【摘要】：本研究針對二維液相在復雜樣品分離中的不足,結合新的混合模式色譜,構建基于Sephadex LH-20 × RPLC聯(lián)用的新型二維色譜方法體系,并探索該系統(tǒng)在中藥材分析和分離制備上的應用。構建Sephadex LH-20與反相色譜聯(lián)用的在線分析系統(tǒng),以含多個化合物的模式混合物作為研究對象,通過探究各化合物的液相保留行為證明了葡聚糖凝膠在甲醇/水洗脫模式下可兼具尺寸排阻、氫鍵吸附、分配三種分離機制。以紅花作為研究對象,在確定溶劑洗脫模式的基礎上考察第一維Sephadex LH-20柱的柱長、流速等因素對分離效果的影響,確定分離參數(shù);選擇適合該二維系統(tǒng)的接口;將構建的Sephadex LH-20 × RPLC聯(lián)用模式與RPLC × RPLC聯(lián)用模式和HILIC × RPLC聯(lián)用模式進行分離效果的比較,Sephadex LH-20 × RPLC聯(lián)用模式顯示出了遠優(yōu)于其他兩個聯(lián)用模式的正交性分離度(72.9%),同時強大的樣品承載力預示其可為復雜樣品提供更為豐富的成分信息。選取藏紅花、銀杏葉、梔子、射干等中藥作為分析對象,進一步證實了 Sephadex LH-20×RPLC系統(tǒng)在中藥材分析中的潛在分離能力。最后本研究將構建的Sephadex LH-20 × RPLC聯(lián)用模式放大到制備規(guī)模,選取紅花水提物作為研究對象進行全二維在線制備分離和傳統(tǒng)一維制備分離,采用高效液相色譜法(HPLC)對化合物進行純度分析并結合核磁共振、質譜等手段進行化合物結構鑒定與解析。最終,從紅花中制備分離得到24個化合物,其中在線制備并鑒定了 11個化合物,離線制備得到并鑒定了 22個化合物。綜上,本研究成功構建了一種混合模式Sephadex LH-20 × RPLC二維液相色譜系統(tǒng),對水溶性樣品具有良好的分離效果,為中藥材的成分分離提供了一個新的思路。
【圖文】：

圖２－１在線分析Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０邋ｘ邋ＲＰＬＣ系統(tǒng)的示意圖逡逑２．４邋Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱的分離原理闡述逡逑本實驗選取了邋１７個模式化合物的混合物（圖２－１）作為研宄對象。通過探討逡逑這些化合物的結構特點和在Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０上的保留行為之間的關系，證明逡逑Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱的分離原理。同時，實驗以等度和梯度兩種洗脫方式，探宄在逡逑不同洗脫條件下Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱分離原理的變化。實驗條件如下：逡逑供試樣品：模式化合物混合液；進樣量：１０邋ＨＬ；波長：２４０邋ｎｍ；逡逑第一維色譜柱：手工填裝邋Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０邋柱（１００邋ｃｍ邋ｘ邋１．６邋ｍｍ邋ｉ．ｄ．）逡逑等度洗脫條件：逡逑１）邐第一維液相色譜參數(shù)：流動相：甲醇；等度洗脫時間：５００邋ｍｉｎ；逡逑流速：０．０２邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２）邐稀釋程序：稀釋液：０．２％甲酸水；梯度時間：０—５００邋ｍｉｎ；逡逑流速：０．５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑梯度洗脫條件：逡逑１）邐第一維液相洗脫梯度：流動相：甲醇（Ｂ）邋／水（Ａ）；時間梯度：０—３００逡逑—５００邋ｍｉｎ；梯度洗脫程序邋０％Ｂ—邋１００％Ｂ—邋１００％Ｂ；流速：０．０５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２）邐稀釋程序：洗脫液：０．２％甲酸水；梯度時間：０—３００—５００邋ｍｉｎ；流速：逡逑０—０．５邋—０．５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２８逡逑

６．３邋—邋７—７．１邋—８邋ｍｉｎ；梯度洗脫程序邋０％Ｂ—４０％Ｂ邋—邋６０％Ｂ—１００％Ｂ—１００％Ｂ—逡逑０％Ｂ—０％Ｂ；流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ；溫度：５０°Ｃ；波長：２７５邋ｎｍ。逡逑紅花的第二維反相色譜的分析采用了一個８分鐘的色譜條件，如圖２－４所示，，逡逑紅花粗提物得到了較好的分離。由于紅花粗提物的成分復雜，一個較短的二維分逡逑析時間會嚴重影響樣品在反相色譜上的分析效果。逡逑ｓ邋Ｓｆ＊ｒ：逡逑ＺＣ＇逡逑Ｋ逡逑Ｉ邋丨ｌ逡逑？；■邐逡逑邐ｉ邐ｉ邐ｊ邐＊邐ｉ邐？邐？逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－邋４邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ邋ｏｆ邋Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ邋ｔｅｓｔ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ逡逑圖２－４紅花樣品溶液ＨＰＬＣ圖逡逑２．５．２邐第一維洗脫模式的選擇逡逑基于本章２．４關于在不同洗脫模式下對Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０分離模式的探究，我逡逑們己證實了不同洗脫模式對于Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０分離機制的影響。同樣，Ｓｅｐｈａｄｅｘ邐｜逡逑３１逡逑
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1

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6 潘麗;余荷秀;蔡r

本文編號：2587827