本文關(guān)鍵詞：CCN1基因腺病毒在放創(chuàng)復(fù)合傷修復(fù)中的作用和機(jī)理研究

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【摘要】： 一、目的 放創(chuàng)復(fù)合傷是戰(zhàn)時核爆炸和平時核事故中所發(fā)生的主要傷型之一,損傷后其傷口愈合主要表現(xiàn)為愈合延遲,甚至長期不愈合。CCN1(Cysteine rich 61,Cyr61/CCN1)是即刻早期基因CCN家族成員,體外研究顯示其能促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖、遷移,調(diào)節(jié)血管生成,影響基質(zhì)代謝,參與創(chuàng)傷修復(fù),關(guān)于CCN1在放創(chuàng)復(fù)合傷愈合中的作用尚未見報道。本課題檢測CCN1蛋白和mRNA在大鼠放創(chuàng)復(fù)合傷創(chuàng)面肉芽組織的表達(dá)情況;構(gòu)建重組腺病毒AdCCN1感染創(chuàng)面組織后促進(jìn)創(chuàng)傷愈合以及對創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)因子的表達(dá)調(diào)控。通過研究,探討CCN1在放創(chuàng)復(fù)合傷愈合中的作用及機(jī)制。為深入認(rèn)識傷口愈合過程的機(jī)制提供新的視角,并為探索促愈治療新藥提供新的途徑。 二、方法和結(jié)果 1.放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠模型的建立及CCN1在創(chuàng)面組織中的表達(dá)和意義:將大鼠隨機(jī)分為單純創(chuàng)傷組和放創(chuàng)復(fù)合傷組。放創(chuàng)復(fù)合傷組采用60Coγ射線進(jìn)行全身照射在照射后1h內(nèi),制背部皮膚全層切除傷口。在傷后的第0、3、6、9、15、21d取材,用RT-PCR和免疫組織化學(xué)染色分別檢測CCN1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)在傷后約15d之前CCN1蛋白和mRNA較單純創(chuàng)傷表達(dá)下降,約21d時表達(dá)量升高。CCN1的表達(dá)較單純創(chuàng)傷組延遲。 2. CCN1腺病毒的構(gòu)建、制備及其活性檢測:通過酶切連接的方式將pCMV-CCN1中的小鼠CCN1表達(dá)框連入pAdTrace-TO4穿梭載體中獲得pAdTrace-CCN1,線性化后在AdEasy-1大腸桿菌中進(jìn)行同源重組,獲得pAdCCN1重組腺病毒質(zhì)粒,隨后線性化轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行病毒顆粒包裝。收集病毒裂解液并反復(fù)感染293細(xì)胞擴(kuò)增病毒后感染創(chuàng)面CHO細(xì)胞和創(chuàng)面組織細(xì)胞,用Western Blot和IHC鑒定CCN1在CHO細(xì)胞中正確分泌,并且在創(chuàng)面組織細(xì)胞中高表達(dá)。 3.CCN1重組腺病毒在放創(chuàng)復(fù)合傷修復(fù)中的作用及其機(jī)理的實驗研究:致傷后,立即在創(chuàng)面邊緣分別皮下注射等量AdCCN1病毒和AdRFP病毒,7天后取材固定制作石蠟切片,HE染色表明AdCCN1組創(chuàng)面,成纖維細(xì)胞增多,微血管密度增高, IHC檢測MMP1、TIMP1、bFGF等創(chuàng)傷愈合相關(guān)因子表達(dá)均升高。 三、結(jié)論 1.建立了放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠模型,檢測到創(chuàng)面肉芽組織中在傷后約15d之前CCN1蛋白和mRNA較單純創(chuàng)傷表達(dá)下降,約21d時表達(dá)量升高。CCN1的表達(dá)下降可能是放創(chuàng)復(fù)合傷難愈的原因之一。 2.應(yīng)用AdEasy系統(tǒng)構(gòu)建、制備AdCCN1重組腺病毒,酶切鑒定結(jié)果與預(yù)期相符;發(fā)現(xiàn)其可以感染CHO細(xì)胞正確分泌CCN1;可以有效感染創(chuàng)面組織細(xì)胞,并可使其高表達(dá)CCN1。 3.AdCCN1在放創(chuàng)復(fù)合傷愈合中的作用機(jī)理可能在于:AdCCN1感染創(chuàng)面組織細(xì)胞高表達(dá)分泌CCN1后,通過提高M(jìn)MP1、TIMP1、bFGF等創(chuàng)傷愈合相關(guān)因子的表達(dá)發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：CCN1 輻射 創(chuàng)傷愈合 腺病毒
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R82;R641
【目錄】：

• 英文縮寫簡表4-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 前言10-11
• 第一部分 放創(chuàng)復(fù)合傷大鼠動物模型的建立以及CCN1 在創(chuàng)傷愈合過程中的表達(dá)和意義11-27
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-25
• 討論25-26
• 小結(jié)26-27
• 第二部分 CCN1 腺病毒的構(gòu)建、制備及其活性檢測27-44
• 材料與方法27-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-43
• 小結(jié)43-44
• 第三部分 CCN1 重組腺病毒在放創(chuàng)復(fù)合傷修復(fù)中的作用及其機(jī)理的實驗研究44-52
• 材料與方法44-45
• 結(jié)果45-49
• 討論49-51
• 小結(jié)51-52
• 全文總結(jié)52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 文獻(xiàn)綜述58-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文及待發(fā)表的論文69

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