本文關(guān)鍵詞：尾吊狀態(tài)下大鼠骨骼肌MGF、Dystrophin與M-Cad表達(dá)的研究

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【摘要】：研究背景與目的：實踐證明，航天飛行數(shù)日即可引起肌萎縮的發(fā)生，，而在肌肉組織中力生長因子（MGF）能夠促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞的激活和增殖，從而達(dá)到防止肌萎縮的目的。由于失重條件下MGF表達(dá)情況和機(jī)械刺激下MGF表達(dá)調(diào)控機(jī)制不清楚，本文重點研究尾吊狀態(tài)下大鼠比目魚肌與趾長伸肌中MGF表達(dá)情況，并對MGF與肌養(yǎng)蛋白（Dystrophin）、M型鈣調(diào)蛋白（M-cad）基因表達(dá)變化的相關(guān)性進(jìn)行分析；同時觀察尾吊狀態(tài)下比目魚肌Dystrophin蛋白分布，對肌萎縮發(fā)生的可能機(jī)制進(jìn)行探討；最后通過尋找IGF-I pre-mRNA序列中力敏感元件為MGF的力學(xué)表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究奠定實驗基礎(chǔ)。 研究方法：本研究采用大鼠尾吊模擬失重效應(yīng)模型，在尾吊1、4、7、10、14天后，通過實時定量PCR分析尾吊對比目魚肌與趾長伸肌中MGF、Dystrophin與M-Cad mRNA表達(dá)水平的影響；采用熒光免疫組化方法觀察尾吊大鼠比目魚肌肌纖維橫截面積變化和骨架結(jié)構(gòu)蛋白Dystrophin分布變化，同時檢測血清中骨骼肌損傷標(biāo)志酶乳酸脫氫酶活性變化，判斷失重條件下肌膜變化情況。最后，對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IGF-I選擇性剪接載體的細(xì)胞進(jìn)行流體剪切實驗，試圖從中尋找IGF-I基因內(nèi)含子序列中對力敏感的作用元件，為MGF的力學(xué)表達(dá)調(diào)控研究提供實驗依據(jù)和理論參考。 結(jié)果顯示：同對照相比1）尾吊過程中趾長伸肌中MGF表達(dá)變化不明顯，而比目魚肌中MGF在尾吊7天和14天出現(xiàn)顯著性降低（P0.05）；2）在趾長伸肌中Dystrophin表達(dá)在尾吊1天有極顯著性升高（P0.01），尾吊4天有顯著性升高（P0.05），其余時間點與對照組相比均無顯著性差異，而在比目魚肌中尾吊第4天即開始出現(xiàn)顯著性下降（P0.01），并一直持續(xù)到尾吊14天；3）在比目魚肌中M-Cad表達(dá)下降，而趾長伸肌中M-Cad表達(dá)變化不明顯；4）尾吊7天和14天后，肌纖維的橫截面積呈顯著性下降，橫截面積分別下降了27%（P0.05）和52%（P0.01）；隨著尾吊時間的延長，肌膜上Dystrophin呈現(xiàn)彌散性分布的趨勢，在尾吊10、14天甚至有Dystrophin蛋白分布斷裂的現(xiàn)象；在尾吊過程中血清LDH活性出現(xiàn)顯著性升高（P0.05）；5）通過實時定量PCR檢測分析，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染含不同長度內(nèi)含子序列的選擇性剪接載體的細(xì)胞對流體剪切刺激的響應(yīng)性不同，其中一種細(xì)胞株在流體剪切后所產(chǎn)生的外源性MGF表達(dá)升高，其余細(xì)胞株變化不明顯。 結(jié)論：以上結(jié)果表明1）尾吊導(dǎo)致比目魚肌中MGF表達(dá)顯著下降，而趾長伸肌中MGF變化不明顯；2）尾吊導(dǎo)致Dystrophin、M-Cad與MGF表達(dá)存在相似的變化趨勢；3）尾吊引起肌萎縮的同時LDH活性升高并伴隨有骨架蛋白Dystrophin分布彌散性變化甚至分布斷裂現(xiàn)象，表現(xiàn)出一定程度的肌膜紊亂甚至受損；4）通過流體剪切力實驗發(fā)現(xiàn)選定的IGF-I載體序列中存在力敏感元件。
【關(guān)鍵詞】：尾吊 肌萎縮 力生長因子 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：中北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R85
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 1 緒論12-14
• 2 文獻(xiàn)綜述14-26
• 2.1 失重/模擬失重條件下肌肉萎縮的研究進(jìn)展14-20
• 2.1.1 失重/模擬失重條件下肌肉質(zhì)量及體積變化14-15
• 2.1.2 失重/模擬失重條件下肌肉形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化15
• 2.1.3 失重/模擬失重條件下肌肉功能的變化15-16
• 2.1.4 失重/模擬失重條件下肌肉蛋白代謝的變化16-17
• 2.1.5 失重/模擬失重條件下肌核與衛(wèi)星細(xì)胞的變化17-18
• 2.1.6 失重/模擬失重條件下肌萎縮的原因18
• 2.1.7 失重/模擬失重條件下肌肉萎縮的防治18-20
• 2.2 力生長因子的研究進(jìn)展20-25
• 2.2.1 MGF 的形成與結(jié)構(gòu)20-21
• 2.2.2 MGF 的作用21-22
• 2.2.3 MGF 的調(diào)控途徑研究22-25
• 2.3 研究內(nèi)容25-26
• 3 尾吊影響 MGF、Dystrophin 與 M-Cad 基因表達(dá)26-37
• 3.1 前言26
• 3.2 實驗材料26-27
• 3.2.1 實驗動物及分組26-27
• 3.2.2 主要儀器27
• 3.2.3 主要試劑27
• 3.3 實驗方法27-30
• 3.3.1 大鼠尾吊模型的建立27
• 3.3.2 肌肉標(biāo)本的分離27-28
• 3.3.3 實時定量 PCR 檢測28-30
• 3.3.4 統(tǒng)計學(xué)方法30
• 3.4 實驗結(jié)果30-33
• 3.4.1 尾吊對大鼠骨骼肌 MGF mRNA 表達(dá)的影響30-31
• 3.4.2 尾吊對大鼠骨骼肌 M-Cad mRNA 表達(dá)的影響31-32
• 3.4.3 尾吊對大鼠骨骼肌 Dystrophin mRNA 表達(dá)的影響32-33
• 3.5 討論33-35
• 3.6 小結(jié)35-37
• 4 尾吊影響大鼠比目魚肌 Dystrophin 表達(dá)分布以及血清乳酸脫氫酶活性37-46
• 4.1 前言37
• 4.2 實驗材料37-38
• 4.2.1 實驗動物及分組37-38
• 4.2.2 主要儀器38
• 4.2.3 主要試劑38
• 4.3 實驗方法38-40
• 4.3.1 大鼠尾吊模型的建立38
• 4.3.2 肌肉標(biāo)本的分離38
• 4.3.3 抽取血清、生化指標(biāo)測定38
• 4.3.4 熒光免疫及圖像獲取38-39
• 4.3.5 采用 Image J 軟件進(jìn)行肌纖維橫截面積分析39-40
• 4.3.6 統(tǒng)計學(xué)方法40
• 4.4 實驗結(jié)果40-43
• 4.4.1 尾吊對大鼠比目魚肌肌纖維橫截面積的影響40-41
• 4.4.2 尾吊對大鼠比目魚肌 Dystrophin 蛋白分布的影響41-43
• 4.4.3 尾吊對大鼠血清 LDH 活性的影響43
• 4.5 討論43-45
• 4.6 小結(jié)45-46
• 5 流體剪切力對 IGF-I 選擇性剪接調(diào)控機(jī)制探討46-53
• 5.1 前言46
• 5.2 實驗材料46-47
• 5.2.1 實驗細(xì)胞46-47
• 5.2.2 主要儀器47
• 5.2.3 主要試劑47
• 5.3 實驗方法47-51
• 5.3.1 載體構(gòu)建與穩(wěn)定細(xì)胞株篩選47-48
• 5.3.2 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與傳代48
• 5.3.3 細(xì)胞流體剪切力刺激48-50
• 5.3.4 實時定量 PCR 檢測50-51
• 5.3.5 統(tǒng)計學(xué)方法51
• 5.4 實驗結(jié)果51
• 5.4.1 成骨細(xì)胞流體剪切結(jié)果51
• 5.5 討論51-52
• 5.6 小結(jié)52-53
• 6 結(jié)論與展望53-55
• 6.1 全文總結(jié)53
• 6.2 研究結(jié)論53-54
• 6.3 對未來工作的展望54-55
• 參考文獻(xiàn)55-65
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文及所取得的研究成果65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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4 王齊;廖華;;力學(xué)刺激對體外培養(yǎng)成肌細(xì)胞作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2007年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李揚(yáng);不同運(yùn)動方式對反映肌肉微損傷指標(biāo)影響的比較研究[D];北京體育大學(xué);2004年

本文編號：534846