【摘要】：研究背景和研究目的:良性中央氣道狹窄最主要的治療手段為氣管鏡介入治療,但是很多患者容易復(fù)發(fā)。高度增生的肉芽組織是造成這種現(xiàn)象的罪魁禍?zhǔn)�。我們先前的研究已證實(shí),一種傳統(tǒng)的抗癌中藥(β-欖香烯)能夠有效地抑制良性中央氣道狹窄患者的氣道肉芽組織及培養(yǎng)出的氣道成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),但具體機(jī)制還未明確。本研究的目的即為探尋β-欖香烯抑制人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制,以求為發(fā)現(xiàn)治療良性中央氣道狹窄的靶點(diǎn),開(kāi)發(fā)治療良性中央氣道狹窄的新藥提供理論依據(jù)。研究方法:用不同濃度的β-欖香烯干預(yù)人正常原代氣道成纖維細(xì)胞與人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間或用相同濃度的β-欖香烯干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞不同時(shí)間后,觀察細(xì)胞的形態(tài)改變并測(cè)定細(xì)胞的增殖指數(shù)。用陰性對(duì)照、β-欖香烯干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,檢測(cè)差異表達(dá)基因,預(yù)測(cè)β-欖香烯作用的信號(hào)通路。測(cè)定篩選出的TGF-β通路、經(jīng)典Wnt通路、纖維化相關(guān)基因在人正常原代氣道成纖維細(xì)胞與人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況。用不同濃度的β-欖香烯干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,測(cè)定TGF-β通路及纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。用相同濃度的TGF-β(TGF-β通路激活劑)干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞不同時(shí)間或用不同濃度的TGF-β干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,測(cè)定TGF-β通路相關(guān)基因的表達(dá)。用陰性對(duì)照、β-欖香烯、SB431542(TGF-β通路抑制劑)、β-欖香烯+SB431542、β-欖香烯+TGF-β(2.5ng/ml,24h)干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,觀察細(xì)胞的形態(tài)改變,測(cè)定細(xì)胞的增殖指數(shù)與TGF-β通路、纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。用不同濃度的β-欖香烯、DKK-1(經(jīng)典Wnt通路抑制劑)干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,測(cè)定經(jīng)典Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá)。用不同濃度的氯化鋰(經(jīng)典Wnt通路激活劑)干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,測(cè)定經(jīng)典Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá)。用β-欖香烯、β-欖香烯+氯化鋰(10m M)干預(yù)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞相同時(shí)間后,觀察細(xì)胞的形態(tài)改變,測(cè)定細(xì)胞的增殖指數(shù)與經(jīng)典Wnt通路、纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。研究結(jié)果:β-欖香烯對(duì)人正常原代氣道成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有劑量依賴的抑制效應(yīng)。它對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有劑量依賴的抑制效應(yīng),沒(méi)有時(shí)間依賴的抑制效應(yīng)。β-欖香烯干預(yù)后,人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞表達(dá)改變的基因很多都與纖維化相關(guān),如TGF-β、Smad2、Smad3、Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、α-SMA、Col-I。這些基因參與的通路主要為TGF-β通路和經(jīng)典Wnt通路。相比人正常原代氣道成纖維細(xì)胞,人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的TGF-β通路、經(jīng)典Wnt通路、纖維化相關(guān)基因是活化的。β-欖香烯劑量依賴地抑制人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞TGF-β通路和纖維化相關(guān)基因的活化。2.5ng/ml TGF-β干預(yù)24小時(shí)對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的TGF-β通路具有最大激活效應(yīng)。SB431542對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、TGF-β通路、纖維化相關(guān)基因的抑制效應(yīng)與β-欖香烯相似,SB431542聯(lián)合β-欖香烯干預(yù)后,這些抑制效應(yīng)更為明顯,TGF-β(2.5ng/ml,24h)能夠減弱β-欖香烯對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、TGF-β通路、纖維化相關(guān)基因的抑制效應(yīng)。β-欖香烯劑量依賴地抑制人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞經(jīng)典Wnt通路的活化,這些效應(yīng)與DKK-1類似。10m M氯化鋰對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的經(jīng)典Wnt通路具有最大激活效應(yīng),它能夠減弱β-欖香烯對(duì)人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、經(jīng)典Wnt通路、纖維化相關(guān)基因的抑制效應(yīng)。研究結(jié)論:β-欖香烯是治療良性中央氣道狹窄的一種安全有效的藥物,只抑制人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),而不影響人正常原代氣道成纖維細(xì)胞。相比人正常原代氣道成纖維細(xì)胞,人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的TGF-β通路與經(jīng)典Wnt通路是活化的。β-欖香烯通過(guò)抑制TGF-β通路和經(jīng)典Wnt通路的活化來(lái)抑制人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),這兩條通路可能是治療良性中央氣道狹窄的很有希望的靶點(diǎn)。
【圖文】：

原代氣道成纖維細(xì)胞與人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的形態(tài)（正常原代氣道成纖維細(xì)胞（B）人原代氣道肉芽成纖維細(xì)胞的β-欖香烯對(duì)人正常氣道成纖維細(xì)胞形態(tài)濃度的β-欖香烯干預(yù) 48 小時(shí)后，人正常原代氣道變。在陰性對(duì)照組，細(xì)胞呈典型的長(zhǎng)梭形，排列整烯組，細(xì)胞形態(tài)幾乎沒(méi)有改變（圖 2B）。隨著β-欖/ml，，細(xì)胞形態(tài)依舊沒(méi)有改變（圖 2C，圖 2D，圖 2

同濃度的β-欖香烯干預(yù) 48 小時(shí)后人正常原代氣道成纖維細(xì)胞的形態(tài)（放大 A）陰性對(duì)照組（B）40ug/mlβ-欖香烯組（C）80ug/mlβ-欖香烯組（D）120ug組（E）160ug/mlβ-欖香烯組同濃度的β-欖香烯對(duì)人正常氣道成纖維細(xì)胞增殖活性的影加入不同濃度的β-欖香烯干預(yù) 48 小時(shí)后，人正常原代氣道成纖維性沒(méi)有明顯改變，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表 1，圖 3）。表 1 不同濃度的β-欖香烯對(duì)人正常原代氣道成纖維細(xì)胞增殖活性的影響實(shí)驗(yàn)分組 OD 值（ X±S）陰性對(duì)照 0.99±0.02β-欖香烯（40ug/ml） 0.98±0.02
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2587805