本文關(guān)鍵詞：Claviceps paspali菌的選育及多態(tài)性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：麥角科的麥角菌屬真菌是麥角堿的主要生產(chǎn)者,Claviceps paspali是其中重要的一類麥角菌,其主要代謝產(chǎn)物是麥角酰胺類生物堿。鑒于麥角堿在毒理學(xué)和藥理學(xué)等方面的重要作用,目前廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代醫(yī)藥。麥角堿與血清素、多巴胺受體和腎上腺素受體一起作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),主要用于治療產(chǎn)后出血、抗高血壓、帕金森癥和抑制垂體激素分泌等。目前,國內(nèi)的麥角資源較少,同時麥角菌種的嚴(yán)重退化等問題導(dǎo)致無法大規(guī)模發(fā)酵麥角菌獲得麥角堿,因而麥角堿類藥物的來源依然依賴于進(jìn)口。本課題以實驗室保藏的Claviceps paspali為材料進(jìn)行篩選和選育。建立了Claviceps paspali的高通量篩選法,通過24孔板高通量篩選法和搖瓶篩選法篩選到了一株產(chǎn)堿量較高且產(chǎn)堿較穩(wěn)定的菌株C6,菌株產(chǎn)堿量為101.33 μg/mL。本研究以C6菌株為出發(fā)菌株進(jìn)行化學(xué)誘變育種,誘變劑選取吖啶橙、硫酸二甲酯和MNNG,誘變育種后各挑選120株菌株進(jìn)行24孔板高通量篩選。其中MNNG誘變育種篩選到一株產(chǎn)孢菌株C6-28,且該菌株傳代穩(wěn)定性較好,與C6菌株相比產(chǎn)堿量提高了約50%。對C6-28菌株進(jìn)行種子和發(fā)酵條件考察,并嘗試采用Plackttt-Burman實驗對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行條件優(yōu)化。研究確定了最適種子生長時間、孢子接種量、種子接種量和發(fā)酵時間,同時確定M培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基,M2培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基。本研究以產(chǎn)孢的C6-28菌株為材料,誘變材料為該菌株的孢子,對孢子進(jìn)行計數(shù)從而達(dá)到定量誘變效果。經(jīng)過四次MNNG誘變育種,篩選到高產(chǎn)菌株B3-24,菌株產(chǎn)堿量為815.5μg/mL,與出發(fā)菌株C6相比產(chǎn)堿量提高約8倍。該菌株菌絲體粗壯,分節(jié)明顯,多為串珠狀菌絲,這與高產(chǎn)菌株的顯微形態(tài)描述相一致。研究結(jié)果表明用MNNG 對 Claviceps paspali菌株的孢子進(jìn)行誘變育種效果較好。F33菌株的誘變育種,篩選出5種不同形態(tài)的誘變菌株,采用改進(jìn)的氯化芐法提取這六種不同形態(tài)菌株的DNA。利用RAPD技術(shù)對六種不同形態(tài)的菌株進(jìn)行多態(tài)性分析,根據(jù)RAPD擴(kuò)增結(jié)果構(gòu)建菌株的聚類分析樹狀圖,從基因水平進(jìn)一步研究各菌株之間的差異性。
【關(guān)鍵詞】：Claviceps paspali 高通量篩選 誘變育種 條件考察 多態(tài)性分析
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-13
• 第1章 緒論13-36
• 1.1 研究背景13-15
• 1.2 麥角堿簡介15-21
• 1.2.1 麥角堿的分布和結(jié)構(gòu)15-19
• 1.2.2 麥角堿的生物活性19-21
• 1.3 不同真菌中麥角堿的生物合成途徑21-29
• 1.3.1 麥角堿四環(huán)麥角靈環(huán)的生物合成21-24
• 1.3.2 麥角堿的生物合成分支途徑24-29
• 1.4 菌種選育方法29-31
• 1.4.1 自然選育29
• 1.4.2 誘變育種29-31
• 1.5 狀真菌遺傳操作31-32
• 1.5.1 遺傳操作簡介31
• 1.5.2 高通量篩選方法31-32
• 1.6 RAPD技術(shù)在真菌分類鑒定上的應(yīng)用32-34
• 1.6.1 RAPD技術(shù)簡介32-33
• 1.6.2 RAPD技術(shù)應(yīng)用33-34
• 1.7 論文設(shè)計思想及主要內(nèi)容34-36
• 1.7.1 論文設(shè)計思想34-35
• 1.7.2 論文主要內(nèi)容35-36
• 第2章 雀稗麥角菌高通量篩選方法的建立36-46
• 2.1 實驗材料36-37
• 2.1.1 實驗菌株36
• 2.1.2 實驗儀器36
• 2.1.3 實驗試劑36-37
• 2.1.4 培養(yǎng)基37
• 2.2 實驗方法37-40
• 2.2.1 菌株的傳代和保存37-38
• 2.2.2 麥角堿含量測定方法38-39
• 2.2.3 高通量篩選方法39
• 2.2.4 搖瓶篩選法39-40
• 2.2.5 高產(chǎn)菌株傳代穩(wěn)定性考察40
• 2.3 實驗結(jié)果40-44
• 2.3.1 菌株的形態(tài)特征40-41
• 2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立41
• 2.3.3 高通量篩選結(jié)果41-43
• 2.3.4 搖瓶篩選結(jié)果43-44
• 2.3.5 高產(chǎn)菌株傳代穩(wěn)定性考察結(jié)果44
• 2.4 小結(jié)與討論44-46
• 第3章 C6菌株的誘變育種46-58
• 3.1 實驗材料46-47
• 3.1.1 實驗菌株46
• 3.1.2 實驗儀器46
• 3.1.3 實驗試劑46
• 3.1.4 培養(yǎng)基46-47
• 3.2 實驗方法47-51
• 3.2.1 吖啶橙誘變育種47-48
• 3.2.2 硫酸二甲酯誘變育種48-49
• 3.2.3 MNNG誘變育種49-51
• 3.2.4 高產(chǎn)誘變菌株穩(wěn)定性考察51
• 3.3 實驗結(jié)果51-56
• 3.3.1 吖啶橙誘變育種結(jié)果51-53
• 3.3.2 硫酸二甲酯誘變育種結(jié)果53-54
• 3.3.3 MNNG誘變育種結(jié)果54-55
• 3.3.4 高產(chǎn)誘變菌株穩(wěn)定性考察結(jié)果55-56
• 3.4 小結(jié)與討論56-58
• 第4章 高產(chǎn)菌株的條件考察58-72
• 4.1 實驗材料58-59
• 4.1.1 實驗菌株58
• 4.1.2 實驗儀器58
• 4.1.3 實驗試劑58
• 4.1.4 培養(yǎng)基58-59
• 4.2 實驗方法59-64
• 4.2.1 種子條件考察59-61
• 4.2.2 發(fā)酵條件考察61-64
• 4.3 實驗結(jié)果64-70
• 4.3.1 種子條件考察結(jié)果64-66
• 4.3.2 發(fā)酵條件考察結(jié)果66-70
• 4.4 小結(jié)與討論70-72
• 第5章 C6-28菌株的孢子誘變育種72-82
• 5.1 實驗材料72-73
• 5.1.1 實驗菌株72
• 5.1.2 實驗儀器72
• 5.1.3 實驗試劑72
• 5.1.4 培養(yǎng)基72-73
• 5.2 實驗方法73-76
• 5.2.1 孢子的第一次誘變育種73-74
• 5.2.2 孢子的第二次誘變育種74
• 5.2.3 孢子的第三次誘變育種74-75
• 5.2.4 孢子的第四次誘變育種75-76
• 5.2.5 高產(chǎn)誘變菌株傳代穩(wěn)定性考察76
• 5.3 實驗結(jié)果76-81
• 5.3.1 孢子的第一次誘變育種結(jié)果76-77
• 5.3.2 孢子的第二次誘變育種結(jié)果77-78
• 5.3.3 孢子的第三次誘變育種結(jié)果78-79
• 5.3.4 孢子的第四次誘變育種結(jié)果79-80
• 5.3.5 高產(chǎn)誘變菌株傳代穩(wěn)定性考察結(jié)果80-81
• 5.4 小結(jié)與討論81-82
• 第6章 不同形態(tài)Claviceps paspali的多態(tài)性分析82-96
• 6.1 實驗材料82-83
• 6.1.1 實驗菌株82
• 6.1.2 實驗儀器82
• 6.1.3 實驗試劑82-83
• 6.1.4 培養(yǎng)基83
• 6.2 實驗方法83-88
• 6.2.1 不同形態(tài)菌株的產(chǎn)堿量測定83
• 6.2.2 菌株基因組DNA的提取83-86
• 6.2.3 RAPD引物篩選86
• 6.2.4 RAPD擴(kuò)增體系優(yōu)化86-87
• 6.2.5 RAPD擴(kuò)增程序優(yōu)化87
• 6.2.6 RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析87
• 6.2.7 RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)據(jù)分析87-88
• 6.3 實驗結(jié)果88-94
• 6.3.1 不同形態(tài)菌株的產(chǎn)堿量測定結(jié)果88
• 6.3.2 菌株基因組DNA的提取結(jié)果88-89
• 6.3.3 RAPD引物篩選結(jié)果89
• 6.3.4 RAPD擴(kuò)增體系優(yōu)化結(jié)果89-90
• 6.3.5 RAPD擴(kuò)增程序優(yōu)化結(jié)果90
• 6.3.6 RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析結(jié)果90-92
• 6.3.7 RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)據(jù)分析結(jié)果92-94
• 6.4 小結(jié)與討論94-96
• 結(jié)論96-98
• 致謝98-99
• 參考文獻(xiàn)99-106
• 附錄106-110
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及科研成果110

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1 李源祥,蔣興村,李金國,邱慧,李國良,謝獎林;水稻空間誘變育種的研究[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;1998年01期

2 戈梅;夏興;凌良飛;陳代杰;;睪酮轉(zhuǎn)化菌的誘變育種[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2007年07期

3 李金國,王培生,張健,蔣興村;中國農(nóng)作物航空航天誘變育種的進(jìn)展及其前景[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;1999年06期

4 俞敦年,賀永昌,王雅言,李占琮,鄭淳于,張付中;青霉素產(chǎn)生菌產(chǎn)黃青霉綠色孢子菌種194誘變育種的初步研究[J];抗生素;1979年03期

5 于廣成,姚廣華,付林,彭桂賢,方淑環(huán),孫艷榮,李相超,李志剛,徐思,梁月云;氮離子注入灰黃霉素產(chǎn)生菌的誘變育種[J];中國抗生素雜志;2003年02期

6 劉垂s，

本文編號：448698