【摘要】：目的:本研究以卵清蛋白(OVA)為過敏原復(fù)制哮喘模型,觀察梓醇對(duì)哮喘小鼠的影響以及對(duì)氣道黏液高分泌的抑制作用,并探討其作用的分子機(jī)制。方法:1.分組及模型建立48只SPF級(jí)Balb/C小鼠預(yù)養(yǎng)一周,隨機(jī)分成6組(每組8只):正常對(duì)照組(Control)、模型組(Model)、地塞米松組(DEX)、梓醇低劑量組(CL)、梓醇中劑量組(CM)、梓醇高劑量組(CH)。除正常組外其他各組于第1、8、15d腹腔注射OVA和Al(OH)3的混懸致敏液(OVA 0.2mg/m L,Al(OH)3 5 mg/mL)致敏,于第21-27d霧化OVA(2%)生理鹽水激發(fā)液復(fù)制哮喘模型。正常對(duì)照組以生理鹽水代替致敏液和激發(fā)液。2.給藥方案于實(shí)驗(yàn)第21-27d霧化激發(fā)前1h灌胃。劑量為:DEX組1mg/kg、CL組20mg/kg、CM組40 mg/kg、CH組80 mg/kg,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組以生理鹽水灌胃。3.觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)第25-27d,霧化激發(fā)時(shí)觀察最初15min內(nèi)小鼠的引喘潛伏期。第28d,無創(chuàng)小鼠肺功能儀測(cè)定氣道反應(yīng)性(Penh)。第28d Penh實(shí)驗(yàn)完成后處死小鼠,收集血清、左肺肺泡灌洗液(BALF)和右肺中葉。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清中OVA-IgE和肺泡灌洗液(BALF)中IL-13、eotaxin、IL-8、MUC5AC、TSLP、IL-33、MCP-1、IL-1β、AREG(amphiregulin,雙調(diào)蛋白)、IL-9和IL-6的含量。HE和PAS染色觀察肺組織病理改變和杯狀細(xì)胞增生變化。免疫組化觀察肺組織支氣管MUC5AC、FOXA2、EGFR、NFAT3和P-NFAT3表達(dá)情況。流式細(xì)胞術(shù)分析梓醇對(duì)于肺組織中ILC2s的影響。結(jié)果:1.引喘潛伏期霧化激發(fā)期間,與正常對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組小鼠先出現(xiàn)煩躁不安、摳鼻瘙癢、抓耳撓腮、毛發(fā)凌亂現(xiàn)象,隨后腹肌抽搐,出現(xiàn)持續(xù)的喘息癥狀。隨著霧化激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)小鼠體重下降,精神不振。給予梓醇和DEX干預(yù)治療后,與哮喘模型組相比上述癥狀得到明顯改善,引喘潛伏期也明顯延長(zhǎng)(P0.01)。2.氣道反應(yīng)性各組小鼠Penh都隨著乙酰甲膽堿濃度的增加而增高。與正常組相比,在乙酰甲膽堿濃度為6.25mg/m L-50mg/m L時(shí),模型組的Penh顯著增高(P0.01);與模型組相比,CH組、CM組和DEX組在乙酰甲膽堿濃度為25mg/mL和50mg/m L時(shí)能明顯抑制Penh的增長(zhǎng)(P0.01或P0.05);與模型組相比,CL組在乙酰甲膽堿濃度為50mg/m L時(shí)能明顯抑制Penh的增長(zhǎng)(P0.01)。3.病理學(xué)改變梓醇能明顯改善哮喘小鼠肺組織炎性病理變化,并且抑制氣道杯狀細(xì)胞的增生。與模型組相比,梓醇各組杯狀細(xì)胞陽(yáng)性面積比例明顯降低(P0.01)。4.黏蛋白MUC5AC ELISA測(cè)定結(jié)果和免疫組化結(jié)果顯示,CH和CM降低BALF中MUC5AC含量,抑制支氣管MUC5AC表達(dá)。5.OVA-IgE和炎性細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),梓醇顯著降低血清OVA-Ig E水平,對(duì)BALF中IL-1β、IL-8、IL-13、IL-25、eotaxin、MUC5AC、MCP-1、TSLP、AREG IL-9和IL-6的水平具有明顯的降低作用。6.MUC5AC信號(hào)通路梓醇能提高支氣管MUC5AC生成IL-13信號(hào)通路中FOXA2和NFAT3的表達(dá)水平,抑制P-NFAT3的表達(dá);抑制EGFR信號(hào)通路中EGFR的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與哮喘模型組相比,梓醇能夠明顯降低哮喘小鼠肺組織中ILC2s的比例。結(jié)論:1.通過小鼠引喘潛伏期、HE染色、PAS染色、Penh等指標(biāo),確定本實(shí)驗(yàn)哮喘模型建模成功,梓醇具有明顯的抗哮喘作用。2.梓醇對(duì)于氣道黏蛋白MUC5AC分泌具有顯著地抑制作用。3.梓醇對(duì)BALF中多種致炎細(xì)胞因子具有明顯的抑制作用,并且能夠抑制血清中OVA-IgE的水平。4.梓醇可能通過的IL-13和EGFR兩條信號(hào)通路抑制氣道MUC5AC的高表達(dá)。
【圖文】：

圖 1 ILC2s 功能圖（Current Opinion in Immunology. 2013,25 (2) :148-155）Fig1 The function of ILC2s活的 ILC2s 可產(chǎn)生大量的炎癥細(xì)胞因子，與 Th2 炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。ILC2子包括 IL-13、IL-4、IL-5、IL-6、AREG 等，這些細(xì)胞因子在嗜酸性粒細(xì)單核細(xì)胞、B 細(xì)胞等炎癥的活化中起到了關(guān)鍵作用。另外特別引起我們注意和其活化的 Th2s 細(xì)胞均可產(chǎn)生大量的 IL-13，IL-13 可作用于巨噬細(xì)胞，活化能增強(qiáng)，在清除外來物的同時(shí)產(chǎn)生，還起到抗原提呈的作用；IL-13 還能作 PC 細(xì)胞并產(chǎn)生抗體，抗體進(jìn)一步可以與肥大細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞等結(jié)合引放各種炎癥介質(zhì)；IL-13 可直接作用于哮喘發(fā)作過程中的黏液高分泌和氣道成[25, 26]。另外，ILC2s 產(chǎn)生的 Amphiregulin 為 EGF 家族成員，與杯狀細(xì)胞結(jié)合可啟動(dòng)杯狀細(xì)胞黏蛋白 MUC5AC 的分泌。2）嗜酸性粒細(xì)胞（Eosinophils）來源于骨髓 CD34+祖細(xì)胞，其能夠分泌多種

酶 B（protein kinase B，PKB/AKT）的 N 端 PH 結(jié)構(gòu)域結(jié)合，使 AK膜上，并在 3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶 1（PDKI）的輔助下，通過酸磷酸化位點(diǎn)（Thr308）和絲氨酸磷酸化位點(diǎn)（Ser473）磷酸化而 途徑激活后，可進(jìn)一步激活下游的活化 T 細(xì)胞核因子 （3Nuclear factorFAT3）繼而上調(diào) MUC5AC 的 mNRA 表達(dá)，促使 MUC5AC 分泌增加 介導(dǎo)的信號(hào)通路刺激作用下，機(jī)體細(xì)胞可產(chǎn)生中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（NE）和 EG體結(jié)合引起 TACE 酶激活，將 pro-EGFR ligand 斷裂釋放 EGFR lig胞膜上的 EGFR 結(jié)合后，引起 EGFR 磷酸化而活化，引起 RAS-G進(jìn)而進(jìn)入級(jí)聯(lián)反應(yīng)，順序激活 Raf，MEK1/2，，ERK1/2，SP1,活化的 MUC5AC 的表達(dá)[23]。另外，活化的 P-EGFR 可抑制 FOXA2 的表達(dá)起黏液的高分泌。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 WANG Jing;JIN Rong-Guang;XIAO Lu;WANG Qiu-Juan;YAN Tian-Hua;;Anti-asthma effects of synthetic salidroside through regulation of Th1/Th2 balance[J];Chinese Journal of Natural Medicines;2014年07期

2 金嫣;沈雪艷;沈華浩;;IL-23與哮喘氣道炎癥關(guān)系的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2014年03期

3 文丹丹;羅飛;王敏;;IL-1及其受體拮抗劑與支氣管哮喘[J];生命科學(xué);2013年01期

4 張景鴻;李超乾;;支氣管哮喘氣道高反應(yīng)性機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2011年03期

5 潘濤;張偉;陳長(zhǎng)水;;Th17細(xì)胞分化和功能調(diào)控研究的新進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2010年09期

6 郝璐;崔麗英;;白介素10與支氣管哮喘和慢性阻塞性肺疾病[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2010年08期

7 蔡仁萍;吳世滿;;基質(zhì)金屬蛋白酶9、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_1的表達(dá)與支氣管哮喘不可逆性氣流阻塞[J];中華哮喘雜志(電子版);2010年01期

8 胡斯明;羅雅玲;賴文巖;陳培芬;;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞/Th17在支氣管哮喘小鼠氣道炎癥過程中的變化[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年19期

9 石敦義;張桂蓉;;靈芝孢子對(duì)支氣管哮喘豚鼠引喘潛伏期及類胰蛋白酶釋放的影響[J];中華哮喘雜志(電子版);2009年02期

10 王妍;金先橋;;支氣管哮喘實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷难芯窟M(jìn)展[J];國(guó)際呼吸雜志;2006年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 何麗霞;化痰活血方和梓醇拮抗哮喘小鼠炎癥和黏蛋白MUC5AC機(jī)制的研究[D];暨南大學(xué);2016年

2 吳賽春;化痰活血方及其有效成分梓醇對(duì)哮喘小鼠的作用及機(jī)制初探[D];暨南大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2587847