本文關(guān)鍵詞：IL-33增強免疫抑制小鼠抗感染能力及其機制的初步探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：環(huán)磷酰胺作為最常用的抗腫瘤化療藥之一,具有較強的免疫抑制作用,主要表現(xiàn)為外周血白細(xì)胞急劇減少。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)主要引發(fā)化膿性感染,其傳播速度快,具有多重耐藥性,致病性和病死率高。中性粒細(xì)胞由骨髓中造血干細(xì)胞分化而來,當(dāng)病原微生物突破機體的物理屏障進入組織,中性粒細(xì)胞迅速趨化至感染部位,吞噬殺傷病原微生物。作為“警報素”和前炎性細(xì)胞因子,IL-33在細(xì)胞凋亡、分化以及多種免疫性疾病中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本課題通過建立小鼠免疫抑制模型,觀察IL-33在免疫功能抑制機體中的抗感染作用及其機制,為臨床上免疫功能低下患者的治療提供新思路。研究目的:觀察IL-33在免疫功能抑制機體中的抗感染作用,并結(jié)合體外細(xì)胞實驗,探討IL-33對造血干細(xì)胞定向分化為中性粒細(xì)胞的影響,及IL-33對中性粒細(xì)胞殺菌、凋亡等生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)機制。研究方法:使用環(huán)磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,腹腔注射IL-33后感染MRSA,觀察小鼠存活率、體內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目以及細(xì)菌數(shù)目的變化,初步評價IL-33的療效;用percoll分離中性粒細(xì)胞,從細(xì)胞水平探討IL-33對中性粒細(xì)胞趨化、吞噬、殺傷功能的影響;用流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-33對中性粒細(xì)胞STAT3磷酸化、ROS生成及其凋亡的影響;免疫磁珠分選造血干細(xì)胞,使用細(xì)胞增殖標(biāo)記物Brd U檢測IL-33對細(xì)胞增殖的作用,集落形成實驗檢測IL-33對造血干細(xì)胞分化的影響;IL-33預(yù)處理的中性粒細(xì)胞采用粒細(xì)胞輸注法對免疫抑制小鼠進行治療,探討其抗感染作用。研究結(jié)果:1、IL-33增強免疫抑制小鼠的抗感染能力成功建立小鼠免疫抑制模型,IL-33治療后,免疫抑制小鼠在MRSA感染時存活率明顯提高,細(xì)菌負(fù)荷量降低,外周血中性粒細(xì)胞數(shù)目增多。免疫抑制小鼠中性粒細(xì)胞趨化、吞噬、殺傷功能均被抑制,而IL-33可提高中性粒細(xì)胞生物學(xué)功能。2、IL-33通過促進造血干細(xì)胞分化為中性粒細(xì)胞IL-33活化造血干細(xì)胞中JAK2-STAT3信號通路,同時也激活STAT3下游的C/EBPβ-c-myc,IL-33通過JAK2-STAT3-C/EBPβ-c-myc促進造血干細(xì)胞增殖及定向分化為中性粒細(xì)胞。3、IL-33增強中性粒細(xì)胞的功能IL-33通過JAK2-STAT3信號調(diào)控中性粒細(xì)胞ROS的生成從而增強其殺菌功能,同時也通過JAK2-STAT3通路,上調(diào)Bcl-2表達,下調(diào)Bax表達,從而抑制中性粒細(xì)胞的凋亡。4、輸注IL-33預(yù)處理的中性粒細(xì)胞對免疫抑制小鼠有保護作用IL-33預(yù)處理的中性粒細(xì)胞輸注到免疫小鼠體內(nèi),能顯著提高其存活率及抗感染能力。結(jié)論:IL-33通過促進造血干細(xì)胞向中性粒細(xì)胞分化而上調(diào)中性粒細(xì)胞的數(shù)目,并增強中性粒細(xì)胞的生物學(xué)功能,從而提高機體抗耐藥菌感染的能力。
【關(guān)鍵詞】：IL-33 免疫抑制 MRSA 中性粒細(xì)胞 造血干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 第一章 序言11-14
• 第二章 IL-33對免疫抑制小鼠抗感染的作用14-34
• 2.1 前言14
• 2.2 實驗材料14-17
• 2.2.1 實驗動物及菌株14
• 2.2.2 實驗試劑14-15
• 2.2.3 實驗儀器設(shè)備15-16
• 2.2.4 實驗溶液配制16-17
• 2.3 實驗方法17-24
• 2.3.1 免疫抑制模型的建立17
• 2.3.2 IL-33處理后白細(xì)胞、各類細(xì)胞變化情況17
• 2.3.3 金黃色葡萄球菌（MRSA）的活化與保存17
• 2.3.4 IL-33體內(nèi)治療及MRSA感染17-18
• 2.3.5 死亡曲線18
• 2.3.6 觀察指標(biāo)18-19
• 2.3.7 ELISA檢測細(xì)胞因子的表達19-20
• 2.3.8 中性粒細(xì)胞的分離20-21
• 2.3.9 Transwell遷移實驗檢測中性粒細(xì)胞趨化功能21
• 2.3.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞吞噬功能21-22
• 2.3.11 LB平板法檢測中性粒細(xì)胞殺傷功能22-23
• 2.3.12 流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞趨化因子CXCR2的表達23-24
• 2.3.13 統(tǒng)計分析24
• 2.4 實驗結(jié)果24-32
• 2.4.1 IL-33處理后白細(xì)胞、各類細(xì)胞變化情況24-25
• 2.4.2 小鼠存活率25-26
• 2.4.3 血液、腹腔液、各臟器細(xì)菌數(shù)目26-27
• 2.4.4 血液、腹腔液中性粒細(xì)胞數(shù)目27-28
• 2.4.5 細(xì)胞因子的表達28-29
• 2.4.6 IL-33對免疫抑制小鼠中性粒細(xì)胞趨化功能的影響29-30
• 2.4.7 IL-33對免疫抑制小鼠中性粒細(xì)胞吞噬功能的影響30-31
• 2.4.8 IL-33對免疫抑制小鼠中性粒細(xì)胞殺傷功能的影響31-32
• 2.5 討論32-34
• 第三章 IL-33對骨髓粒系分化的影響34-52
• 3.1 前言34
• 3.2 實驗材料34-37
• 3.2.1 實驗動物及菌株34
• 3.2.2 實驗試劑34-35
• 3.2.3 實驗儀器設(shè)備35-36
• 3.2.4 實驗溶液配制36-37
• 3.3 實驗方法37-45
• 3.3.1 造血干細(xì)胞的分離37-38
• 3.3.2 磁珠分選前后lin-細(xì)胞含量檢測38
• 3.3.3 造血干細(xì)胞中IL-33受體ST2的表達38
• 3.3.4 造血干細(xì)胞P-STAT3的表達38-39
• 3.3.5 STAT3調(diào)控CEBPβ、c-myc的表達39-40
• 3.3.6 PCR檢測CEBPβ、c-myc、CyclinD1的表達40-42
• 3.3.7 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞增殖的調(diào)控42-43
• 3.3.8 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞細(xì)胞周期的影響43-44
• 3.3.9 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞分化的影響44-45
• 3.3.10 統(tǒng)計分析45
• 3.4 實驗結(jié)果45-50
• 3.4.1 磁珠分選前后lin-細(xì)胞純度的檢測45-46
• 3.4.2 造血干細(xì)胞ST2的表達及STAT3磷酸化情況46
• 3.4.3 STAT3調(diào)控CEBPβ、c-myc的表達46-47
• 3.4.4 PCR檢測CEBPβ、c-myc、CyclinD1的表達47-48
• 3.4.5 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞增殖的調(diào)控48
• 3.4.6 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞細(xì)胞周期的影響48-50
• 3.4.7 IL-33通過STAT3信號對造血干細(xì)胞分化的影響50
• 3.5 討論50-52
• 第四章 IL-33對中性粒細(xì)胞功能的影響52-62
• 4.1 前言52
• 4.2 實驗材料52-54
• 4.2.1 實驗動物及菌株52
• 4.2.2 實驗試劑52-53
• 4.2.3 實驗儀器設(shè)備53
• 4.2.4 實驗溶液配制53-54
• 4.3 實驗方法54-57
• 4.3.1 金黃色葡萄球菌（MRSA）的活化與保存54
• 4.3.2 中性粒細(xì)胞的分離54
• 4.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測P-STAT3的表達54-55
• 4.3.4 STAT3信號通路對中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響55-56
• 4.3.5 IL-33通過STAT3信號對中性粒細(xì)胞凋亡的影響56-57
• 4.3.6 IL-33通過STAT3信號影響凋亡相關(guān)基因的表達57
• 4.3.7 統(tǒng)計分析57
• 4.4 實驗結(jié)果57-61
• 4.4.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測P-STAT3的表達情況57-58
• 4.4.2 STAT3信號通路對中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響58-59
• 4.4.3 IL-33通過STAT3信號對中性粒細(xì)胞凋亡的影響59-60
• 4.4.4 IL-33通過STAT3信號影響凋亡相關(guān)基因的表達60-61
• 4.5 討論61-62
• 第五章 中性粒細(xì)胞過繼對免疫抑制小鼠抗感染的作用62-72
• 5.1 前言62
• 5.2 實驗材料62-64
• 5.2.1 實驗動物及菌株62
• 5.2.2 實驗試劑62-63
• 5.2.3 實驗儀器設(shè)備63
• 5.2.4 實驗溶液配制63-64
• 5.3 實驗方法64-67
• 5.3.1 免疫抑制模型的建立64
• 5.3.2 金黃色葡萄球菌（MRSA）的活化與保存64
• 5.3.3 中性粒細(xì)胞的分離64
• 5.3.4 中性粒細(xì)胞預(yù)處理64-65
• 5.3.5 中性粒細(xì)胞過繼及MRSA感染65
• 5.3.6 死亡曲線65
• 5.3.7 檢測指標(biāo)65-66
• 5.3.8 中性粒細(xì)胞在免疫抑制小鼠體內(nèi)的遷移66-67
• 5.3.9 統(tǒng)計分析67
• 5.4 實驗結(jié)果67-71
• 5.4.1 小鼠存活率67-68
• 5.4.2 血液、腹腔液、各臟器細(xì)菌數(shù)目68-69
• 5.4.3 血液、腹腔液中性粒細(xì)胞數(shù)目69-70
• 5.4.4 中性粒細(xì)胞在免疫抑制小鼠體內(nèi)的遷移70-71
• 5.5 討論71-72
• 全文總結(jié)72-73
• 參考文獻73-77
• 附錄1英文縮寫語中文對照表77-79
• 附錄2攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文79-80
• 致謝80

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