲得國家技術(shù)發(fā)明專利,并且已完成了GLP實驗室安全性評價及藥效學實驗,現(xiàn)已進入臨床試驗研究。本課題獲得國家科技重大新藥創(chuàng)制專項(2014ZX09304-306-04)的資助。目的:測定欣夢顆粒中主要藥效成分的含量,研究欣夢顆粒中的主要藥效成分丹參素在大鼠體內(nèi)的血漿藥動學和腦組織藥動學性質(zhì),為欣夢顆粒的質(zhì)量控制和臨床確定欣夢顆粒的給藥劑量、給藥頻次、給藥療程等提供參考。方法與結(jié)果:1欣夢顆粒主要藥效成分含量測定方法及含量測定采用RP-HPLC法測定欣夢顆粒主要藥效成分丹參素、原兒茶醛、斯皮諾素、阿魏酸、五味子醇甲的含量。色譜條件如下:色譜柱:Xterra RP18色譜柱(250 mm×4.6 mm×3.5μm);流動相:甲醇-0.1%冰乙酸溶液,梯度洗脫;檢測波長:235 nm和335 nm;流速:0.5 m L·min-1;柱溫:30℃;進樣量:10μL。按《中國藥典》(2015版)第四部“9101藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則”進行方法學驗證。在建立的色譜條件下,丹參素、原兒茶醛、斯皮諾素、阿魏酸、五味子醇甲的保留時間依次為8.5 min、15.7 min、21.4 min、22.3 min、30.7 min,各成分系統(tǒng)適用性、精密度、提取回收率、穩(wěn)定性的考察結(jié)果均符合2015版藥典規(guī)定。測得3批欣夢顆粒中各成分的平均含量分別為18.24±0.77 mg·g~(-1)、7.57±0.18 mg·g~(-1)、5.61±0.08 mg·g~(-1)、1.86±0.05 mg·g~(-1)、17.95±0.25 mg·g~(-1)。2.欣夢顆粒中丹參素在大鼠血漿中的藥動學研究采用乙酸乙酯液-液萃取法對血漿樣品進行預處理,以對羥基苯甲酸為內(nèi)標,采用RP-HPLC梯度洗脫法檢測血漿樣品中丹參素的含量。按《中國藥典》(2015版)第四部“9012生物樣品定量分析方法驗證指導原則”進行方法學驗證。在建立的RP-HPLC梯度洗脫條件下,丹參素和內(nèi)標對羥基苯甲酸的保留時間分別為9.6min和14.5 min,方法的專屬性、精密度與準確度、提取回收率、穩(wěn)定性的結(jié)果均符合2015版藥典規(guī)定。欣夢顆粒以1.25 g·kg~(-1)、2.50 g·kg~(-1)和5.00 g·kg~(-1)的劑量對大鼠單次灌胃給藥,測定給藥前及給藥后不同時間點的大鼠血漿中丹參素的含量,利用DAS3.2.1軟件計算藥動學參數(shù)。低、中、高劑量給藥后,丹參素藥時曲線下面積AUC(0-t)分別為5.88±1.02μg·m L~(-1)·h、19.44±2.22μg·m L~(-1)·h和64.14±14.28μg·mL~(-1)·h;達峰濃度Cmax分別為2.931±0.479μg·mL~(-1)、5.413±0.429μg·mL~(-1)和11.509±2.684μg·m L~(-1);達峰時間Tmax分別為30±5 min、60±10 min和115±31 min;半衰期t1/2分別為124±18min、235±79 min和281±72 min,清除率CL分別為199±28 m L·h-1·kg~(-1)、128±16mL·h-1·kg~(-1)和80±18 mL·h-1·kg~(-1)。增加給藥劑量后,丹參素的AUC(0-t)、Cmax均增大,但均與劑量不成線性關(guān)系,AUC(0-t)或Cmax與劑量的比值隨著給藥劑量的增大而增大;Tmax和t1/2隨著給藥劑量的增大而延長,CL則隨之減小。以2.50 mg·kg~(-1)的劑量對SD大鼠多次灌胃欣夢顆粒,每天上午的9:00給藥,持續(xù)7天。每天給藥前收集適量血液;第七天給藥后,不同時間點取血。測定血漿樣品中丹參素的含量,利用DAS3.2.1軟件計算藥動學參數(shù)。結(jié)果表明,丹參素于給藥的第5天基本達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度。多次給藥后,丹參素的AUCss為45.12±0.71μg·mL~(-1)·h,平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度Css,av為1.880±0.030μg·m L~(-1)。與單次給藥組相比,多次給藥后,丹參素的AUC(0-t)增大、MRT及t1/2延長、CL減小,而Cmax及Tmax并沒有發(fā)生顯著性改變。丹參素的蓄積系數(shù)R為1.16。3.欣夢顆粒中丹參素在大鼠腦組織的藥動學研究利用測定大鼠血漿中丹參素含量的RP-HPLC梯度洗脫法來檢測大鼠腦組織中丹參素的含量,按《中國藥典》(2015版)第四部“9012生物樣品定量分析方法驗證指導原則”進行方法學驗證。丹參素和內(nèi)標對羥基苯甲酸的保留時間分別為9.6min和14.5 min,方法學驗證結(jié)果符合2015版藥典規(guī)定。以2.50 g·kg~(-1)的劑量對大鼠單次灌胃欣夢顆粒,于給藥后的不同時間點取腦組織,測定丹參素在腦組織的含量,利用DAS3.2.1軟件計算藥動學參數(shù)。結(jié)果表明,丹參素在腦組織分布迅速,30 min即達峰,并在給藥90 min時再次呈現(xiàn)一個藥峰。相較于血漿,丹參素在大腦內(nèi)的MRT、t1/2及Tmax均明顯縮短。丹參素的入腦系數(shù)Kp為20%。結(jié)論:1.建立的RP-HPLC梯度洗脫法可用于欣夢顆粒的主要成分丹參素、原兒茶醛、斯皮諾素、阿魏酸、五味子醇甲的同時檢測。測得3批欣夢顆粒中各成分的含量依次為18.24±0.77 mg·g~(-1)、7.57±0.18 mg·g~(-1)、5.61±0.08 mg·g~(-1)、1.86±0.05 mg·g~(-1)、17.95±0.25 mg·g~(-1)。2.欣夢顆粒在1.25 g·kg~(-1)~5.00 g·kg~(-1)劑量范圍內(nèi),丹參素在大鼠體內(nèi)的吸收表現(xiàn)為非線性藥動學。以2.50 g·kg~(-1)為給藥劑量、以24 h為給藥間隔,多次灌胃欣夢顆粒后,丹參素的消除速率有所減慢,但未表現(xiàn)出蓄積趨勢。3.以2.50 g·kg~(-1)的劑量對大鼠單次灌胃欣夢顆粒,丹參素在腦組織分布迅速,并具有快吸收、快消除的特點。丹參素的入腦系數(shù)Kp為20%。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R286.0

【參考文獻】

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本文編號：2588689