本文關(guān)鍵詞：CD38缺失對小鼠巨噬細胞TLR2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:CD38是一種以NAD+為底物,具有環(huán)化和水解作用的雙功能酶,可分別催化NAD+合成c ADPR和水解NAD+或c ADPR成ADPR。敲除小鼠CD38基因可導(dǎo)致組織中NAD+濃度顯著升高,Sirt1活性上升。本實驗室的前期工作顯示:CD38基因缺失可明顯加重高脂飲食誘導(dǎo)的Apo E基因敲除小鼠的動脈粥樣硬化損傷,并觀察到大量巨噬細胞在損傷區(qū)域的侵潤,提示巨噬細胞在動脈粥樣硬化中發(fā)揮重要作用。巨噬細胞在不同的微環(huán)境下可極化為2種類型:以分泌促炎因子為主的M1型和以分泌抗炎因子為主的M2型。存在于巨噬細胞膜上的Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)通�？赏ㄟ^促進炎癥介質(zhì)的釋放來抵御外來侵害。TLR2的激活可使巨噬細胞產(chǎn)生促炎或抗炎作用,探索CD38缺失對巨噬細胞TLR2作用的影響及機制具有重要意義。方法和結(jié)果:1.CD38-/-小鼠原代的腹腔巨噬細胞的培養(yǎng)、分離和功能分析:Western Blot結(jié)果顯示,敲除CD38基因可明顯抑制小鼠巨噬細胞TLR2、Sirt1和p65蛋白表達;2.RAW264.7細胞的培養(yǎng)和功能分析:Real-time PCR結(jié)果表明,TLR2激動劑HKLM可使RAW264.7細胞中的IL-1βm RNA表達水平下調(diào),而IL-10 m RNA表達水平上升;3.抑制RAW264.7細胞CD38基因表達及功能分析:利用CRISPR/d Cas9技術(shù)抑制RAW264.7細胞CD38基因表達并采用Bio Ray的蛋白芯片檢測炎性因子,觀察到抑制CD38基因表達可使MCP-1、IL-1alpha、MIP-1 alpha、RANTES、G-CSF蛋白表達顯著升高,而Eotaxin2、Fas Ligand、Fractalkine、IL-9、LIX、IL-12 70蛋白表達下降;4.CD38缺失調(diào)節(jié)巨噬細胞功能的機制分析:Sirt1激動劑白藜蘆醇(RSV)顯著抑制RAW264.7細胞TLR2、p65和Ac-p65蛋白表達,而Sirt1抑制劑尼克酰胺(NAM)則可明顯促進RAW264.7細胞的TLR2蛋白表達。此外,NF-κB抑制劑PDTC可顯著抑制RAW264.7細胞TLR2的m RNA及蛋白表達。結(jié)論:1.敲除小鼠CD38基因可明顯下調(diào)巨噬細胞的TLR2、Sirt1和p65表達以及影響巨噬細胞相關(guān)炎性因子如IL-1β或抗炎因子如IL-10的表達和分泌,提示CD38介導(dǎo)的TLR2激活可能參與巨噬細胞的炎癥反應(yīng)。2.CD38缺失調(diào)節(jié)巨噬細胞功能的機制可能與CD38缺失上調(diào)Sirt1活性,使NF-κB去乙�；�,阻礙NF-κB對TLR2的轉(zhuǎn)錄,最終下調(diào)TLR2蛋白的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD38 巨噬細胞 TLR2 炎癥反應(yīng)
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-15
• 1.1 研究意義11-12
• 1.2 TLR2 與炎癥反應(yīng)的關(guān)系12
• 1.3 CD38 與Sirt112-15
• 第2章 CD38 缺失對TLR2 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響15-40
• 2.1 引言15
• 2.2 材料和方法15-27
• 2.2.1 實驗動物、細胞株和質(zhì)粒15
• 2.2.2 主要試劑和儀器15-16
• 2.2.3 小鼠原代巨噬細胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.4 RAW264.7 細胞培養(yǎng)17
• 2.2.5 巨噬細胞CD38 干擾模型建立17-22
• 2.2.6 TLR2 介導(dǎo)的巨噬細胞炎癥反應(yīng)模型建立22
• 2.2.7 蛋白提取和Western Blot22-24
• 2.2.8 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和Real-time PCR24-26
• 2.2.9 炎癥因子檢測26-27
• 2.3 結(jié)果27-33
• 2.3.1 CD38 缺失對小鼠巨噬細胞TLR2 蛋白表達的影響27-28
• 2.3.2 TLR2 激動劑對RAW264.7 細胞炎癥因子mRNA表達影響28-29
• 2.3.3 RAW264.7 細胞CD38 干擾模型的建立和驗證29-31
• 2.3.4 CD38 缺失對RAW264.7 細胞炎癥反應(yīng)的影響31-33
• 2.4 討論33-40
• 第3章 CD38 基因缺失對Sirt1/NF-κB/TLR2 信號通路調(diào)控機制40-45
• 3.1 引言40
• 3.2 材料和方法40-41
• 3.2.1 主要試劑40
• 3.2.2 CD38 基因缺失對小鼠巨噬細胞Sirt1/NF-κB信號通路的影響40
• 3.2.3 Sirt1 激動劑和抑制劑對RAW264.7 細胞TLR2 表達的影響40-41
• 3.2.4 NF-κB抑制劑對RAW264.7 細胞TLR2 表達的影響41
• 3.3 實驗結(jié)果41-43
• 3.3.1 CD38 基因缺失對小鼠巨噬細胞Sirt1/NF-κB信號通路的影響41-42
• 3.3.2 Sirt1 激動劑和抑制劑對RAW264.7 細胞TLR2 表達的影響42
• 3.3.3 NF-κB抑制劑對RAW264.7 細胞TLR2 表達的影響42-43
• 3.4 討論43-45
• 第4章 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻47-51
• 綜述51-58
• 參考文獻57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 常曉彤;輦曉峰;王振輝;;Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進展[J];生理科學進展;2011年05期

2 ;TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J];Science China(Life Sciences);2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：CD38缺失對小鼠巨噬細胞TLR2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：388691