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組分中藥CXWS藥效學(xué)試驗(yàn)及指紋圖譜研究

發(fā)布時(shí)間:2020-03-18 11:52
【摘要】:組分中藥CXWS是中醫(yī)辨證理論指導(dǎo)下,結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法,經(jīng)過(guò)組方配伍篩選研究、提取工藝研究和制劑工藝研究而制成的組分中藥新藥。本方由柴胡、白芍、枳殼、香附、延胡索和甘草六味中藥有效部位提取物組成,用于治療氣滯型胃脘痛。本研究針對(duì)功能主治對(duì)該組分中藥開(kāi)展了功能性消化不良的藥效學(xué)研究,基于指紋圖譜技術(shù)建立柴胡提取物、白芍提取物、延胡索提取物及甘草提取物企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn),開(kāi)展組分中藥制劑的指紋圖譜研究,并對(duì)指紋圖譜的共有峰進(jìn)行了歸屬性研究。1.CXWS對(duì)功能性消化不良治療作用的研究。通過(guò)采用夾尾激怒法和慢性應(yīng)激法(斷食,斷水)相結(jié)合的方式誘導(dǎo)功能性消化不良大鼠模型,進(jìn)行胃排空和小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn),統(tǒng)計(jì)胃排空率和小腸推進(jìn)率。隨后腹主動(dòng)脈取血離心分離血清,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清胃腸激素相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示:與模型組相比,CXWS劑量組雌雄FD大鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率均顯著升高,血清中大鼠胃促生長(zhǎng)素(Ghrelin)、胃動(dòng)素(motilin,MTL)水平顯著升高,血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)水平顯著降低,與空白組相比,CXWS劑量組雌雄FD大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著差異。綜上,CXWS可有效改善雌雄FD大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能,調(diào)節(jié)胃腸激素分泌水平,CXWS治療功能性消化不良藥效明確。2.CXWS中中藥提取物指紋圖譜研究。采用高效液相色譜法,通過(guò)對(duì)洗脫程序、色譜柱、波長(zhǎng)、柱溫、流速等的考察確立色譜條件,通過(guò)對(duì)提取溶劑種類、濃度、用量、提取方法、提取時(shí)間等的考察確立供試品溶液處理方法,進(jìn)而建立CXWS涉及的中藥提取物指紋圖譜。結(jié)果表明:柴胡提取物指紋圖譜,標(biāo)定12個(gè)共有峰,10批次柴胡提取物相似度在0.922~0.959之間;白芍提取物指紋圖譜,標(biāo)定9個(gè)共有峰,10批次白芍提取物相似度在0.997~1.000之間;延胡索提取物指紋圖譜,標(biāo)定10個(gè)共有峰,10批次延胡索提取物相似度在0.930~0.980之間;甘草提取物指紋圖譜,標(biāo)定10個(gè)共有峰,10批次甘草提取物相似度在0.924~0.969之間。以上結(jié)果表明,研究中所建立的柴胡提取物、白芍提取物、延胡索提取物、甘草提取物指紋圖譜,相似度良好,方法可靠,可作為CXWS各中藥提取物的企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。3.CXWS指紋圖譜建立及共有峰歸屬分析。采用高效液相色譜法,建立CXWS指紋圖譜,并明確其共有峰歸屬。結(jié)果表明:CXWS指紋圖譜,共標(biāo)定22個(gè)共有峰,10批次CXWS相似度在0.985~0.996之間,色譜行為良好,通過(guò)與對(duì)照品、提取物以及陰性樣品的對(duì)照分析,確認(rèn)8、16、18、19、20、21號(hào)峰來(lái)源于柴胡提取物,5、6、12號(hào)峰來(lái)源于白芍提取物,11、12號(hào)峰來(lái)源于延胡索提取物,1、2、4、7、10、13、14、15、17號(hào)峰來(lái)源于甘草提取物,3號(hào)峰來(lái)源于柴胡和白芍提取物,9號(hào)峰來(lái)源于柴胡和甘草提取物。以上研究結(jié)果表明,本研究建立的指紋圖譜特征性強(qiáng)、相似度良好,CXWS化學(xué)成分,完善了CXWS質(zhì)量控制體系。
【圖文】:

色譜圖,柴胡皂苷,流動(dòng)相,梯度洗脫


采用 Thermo C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm,serial number:10572673) 色譜柱,流動(dòng)相為 A 乙腈-B 0.05%磷酸水溶液,按表 2-1 進(jìn)行梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng) 210 nm,柱溫 20℃流速 0.8 mL/min,進(jìn)樣量 10 μL。表 2-1 梯度洗脫程序表Tab.2-1 Gradient elution program時(shí)間(min) 流動(dòng)相 A(%) 流動(dòng)相 B(%)0 10 9015 15 8535 21 7958 26 74110 50 502.1.2.4 對(duì)照試驗(yàn)吸取參照物柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 對(duì)照品溶液各 10 μL 依次注入高效液相色譜儀,,記錄色譜圖,見(jiàn)圖 2-1,2-2。

色譜圖,柴胡皂苷,空白,溶劑


圖 2-2 柴胡皂苷 dFig.2-2 Saikosaponin D2.1.2.5 空白試驗(yàn)以 70%甲醇溶液為空白溶劑,吸取 10 μL 注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,見(jiàn)圖 2-3空白溶劑色譜圖表明提取溶劑無(wú)干擾。
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R285.5

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