本文關鍵詞：外周大麻素1型受體抑制劑的篩選及減肥作用機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用高脂飲食誘導的小鼠肥胖模型觀察新合成的大麻素1型受體(cannabinoid 1 receptor,CB1R)抑制劑的減肥作用及對抑郁行為的影響,篩選出減肥效果好,中樞副作用低的外周CB1受體抑制劑。另一方面,研究其調節(jié)脂代謝的機制,為新型外周CB1受體抑制劑應用于肥胖的治療提供新的理論基礎和實驗依據(jù)。方法:在體實驗:選用高脂飲食誘導成功的肥胖小鼠,給予新化合物,并記錄給藥組和對照組每天小鼠體重變化情況,在給藥18天后,采用高架十字迷宮實驗(EPM)、強迫游泳實驗(FST)、懸尾實驗(TST)進行抑郁行為學的檢測。測定小鼠空腹血糖和胰島素抵抗(ITT)及葡萄糖耐受實驗(GTT)。測定血清中甘油三脂、總膽固醇、HDL、LDL及LDH、ALT、AST等生化指標。稱量小鼠生殖器周圍脂肪組織及肝臟。采用HE染色,觀察各組小鼠脂肪細胞及肝細胞的形態(tài)。離體實驗:采用PA-Na(0.5 mM)處理HepG-2細胞24 h造成脂肪肝的細胞模型,再加入不同濃度(3、10、30μM)的ZH-101-S處理細胞24小時。采用MTT法檢測細胞的活性,試劑盒檢測甘油三脂(TG)、總膽固醇(CHOL)代謝指標水平。線粒體數(shù)量采用Mito Tracker Red染色法檢測,熒光素酶法檢測細胞中ATP含量,H2DCF-DA熒光探針法檢測細胞中ROS的含量,Western blotting法檢測線粒體膜上CB1受體的表達及p-AMPK、PGC-1α表達水平。結果:在體實驗:持續(xù)給予CB1受體抑制劑ZH-101-S 30mg/kg的小鼠體重較高脂對照組下降趨勢明顯。EPM、FST、TST等行為學模型結果顯示,與利莫那班組相比,外周CB1受體抑制劑ZH-101-S可增加小鼠在EPM中進入開放臂的頻率、時間和運動距離,降低了小鼠在FST、TST中的不動時間。ZH-101-S與利莫那班一樣,具有改善高脂小鼠胰島素抵抗及葡萄糖耐受的情況。并可降低小鼠血清CHOL、TG、Glu、LDL、AST、ALT、LDH水平,升高HDL-C,減小脂肪細胞的直徑,改善肝臟組織的形態(tài),改善脂質代謝及肝損傷。離體實驗:MTT結果表明0.5 m M PA-Na及3、10、30μM ZH-101-S對Hep G-2細胞基本無損傷。油紅染色結果顯示,與PA-Na處理組相比,30μM ZH-101-S處理使細胞內脂滴的含量顯著減少了30.0%。與PA-Na處理組相比,30μM ZH-101-S處理使細胞內CHOL降低了30.0%,TG水平降低了63.6%,且TG水平呈濃度依賴性降低。Western blot結果顯示,肝細胞線粒體膜上存在CB1受體的表達,并且ZH-101-S可促進P-AMPK、PGC-1α的表達。與PA-Na處理組相比,ZH-101-S處理可使線粒體數(shù)目增加、ATP合成增加及ROS含量減少,線粒體功能改善。結論:ZH-101-S給藥可顯著減輕肥胖小鼠體重,改善脂代謝,在保持利莫那班減肥效應的同時避免了其致抑郁樣的副作用。其減肥及改善脂代謝的作用機制可能與ZH-101-S作用于線粒體外膜上的CB1受體,促進線粒體功能,增強能量代謝有關。
【關鍵詞】：大麻素1型受體抑制劑 減肥 利莫那班 線粒體
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 第一章 引言13-24
• 1.1 大麻13
• 1.2 大麻素13
• 1.3 大麻素受體13-15
• 1.3.1 大麻素受體的分布13-14
• 1.3.2 CB1受體的功能14
• 1.3.3 mtCB1受體14-15
• 1.4 肥胖15-20
• 1.4.1 肥胖的發(fā)生15
• 1.4.2 肥胖并發(fā)癥15
• 1.4.3 肥胖的發(fā)病機制15-17
• 1.4.4 肥胖與胰島素抵抗17
• 1.4.5 肥胖與線粒體17-18
• 1.4.6 肥胖與CB1受體18-19
• 1.4.7 肥胖的治療藥物19-20
• 1.5 利莫那班20-22
• 1.5.1 利莫那班的產(chǎn)生20-21
• 1.5.2 利莫那班的減肥作用及機制21
• 1.5.3 利莫那班改善非酒精性脂肪肝21-22
• 1.5.4 利莫那班的副作用22
• 1.6 本課題的研究思路22-24
• 第二章 作用于外周CB1受體抑制劑篩選24-31
• 2.1 實驗材料24-25
• 2.1.1 試劑24-25
• 2.1.2 儀器25
• 2.1.3 實驗動物25
• 2.2 實驗方法25-27
• 2.2.1 動物飼養(yǎng)25-26
• 2.2.2 高架十字迷宮實驗（EPM）26
• 2.2.3 強迫游泳實驗（FST）26
• 2.2.4 懸尾實驗（TST）26-27
• 2.2.5 統(tǒng)計27
• 2.3 實驗結果27-30
• 2.3.1 ZH101S不影響小鼠進入開放臂的頻率、時間及運動距離27-28
• 2.3.2 ZH101S不影響小鼠在FST中的固定不動時間28-29
• 2.3.3 ZH101S不影響小鼠在TST中的固定不動時間29-30
• 2.4 本章小結30-31
• 第三章 ZH101S降脂減肥作用研究31-44
• 3.1 實驗材料31-32
• 3.1.1 試劑31-32
• 3.1.2 化合物的配制32
• 3.1.3 儀器32
• 3.1.4 實驗動物32
• 3.2 實驗方法32-34
• 3.2.1 小鼠肥胖模型的建立32-33
• 3.2.2 分組設計33
• 3.2.3 小鼠的體重及臟器指數(shù)的測定33
• 3.2.4 肝及脂肪病理切片的觀察33-34
• 3.2.5 血脂代謝指標的檢測34
• 3.2.6 葡萄糖耐受實驗(GTT)及胰島素耐受實驗(ITT)34
• 3.2.7 統(tǒng)計學方法34
• 3.3 實驗結果34-42
• 3.3.1 ZH101S給藥后降低肥胖小鼠體重34-36
• 3.3.2 ZH101S對小鼠附睪脂肪的影響36-39
• 3.3.3 ZH101S改善肥胖小鼠血脂代謝39-40
• 3.3.4 ZH101S改善肥胖小鼠肝臟病變40-41
• 3.3.5 ZH101S改善肥胖小鼠的胰島素抵抗41-42
• 3.4 本章小結42-44
• 第四章 ZH101S降脂減肥作用線粒體機制的研究44-63
• 4.1 實驗材料44-47
• 4.1.1 試劑44-46
• 4.1.2 儀器46-47
• 4.1.3 細胞株47
• 4.2 實驗方法47-51
• 4.2.1 細胞培養(yǎng)47
• 4.2.2 PA-Na對HepG-2 細胞的損傷作用47
• 4.2.3 ZH101S對HepG-2 細胞的作用47
• 4.2.4 油紅O染色觀察細胞內脂滴47-48
• 4.2.5 細胞內脂肪積聚的定量檢測48
• 4.2.6 細胞內TG、CHOL指標檢測48
• 4.2.7 細胞線粒體分離48-49
• 4.2.8 細胞全蛋白的提取49-50
• 4.2.9 Western blot分析蛋白表達50
• 4.2.10 熒光素-熒光素酶法檢測ATP的生成50
• 4.2.11 DCFH-DA熒光探針測定細胞內ROS的生成50-51
• 4.2.12 MitoTracker Red染色法檢測線粒體數(shù)量51
• 4.2.13 細胞活性檢測 (MTT實驗)51
• 4.2.14 統(tǒng)計學方法51
• 4.3 實驗結果51-61
• 4.3.1 PA-Na及ZH101S的細胞毒檢測51-53
• 4.3.2 ZH101S可對抗PA-Na誘導的HepG2細胞脂肪變性53-55
• 4.3.3 線粒體外膜存在CB1受體的表達55-56
• 4.3.4 ZH101S可對抗PA-Na誘導的HepG2細胞線粒體數(shù)量減少56-57
• 4.3.5 ZH101S可促進PGC-1a及p-AMPK蛋白的表達57-59
• 4.3.6 ZH101S可對抗PA-Na誘導的HepG2細胞內ATP生成減少59-60
• 4.3.7 ZH101S可對抗PA-Na誘導的HepG2細胞ROS含量的增多60-61
• 4.4 本章小結61-63
• 第五章 討論63-66
• 本文創(chuàng)新點66-67
• 結論與展望67-68
• 參考文獻68-75
• 致謝75-76
• 在校期間發(fā)表的文章76

  本文關鍵詞：外周大麻素1型受體抑制劑的篩選及減肥作用機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：392876