本文關(guān)鍵詞：小鼠瞳孔對(duì)光反射觀察方法的建立及其應(yīng)用研究

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【摘要】：瞳孔對(duì)光反射（pupillary light reflex，PLR）與視覺(jué)系統(tǒng)、丘腦、腦干系統(tǒng)及自主神經(jīng)系統(tǒng)有著密切的關(guān)系[1]，其在視覺(jué)系統(tǒng)[2-5]、神經(jīng)系統(tǒng)[6,7]及精神心理相關(guān)疾病[8,9]的診斷和評(píng)價(jià)中有著重要意義。臨床上通常采用光照法直接觀察瞳孔口徑及其變化，簡(jiǎn)單、實(shí)用，但是影像學(xué)方法能夠客觀記錄瞳孔的細(xì)節(jié)變化和動(dòng)態(tài)變化，因此后者被廣泛用于研究工作。為進(jìn)一步探索PLR指標(biāo)在視覺(jué)生理和眼科臨床研究中的應(yīng)用，本文建立了小鼠PLR影像學(xué)檢測(cè)方法，探討了刺激光顏色、強(qiáng)度、麻醉藥物、束縛等因素對(duì)小鼠瞳孔對(duì)光反射的影響。同時(shí)結(jié)合視網(wǎng)膜電圖（electroretinogram,ERG）觀察了一種快速視網(wǎng)膜退行性變（retinal degeneration fast，rdf/B6）小鼠的PLR，以進(jìn)一步探索視網(wǎng)膜功能客觀評(píng)價(jià)方法。 材料和方法 1.成年雄性C57BL/6小鼠（SPF級(jí)，購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）40只用于預(yù)實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)研究。rdf/B6小鼠（SPF級(jí)）20只由第四軍醫(yī)大學(xué)航空航天醫(yī)學(xué)系動(dòng)物屏障實(shí)驗(yàn)室提供。 2.采用遠(yuǎn)紅外攝像鏡頭拍攝瞳孔，通過(guò)圖像處理程序分析瞳孔圖像動(dòng)態(tài)變化的原理，建立了動(dòng)物PLR檢查系統(tǒng)，并用于觀察不同顏色光及其強(qiáng)度刺激下小鼠PLR的動(dòng)態(tài)變化以及麻醉、束縛的影響；采用12通道心電圖記錄儀（ECG6511, Inc, NihonKohden）記錄束縛及麻醉狀態(tài)下小鼠的心率；采用RETIport系統(tǒng)（Roland Consult，德國(guó)）記錄ERG。 3.采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 1.刺激光強(qiáng)度對(duì)正常C57BL/6小鼠PLR的影響 在從2cd/m~2至256cd/m~2五個(gè)光亮度等級(jí)的白、紅、綠及藍(lán)色光刺激下，瞳孔收縮潛伏期（pupillary constriction latency,CL）無(wú)顯著變化。瞳孔收縮幅度（constrictionamplitude，CA）與白、綠和藍(lán)色的刺激光強(qiáng)度呈直線正相關(guān)（P0.01），而與紅色光強(qiáng)度無(wú)明顯相關(guān)。瞳孔收縮速度（constriction velocity，CV）及瞳孔復(fù)張速度（re-dilationvelocity，RV）與白光、綠光及藍(lán)光亮度等級(jí)呈直線負(fù)相關(guān)（P0.01），與紅色光強(qiáng)度無(wú)明顯相關(guān)。 2.刺激光顏色與正常C57BL/6小鼠PLR動(dòng)態(tài)分析曲線參數(shù)的關(guān)系 在弱光強(qiáng)（2cd/m~2）刺激時(shí)，紅色光刺激時(shí)的CL較其他顏色光略有延長(zhǎng)（P0.05）其他三種光之間無(wú)明顯差異；紅色光刺激引起的CA明顯小于白光（P0.001），但是白光與綠色光與藍(lán)色光刺激引起的CA變化之間無(wú)明顯差異；CV、RV的變化與刺激光的顏色無(wú)關(guān)。 在光強(qiáng)為8cd/m~2、32cd/m~2、128cd/m~2、256cd/m~2時(shí)，紅色光刺激引起的PLR的CA明顯小于白光（P0.05），藍(lán)色光刺激引起的CA值明顯大于白光（P0.05），綠色光刺激的CA與白光無(wú)明顯差異（P0.05）；紅色光引起的CV稍大于白光（P0.05），藍(lán)色光引起的CV明顯小于白光（P0.05），綠色光與白色光刺激引起的CV無(wú)明顯差異（P0.05）；紅色光引起的RV均大于白光（P0.05），藍(lán)色光引起的RV小于白光（P0.05）,綠光與白光刺激引起的RV無(wú)明顯差異（P0.05）。 3.束縛適應(yīng)與麻醉藥物對(duì)小鼠PLR的影響 在束縛適應(yīng)1d、2d和7d時(shí)，小鼠瞳孔直徑自主調(diào)節(jié)幅度之間無(wú)顯著差異，而在3d、4d和5d時(shí)，瞳孔直徑自主調(diào)節(jié)幅度明顯小于其他4天（P0.05）。束縛適應(yīng)5天后，束縛組小鼠瞳孔初始直徑（initial pupil diameter，IPD）與塞拉嗪組小鼠之間無(wú)明顯差異，但是大于氯胺酮麻醉組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.01）。氯胺酮組與氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組二者之間的IPD無(wú)明顯差異；束縛組小鼠的瞳孔收縮最小值（minimum pupil diameter。minPD）與氯胺酮麻醉組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組相比均無(wú)明顯差異。 在強(qiáng)度為200cd/m~2，波長(zhǎng)為625nm光刺激下，塞拉嗪麻醉組表現(xiàn)為PLR消失，瞳孔直徑未見(jiàn)變化。束縛組PLR的CL值小于氯胺酮組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.05），CA值大于后兩組（P0.01），而后兩組間無(wú)明顯差異；束縛組CV值則小于氯胺酮麻醉組CV（P0.01），氯胺酮麻醉組大于氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.01）；三組間的RV值無(wú)明顯差異。 在束縛適應(yīng)的7d中小鼠心率無(wú)明顯改變。麻醉后，氯胺酮組、塞拉嗪組與氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組三者之間的心率無(wú)明顯差異，但均小于束縛組（P0.01），其中氯胺酮組部分小鼠出現(xiàn)心律不齊。 4. C57BL/6小鼠、rdf/B6小鼠彩色光ERG比較 在暗適應(yīng)條件下，紅色光刺激引起C57BL/6小鼠的暗適應(yīng)視桿細(xì)胞反應(yīng)和最大混合反應(yīng)的b波幅值較白、綠和藍(lán)光低（P0.01），潛伏期稍有延長(zhǎng)（P0.01）；明適應(yīng)后，紅色光刺激未誘發(fā)出明顯的視錐細(xì)胞反應(yīng)及閃爍ERG（20Hz Flicker），藍(lán)光刺激誘發(fā)ERG的波幅值均明顯大于白光和綠光ERG的值（P0.01），后兩者之間無(wú)明顯差異。不同強(qiáng)度顏色光刺激rdf/B6小鼠，未誘發(fā)出任何ERG波形。 5. rdf/B6小鼠的PLR特點(diǎn) 在rdf/B6小鼠，30cd/m~2光強(qiáng)度刺激下僅藍(lán)光可以誘發(fā)出明顯PLR，且CA小于野生型小鼠（C57BL/6）（P0.01）；500cd/m~2光強(qiáng)度下藍(lán)、綠、白光可以誘發(fā)PLR，其CA幅值分別是藍(lán)綠白，其中藍(lán)、綠光下的CA與野生型（C57BL/6）小鼠間無(wú)明顯差異，，白光誘發(fā)PLR的CA則小于野生型小鼠（P0.05）；上述強(qiáng)度紅光刺激rdf/B6小鼠未記錄到明顯的PLR。 結(jié)論 1.所建立動(dòng)物PLR檢查系統(tǒng)可以動(dòng)態(tài)觀察有色素小鼠PLR變化，PLR的相關(guān)參數(shù)與刺激光強(qiáng)度和光顏色有密切關(guān)系。 2.適應(yīng)性束縛可在一定程度保持C57BL/6小鼠PLR各參數(shù)值穩(wěn)定，而麻醉藥物（氯胺酮、塞拉嗪或聯(lián)合應(yīng)用）對(duì)相關(guān)參數(shù)有影響，提示在麻醉?xiàng)l件下研究PLR時(shí)應(yīng)當(dāng)注意排除這些影響。 3.不同顏色光刺激下rdf/B6小鼠的PLR有明顯區(qū)別，與野生型小鼠間也有顯著的差異，提示ERG波形起源與PLR不完全相同，后者的起源更復(fù)雜。
【關(guān)鍵詞】：瞳孔對(duì)光反射 測(cè)量 刺激光亮度 刺激光顏色 內(nèi)在感光性視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 小鼠 快速視網(wǎng)膜變性小鼠
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R85
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-16
• 文獻(xiàn)回顧16-32
• 第一部分 C57BL/6 小鼠 PLR 測(cè)量方法建立32-48
• 1 材料32-34
• 2 方法34-36
• 3 結(jié)果36-44
• 4 討論44-48
• 第二部分 束縛適應(yīng)及麻醉藥物對(duì) C57BL/6 小鼠瞳孔對(duì)光反射的影響48-56
• 1 材料48-49
• 2 方法49-50
• 3 結(jié)果50-54
• 4 討論54-56
• 第三部分 瞳孔對(duì)光反射檢查在快速視網(wǎng)膜變性小鼠視覺(jué)功能評(píng)價(jià)中的應(yīng)用56-71
• 1 材料56-57
• 2 方法57-58
• 3 結(jié)果58-67
• 4 討論67-71
• 小結(jié)71-73
• 參考文獻(xiàn)73-84
• 附錄84-85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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3 張作明,顧永昊,郭群,龍?zhí)?李莉,石力,侯豹可;小鼠與大鼠視網(wǎng)膜電圖和閃光視覺(jué)誘發(fā)電位記錄標(biāo)準(zhǔn)化方案建議[J];眼科新進(jìn)展;2004年02期

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本文編號(hào)：790155