【摘要】：各種致病因素引起炎細(xì)胞在肺內(nèi)大量積聚、過(guò)度表達(dá)和釋放炎癥介質(zhì)等,使肺毛細(xì)血管通透性增加而導(dǎo)致急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)的發(fā)生。特別是在SARS、H7N9等新型禽流感類傳染病大肆侵襲期間,重期的應(yīng)激性肺損傷是大多數(shù)患者死亡的原因。中醫(yī)溫病學(xué)辯證,SARS、H7N9等流行性傳染性疾病屬“疫”證,其發(fā)生發(fā)展規(guī)律與溫病學(xué)專著《溫?zé)嵴摗分袩岵〉呐R床傳變過(guò)程一致;ALI發(fā)生于危重階段,屬溫病營(yíng)血分證,熱毒深入營(yíng)血分,應(yīng)根據(jù)“衛(wèi)氣營(yíng)血”階段的不同,早期應(yīng)用清熱解毒方藥急挫熱勢(shì);治療應(yīng)立足于清熱解毒、瀉火涼血。清瘟敗毒飲具有大清氣血熱毒的作用,主治熱毒充斥、氣血兩蟠證,為臨床常用治療傳染性疾病(“疫”證)的方劑。ALI發(fā)病急驟,病程難控,臨床尚缺乏快速有效地預(yù)防、治療藥物。清瘟敗毒飲為臨床有效治療藥物的發(fā)現(xiàn)提供了新思路。因此,本課題擬從清瘟敗毒飲中尋找有效治療藥物。依據(jù)藥效作用特點(diǎn),拆方配伍,篩選最佳拆方;采用偏最小二乘回歸法分析最佳拆方的“譜”“效”相關(guān)性,獲得藥效成分,以期尋找到ALI的有效治療藥物,并指導(dǎo)臨床合理用藥。本論文的研究?jī)?nèi)容如下:第一部分對(duì)清瘟敗毒飲進(jìn)行拆方配伍研究,篩選最佳拆方組對(duì)課題組前期優(yōu)選出的清熱方-清瘟敗毒飲進(jìn)行拆方配伍研究,綜合分析不同拆方組干預(yù)大鼠急性肺損傷的藥效學(xué)表現(xiàn),以期優(yōu)選出療效良好的拆方進(jìn)行藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。結(jié)果顯示:較模型組,C1、C2和C3組BALF中的PMNs及WBC數(shù)量顯著降低(P0.05),以C3組效果最佳(P0.01);C1、C2與C3組的蛋白濃度顯著降低(P0.05),以C2組最為顯著(P0.01);C1、C2和C4組的TNF-α含量顯著降低(P0.05),以C1組最佳(P0.01);各拆方組均能顯著降低W/D值(P0.01),以C3組最為顯著(P0.01)�？梢�,“清瘟敗毒飲”的“清熱瀉火”-C1組、“情熱涼血”-C2組和'清熱燥濕”-C3組均能夠顯著改善LPS所致ALI大鼠的病理狀態(tài)。文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn),C3組藥材-黃芩和黃連的相關(guān)研究較為成熟,故課題組選擇了療效良好的C1和C2組拆方進(jìn)行藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。而本課題則主要進(jìn)行C1-“清熱瀉火”組的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。第二部分運(yùn)用偏最小二乘回歸法分析,獲得功效成分對(duì)“清熱瀉火”組的不同提取物進(jìn)行干預(yù)大鼠急性肺損傷的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),并同時(shí)進(jìn)行其HPLC特征圖譜的建立。運(yùn)用偏最小二乘回歸法分析拆方組的不同提取物平行藥理指標(biāo)與對(duì)應(yīng)HPLC圖譜信息的多元相關(guān)性,找到該拆方組干預(yù)大鼠急性肺損傷的功效成分組。結(jié)果顯示,峰X4、X6、X9、X14、X16、X17影響ALI大鼠BALF中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞減少的累積藥效貢獻(xiàn)率達(dá)88.76%,推測(cè)其為“功效成分組”;峰X3、X7、X8、X10、X13、X19、X20影響ALI大鼠BALF中蛋白濃度降低的累積藥效貢獻(xiàn)率達(dá)84%,推測(cè)其為“功效成分組”;峰X3、X7、X8、X10、X11、X18、X19、X21影響ALI大鼠肺濕干比值降低的累積藥效貢獻(xiàn)率達(dá)85%,推測(cè)其為“功效成分組”,有待進(jìn)一步藥效驗(yàn)證。第三部分功效成分的LC-MS/MS分析、分離和結(jié)構(gòu)鑒定找到干預(yù)大鼠急性肺損傷的功效成分組中各成分所對(duì)應(yīng)的HPLC圖譜信息,進(jìn)行LC-MS/MS分析,初步確定各功效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。為進(jìn)一步確認(rèn)各功效成分化學(xué)結(jié)構(gòu),經(jīng)各功效成分單體的分離制備,欲通過(guò)核磁共振等分析技術(shù)確認(rèn)其結(jié)構(gòu)。根據(jù)LC-MS總離子流圖以及二級(jí)離子碎片圖,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)及相關(guān)文獻(xiàn)查閱,共解析出18個(gè)化合物。其中干預(yù)ALI大鼠白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞減少的“功效成分”峰X4、X6、X9、X14、X16、X17依次為去乙�；嚽安菟�、雞屎藤次苷甲酯、Jasminoside B、Jasminoside E、異芒果苷和蘆丁。通過(guò)HPLC和TLC法定位分離功效成分,得到了蘆丁、京尼平-1-β-龍膽雙糖苷、京尼平苷、槲皮素、β-谷甾醇、雞屎藤次苷甲酯和西紅花苷-Ⅰ,共7個(gè)單體化合物。HPLC圖譜顯示:峰X6為雞屎藤次苷甲酯,峰X10為京尼平-1-β-龍膽雙糖苷,峰X13為京尼平苷,峰X17為蘆丁,峰X19為西紅花苷-Ⅰ,與LC-MS/MS分析推測(cè)結(jié)果一致;并進(jìn)一步確認(rèn)了干預(yù)ALI大鼠白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞減少的功效成分X6和X17分為雞屎藤次苷甲酯和蘆丁。綜上所述,譜-效分析得出清瘟敗毒飲清熱瀉火組干預(yù)ALI大鼠白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞減少的功效成分為雞屎藤次苷甲酯和蘆丁,與文獻(xiàn)報(bào)道相符,其藥效有待進(jìn)一步驗(yàn)證;而功效成分X6、X9、X14和X16的結(jié)構(gòu)有待鑒定�？梢姳菊撐臑榕R床治療ALI提供了新的研究方向,同時(shí)也證實(shí)了本論文譜-效分析所得結(jié)果的可靠性。
【圖文】：

空白邐模型邐Ｃｌ邐Ｃ２邐Ｃ３邐Ｃ４邐陽(yáng)性逡逑注：與空白組比較，＃＃尸＜邋０．０１，與模型組比較，＜０．０５，逡逑圖３．３大鼠ＢＡＬＦ中ＴＮＦ－ａ含量變化逡逑３．４各組大鼠肺Ｗ／Ｄ值逡逑表３．４顯示，空白組大鼠肺Ｗ／Ｄ值較小，而模型組較空白組Ｗ／Ｄ值顯著變逡逑大（Ｐ＜邋０．０１），表示造模成功；較模型組，給藥組各組Ｗ／Ｄ值均顯著降低（Ｐ＜逡逑０．０１），以Ｃ３組最為顯者。逡逑表３．４各組大鼠肺Ｗ／Ｄ值（５±ｓ，ｎ＝１０）逡逑Ｎｏ．邐Ｗ／Ｄ邋（ｇ．ｇ－丨）逡逑空白邐４．５１±０．０６逡逑模型邐４．８５±０．０９＃＃逡逑Ｃｌ邐４．６１±０．０６＊＊逡逑Ｃ２邐４．５９±0．0５＊＊逡逑Ｃ３邐４．５７士邋０．０９＊＊逡逑Ｃ４邐４．６７±０．０７＊＊逡逑陽(yáng)性邐４．５２±０．１＊＊邐逡逑注：與空白組比較，＃＃尸＜０．０１，與模型組比較，，＊＊尸＜０．０１。逡逑３９逡逑

清瘟敗毒飲干預(yù)大鼠急性肺損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研宄ｎ逡逑Ａ３邐４．４８±０．０５６３＊＊逡逑Ａ４邐４．３９９±０．０４９３＊＊逡逑Ａ５邐４．４４８±0．0４６４＊＊逡逑Ａ６邐４．４７２士邋０．０６１３＊＊逡逑陽(yáng)性邐４．３５６土０．０４６９＊＊逡逑注：與模型組比較＊＊尸＜０．０１；與空白組比較＃＃尸＜０．邋０１。逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2588131